戈舍瑞林對前列腺增生模型大鼠血管生長因子和免疫功能的影響

奚 煒，徐 幫，張永華，趙 倩，陳進兵（1.三峽大學人民醫(yī)院藥學部，湖北宜昌 443000；.宜昌市第一人民醫(yī)院藥劑科，湖北宜昌 443000）

戈舍瑞林對前列腺增生模型大鼠血管生長因子和免疫功能的影響

奚 煒1＊，徐 幫2，張永華2，趙 倩2，陳進兵2（1.三峽大學人民醫(yī)院藥學部，湖北宜昌 443000；2.宜昌市第一人民醫(yī)院藥劑科，湖北宜昌 443000）

目的：研究戈舍瑞林對前列腺增生模型大鼠血管生長因子及免疫功能的影響。方法：取大鼠建立前列腺增生模型，然后隨機分為模型組和戈舍瑞林低、中、高劑量組（0.4、0.8、1.2mg/kg），另取正常大鼠作為正常對照組，每組10只。正常對照組和模型組大鼠ig生理鹽水，戈舍瑞林各劑量組大鼠ig相應劑量的藥物，每日1次，連續(xù)25 d。檢測各組大鼠前列腺體積、濕質(zhì)量、前列腺指數(shù)和前列腺組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）、成纖維細胞生長因子（FGF）、CD4、CD8的陽性細胞面積。結(jié)果：與正常對照組比較，模型組大鼠前列腺體積、濕質(zhì)量、前列腺指數(shù)和VEGF、TGF-β1、FGF、CD4、CD8陽性細胞面積均增加（P＜0.05）。與模型組比較，戈舍瑞林各劑量組大鼠上述指標均改善（P＜0.05），且中、高劑量組較低劑量組改善效果更明顯（P＜0.05），中、高劑量組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結(jié)論：戈舍瑞林可改善大鼠的前列腺增生，減少前列腺組織中VEGF表達并調(diào)節(jié)免疫功能。

前列腺增生；戈舍瑞林；大鼠；血管內(nèi)皮生長因子；免疫功能

前列腺增生（Benign prostatic hyperplasia）是臨床上常見的男性疾病，多發(fā)生于老年男性且近年來的發(fā)病率呈升高趨勢。BPH的發(fā)病機制尚未完全明確，近來的研究證實，前列腺組織內(nèi)微血管密度增加是造成前列腺增生的重要因素[1]。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）、成纖維細胞生長因子（FGF）在前列腺增生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用，前列腺組織中高表達的VEGF、TGF-β1、FGF有利于前列腺組織的增生，是造成BPH的重要致病因子[2-3]。抑制前列腺組織中的血管新生是臨床治療前列腺增生的重要靶點。戈舍瑞林是一類促黃體生成素釋放激素（Luteinzing hormone-releasing hormone，LHRH）的類似物，對睪酮的分泌具有抑制作用[4]。本文通過動物實驗的方法，探討戈舍瑞林對前列腺增生模型大鼠血管生長因子和免疫功能的影響，為臨床前列腺增生的治療提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

YB502動物天平（上海滬粵明科學儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

丙酸睪丸酮注射液（上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號：H31020524，規(guī)格：1m L∶25mg）；戈舍瑞林緩釋植入劑（英國AstraZeneca公司，批號：J20122205；規(guī)格：每支10.8mg）；VEGF、TGF-β1、FGF、CD4、CD8抗體（美國Santa Cruz公司）；SP免疫組化染色試劑盒（上海研卉生物科技有限公司）。

1.3 動物

SD大鼠50只，SPF級，♂，體質(zhì)量220～280 g，購于武漢大學動物實驗中心，許可證號：SCXK（鄂）2015-1012。大鼠飼養(yǎng)在SPF級的動物房中，自由進食進水。本次研究報請醫(yī)院動物倫理委員會批準。

2 方法

2.1 前列腺增生模型的建立

對大鼠采用頸部ih丙酸睪丸酮注射液3mg/kg，連續(xù)25 d建模。隨機抽取1只斷頸處死，解剖腹腔，見前列腺體積明顯增大、質(zhì)地硬實且有彈性、血管明顯增粗，病理檢查可見前列腺呈低柱狀突起，腔內(nèi)見多數(shù)乳頭狀增生，腹腔有深紅色濃厚分泌物，腺體周圍組織增生3～5層，間質(zhì)增生明顯，則表明造模成功。

2.2 分組與給藥

將建模成功的大鼠按隨機數(shù)字表法分為模型組和戈舍瑞林低、中、高劑量組（0.4、0.8、1.2mg/kg），另取正常大鼠作為正常對照組，每組10只。正常對照組大鼠不作任何處理；戈舍瑞林各劑量組大鼠ig相應劑量的戈舍瑞，每日1次，給藥中劑量按臨床常用劑量換算；模型組大鼠ig生理鹽水（15m L/kg），每日1次，均連續(xù)25 d。

2.3 指標檢測方法

末次給藥后24 h，稱量各組大鼠體質(zhì)量并處死，解剖觀察并測定前列腺體積、色澤、質(zhì)地、濕質(zhì)量，計算前列腺指數(shù)，前列腺指數(shù)＝前列腺濕質(zhì)量（mg）/體質(zhì)量（g）。

前列腺稱質(zhì)量后，分為兩份，一份用10%多聚甲醛固定并制作石蠟切片，另一份采用SP免疫組化試劑盒說明書操作檢測其中VEGF、TGF-β1、FGFCD4、CD8陽性細胞面積。

2.4 統(tǒng)計學方法

3 結(jié)果

3.1 前列腺指標檢測結(jié)果

正常對照組大鼠前列腺組織色澤鮮艷，質(zhì)地柔軟；模型組大鼠前列腺組織顏色紫暗，局部充血，質(zhì)地較軟，或可觸及到小節(jié)；戈舍瑞林各劑量組大鼠前列腺組織色澤、質(zhì)地介于對照組與模型組之間。與正常對照組比較，模型組大鼠前列腺體積、濕質(zhì)量、前列腺指數(shù)均增加（P＜0.05）。5組大鼠間前列腺體積、濕質(zhì)量、前列腺指數(shù)差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，戈舍瑞林各劑量組大鼠前列腺體積、濕質(zhì)量、前列腺指數(shù)均降低（P＜0.05）。與戈舍瑞林低劑量組比較，戈舍瑞林中、高劑量組大鼠前列腺體積、濕質(zhì)量、前列腺指數(shù)均降低（P＜0.05），中、高劑量組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。各組大鼠前列腺體積、濕質(zhì)量、前列腺指數(shù)的測定結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠前列腺體積、濕質(zhì)量、前列腺指數(shù)的測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 1 Determ ination results of prostate volume，wet weight，prostatic index of rats in each group（±s，n＝10）

表1 各組大鼠前列腺體積、濕質(zhì)量、前列腺指數(shù)的測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 1 Determ ination results of prostate volume，wet weight，prostatic index of rats in each group（±s，n＝10）

注：與正常對照組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與戈舍瑞林低劑量組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal control group，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05；vs.goserelin low-dosegroup，ΔP＜0.05

前列腺指數(shù)，mg/g 2.67±0.32 3.86±0.45＊1.54±0.42#3.11±0.34#Δ3.13±0.33#Δ8.123＜0.05組別正常對照組模型組戈舍瑞林低劑量組戈舍瑞林中劑量組戈舍瑞林高劑量組FP前列腺體積，cm20.532±0.056 0.854±0.086＊0.752±0.072#0.678±0.065#Δ0.672±0.063#Δ12.685＜0.01濕質(zhì)量，mg 626.35±52.14 905.82±86.24＊796.35±72.14#732.14±63.21#Δ728.21±62.58#Δ14.582＜0.01

3.2 VEGF、TGF-β1、FGF陽性細胞面積檢測結(jié)果

5組大鼠前列腺組織中VEGF、TGF-β1、FGF陽性細胞面積差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與正常對照組比較，模型組大鼠前列腺組織中VEGF、TGF-β1、FGF陽性細胞面積均增加（P＜0.05）。與模型組比較，戈舍瑞林各劑量組大鼠前列腺組織中VEGF、TGF-β1、FGF陽性細胞面積均減?。≒＜0.05）。與戈舍瑞林低劑量組比較，戈舍瑞林中、高劑量組大鼠前列腺組織中VEGF、TGF-β1、FGF陽性細胞面積均減?。≒＜0.05），中、高劑量組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。各組大鼠前列腺組織中VEGF、TGF-β1、FGF陽性細胞面積測定結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠前列腺組織中VEGF、TGF-β1、FGF陽性細胞面積測定結(jié)果（±s，n＝10，cm2）Tab 2 Determ ination results of positive cell area of VEGF，TGF-β1and FGF in prostate tissue of rats in each group（±s，n＝10，cm2）

表2 各組大鼠前列腺組織中VEGF、TGF-β1、FGF陽性細胞面積測定結(jié)果（±s，n＝10，cm2）Tab 2 Determ ination results of positive cell area of VEGF，TGF-β1and FGF in prostate tissue of rats in each group（±s，n＝10，cm2）

注：與正常對照組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與戈舍瑞林低劑量組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal control group，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05；vs.goserelin low-dosegroup，ΔP＜0.05

FGF陽性細胞面積2.53±0.47 24.36±3.44＊19.12±3.02#15.08±2.04#Δ14.85±2.12#Δ3.823＜0.05組別正常對照組模型組戈舍瑞林低劑量組戈舍瑞林中劑量組戈舍瑞林高劑量組FP VEGF陽性細胞面積2.54±0.36 24.52±3.45＊18.35±2.44#13.24±1.45#Δ12.85±1.36#Δ9.338＜0.05 TGF-β1陽性細胞面積2.55±0.42 8.12±1.01＊6.42±0.75#4.65±0.54#Δ4.62±0.50#Δ4.586＜0.05

3.3 免疫功能指標檢測結(jié)果

5組大鼠前列腺組織中CD4、CD8的表達量差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。與正常對照組比較，模型組大鼠前列腺組織中CD4、CD8的陽性細胞面積均增強大（P＜0.05）。與模型組比較，戈舍瑞林各劑量組大鼠前列腺組織中CD4、CD8的陽性細胞面積均減小（P＜0.05）。與戈舍瑞林低劑量組比較，戈舍瑞林中、高劑量組大鼠前列腺組織中CD4、CD8的陽性細胞面積均減小（P＜0.05），中、高劑量組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。各組大鼠前列腺組織中CD4、CD8的陽性細胞面積測定結(jié)果見表3。

表3 各組大鼠前列腺組織中CD4、CD8的陽性細胞面積測定結(jié)果（±s，n＝10，cm2）Tab 3 Determ ination of positive cell area of CD4 and CD8 in prostate tissue of rats in each group（±s，n＝10，cm2）

表3 各組大鼠前列腺組織中CD4、CD8的陽性細胞面積測定結(jié)果（±s，n＝10，cm2）Tab 3 Determ ination of positive cell area of CD4 and CD8 in prostate tissue of rats in each group（±s，n＝10，cm2）

注：與正常對照組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與戈舍瑞林低劑量組比較，ΔP＜0.05Note：vs.normal control group，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05；vs.goserelin low-dosegroup，ΔP＜0.05

CD8陽性細胞面積6.56±0.88 14.49±2.17＊11.36±1.45#8.32±0.94#Δ8.30±0.85#Δ13.096＜0.01組別正常對照組模型組戈舍瑞林低劑量組戈舍瑞林中劑量組戈舍瑞林高劑量組FP CD4陽性細胞面積8.49±1.02 17.66±2.52＊14.36±1.45#11.38±1.63#Δ11.34±1.58#Δ11.384＜0.01

4 討論

前列腺增生的發(fā)病機制尚未完全明確，前列腺組織內(nèi)微血管密度增加被視作前列腺組織增生的重要環(huán)節(jié)，拮抗前列腺組織內(nèi)的血管新生是臨床治療前列腺增生的新靶點。戈舍瑞林是LHRH的類似物，多用于子宮內(nèi)膜異位癥、乳腺癌等婦科疾病的治療[5]。外源性給予戈舍瑞林能夠模擬內(nèi)源性LHRH的作用且其生物學活性遠超過體內(nèi)合成的LHRH[6]。該藥物作用于下丘腦-垂體-性腺軸來抑制黃體生成素和卵泡刺激素的生成，卵泡雌激素能夠刺激睪丸產(chǎn)生睪酮，因此戈舍瑞林降低血清中睪酮的含量[7]。已有研究報道，戈舍瑞林用于前列腺癌患者的去勢治療能夠降低血清中睪酮和前列腺特異抗原（PSA）的含量[8]。黃洪等[9]的研究證實，戈舍瑞林對增生的前列腺組織中VEGF的生成具有抑制效應。

本研究采用戈舍瑞林治療前列腺增生，旨在發(fā)揮該藥物對睪酮分泌的抑制效應，進而抑制前列腺組織的增生。通過對大鼠前列腺組織體積、色澤、質(zhì)地、濕質(zhì)量等觀察發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠的前列腺組織體積、濕質(zhì)量、前列腺指數(shù)均明顯高于正常對照組，說明ih丙酸睪丸酮能夠誘導大鼠的前列腺發(fā)生增生和質(zhì)量增加。進一步分析表明，戈舍瑞林各劑量組大鼠的前列腺組織體積、濕質(zhì)量、前列腺指數(shù)均明顯低于模型組，提示戈舍瑞林能夠抑制前列腺組織的增生。

VEGF具有明確的促血管和淋巴管新生作用，TGF-β1、FGF可通過自分泌或旁分泌促進腺間質(zhì)細胞與上皮細胞的增殖，前列腺組織中VEGF、TGF-β1、FGF陽性細胞面積能夠反映血管新生和淋巴管新生的情況[10]。本研究中，模型組大鼠前列腺組織中VEGF、TGF-β1、FGF陽性細胞面積顯著大于正常對照組，戈舍瑞林各劑量組大鼠前列腺組織中VEGF陽性細胞面積顯著小于模型組。國外學者也有類似的文獻報道[11]，提示戈舍瑞林對前列腺組織中血管新生有抑制效應。

免疫性炎癥被證實與前列腺增生的病情發(fā)展密切相關(guān)，增生的前列腺組織中有大量炎癥細胞的浸潤，但卻未證實有感染的臨床癥狀或細菌學證據(jù)[12]。前列腺增生組織中炎癥細胞的浸潤以淋巴細胞為主，表現(xiàn)為免疫性炎癥的特征[13]。CD4和CD8是T淋巴細胞表面的重要標志物。本研究中，模型組大鼠前列腺組織中CD4、CD8陽性細胞面積顯著大于正常對照組，戈舍瑞林各劑量組大鼠前列腺組織中CD4、CD8陽性細胞面積顯著小于模型組，說明在前列腺增生的動物模型中，前列腺組織高表達CD4和CD8，而戈舍瑞林可降低前列腺組織中CD4和CD8的表達。這提示戈舍瑞林對前列腺組織中的免疫功能具有調(diào)節(jié)作用。

進一步分析戈舍瑞林不同劑量對前列腺增生血管內(nèi)皮生長因子及免疫功能的影響時發(fā)現(xiàn)，戈舍瑞林藥效作用與初始刺激與維持濃度有關(guān)，但并未呈良好的量效關(guān)系，當達到一定劑量時，干預效果并無明顯差異。張樞等[14]也有類似的文獻報道。

本文研究表明，戈舍瑞林能夠抑制前列腺增生模型大鼠的病情發(fā)展，減少前列腺組織中血管生長因子的表達并調(diào)節(jié)免疫反應，對前列腺增生的治療具有積極作用。需要指出的是，人類前列腺增生發(fā)病原因影響因素很多，而前列腺增生模型大鼠發(fā)病原因相對確定，加之本文觀察指標相對較少，缺乏對基質(zhì)、性激素水平等比較，所得結(jié)論是相對的，還有待于今后展開更多的基礎研究與臨床研究去求證。

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（編輯：鄒麗娟）

Effects of Goserelin on Vascular Grow th Factor and Immune Function of Ratsw ith Prostatic Hyperplasia

XIWei1，XU Bang2，ZHANG Yonghua2，ZHAO Qian2，CHEN Jinbing2（1.Dept.of Pharmacy，People’s Hospital of China Three Gorges University，Hubei Yichang 443000，China；2.Dept.of Pharmacy，Yichang First People’s Hospital，HubeiYichang 443000，China）

OBJECTIVE：To study the effects of goserelin on vascular grow th factor and immune function of ratsw ith prostatic hyperplasia.METHODS：Rats were selected to establish prostatic hyperplasiamodel and random ly divided intomodel group，goserelin low-dose，medium-dose and high-dose groups（0.4，0.8，1.2 mg/kg）；normal rats were selected as normal control group，w ith 10 rats in each group.Normal control group and model group were given normal saline intragastrically，and goserelin groups were given relevant dose of drugs intragastrically，once a day，for consecutive 25 days.The prostate volume，wetweight，prostatic index of rats were detected as well as positive cell area of VEGF，TGF-β1，F(xiàn)GF，CD4 and CD8 in prostate tissue.RESULTS：Compared w ith normal control group，prostate volume，wet weight，prostatic index，positive cell area of VEGF，TGF-β1，F(xiàn)GF，CD4 and CD8 were all increased in model group（P＜0.05）.Compared w ith model group，the above indexes of goserelin groups were all improved（P＜0.05），especially those in medium-dose and high-dose groups were better than in low-dose group（P＜0.05）；there was no statistical significance between medium-dose group and high-dose group（P＞0.05）.CONCLUSIONS：Goserelin can relieve prostatic hyperplasia of rats，reduce the expression of VEGF in prostate tissue and regulate immune function.

Prostatic hyperplasia；Goserelin；Rat；Vascular endothelial grow th factor；Immune function

R965

A

1001-0408（2017）16-2205-04

2016-08-07

2017-05-20）

＊副主任醫(yī)師，碩士。研究方向：醫(yī)院藥學、藥動學。電話：0717-6221372。E-mail：2958488469@qq.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.16.12