牡蠣殼制備檸檬酸鈣的工藝研究

鄧 勤,賴家鳳,梁興唐,王 蕓,石海信

(欽州學(xué)院石油與化工學(xué)院,廣西高校北部灣石油天然氣資源有效利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西欽州 535011)

?

牡蠣殼制備檸檬酸鈣的工藝研究

鄧 勤,賴家鳳,梁興唐,王 蕓,石海信

(欽州學(xué)院石油與化工學(xué)院,廣西高校北部灣石油天然氣資源有效利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西欽州 535011)

以檸檬酸鈣產(chǎn)率為指標(biāo)研究牡蠣殼制備檸檬酸鈣的工藝,通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)探討鹽酸用量、碳酸鈉用量對(duì)碳酸鈣得率的影響及檸檬酸用量、水用量和結(jié)晶時(shí)間等因素對(duì)檸檬酸鈣產(chǎn)率的影響。結(jié)果表明:1 g牡蠣殼粉在20 mL 1 mol/L鹽酸、1.5 g碳酸鈉的條件下制備的碳酸鈣得率最佳,達(dá)到92.3%;在此條件下,1.5 g檸檬酸與碳酸鈣在15 mL水中反應(yīng),30 ℃下結(jié)晶4 h,檸檬酸鈣的產(chǎn)率為91.24%。說(shuō)明牡蠣殼用此工藝制備檸檬酸鈣產(chǎn)率高,可實(shí)際應(yīng)用。

牡蠣殼,檸檬酸,檸檬酸鈣

牡蠣是生活中常見(jiàn)的海鮮,欽州是中國(guó)最大的近江牡蠣天然苗種繁殖區(qū)。平時(shí)人們對(duì)牡蠣的利用僅限于食用或加工其肉,而牡蠣殼則常被作為廢棄物丟掉,這樣不僅牡蠣殼得不到充分的利用,堆積的牡蠣殼散發(fā)的臭味還影響了周邊的環(huán)境。牡蠣殼中含有大量的碳酸鈣,質(zhì)量分?jǐn)?shù)占90%以上[1],如果能對(duì)這些鈣源加以利用不僅可以變廢為寶,還能產(chǎn)生一定的經(jīng)濟(jì)效益。近年來(lái)不少學(xué)者研究利用廢棄牡蠣殼等為原料制備各種鈣劑,為牡蠣殼的利用提供了一些新途徑。范崢[2]等人探討了用牡蠣殼生產(chǎn)食品級(jí)醋酸鈣的工藝條件,發(fā)現(xiàn)殼酸比、水殼比和反應(yīng)時(shí)間這3個(gè)因素對(duì)醋酸鈣的生產(chǎn)有顯著影響,在殼酸比為0.75∶1,水殼比為21∶1,反應(yīng)時(shí)間為140 min的條件下醋酸鈣收率和含量的平均值可達(dá)93.72%、99.63%。李峰[3]、陳聰[4]、藍(lán)蔚冰[5]等研究了以牡蠣殼為原料制備丙酸鈣的工藝,在最優(yōu)條件下丙酸鈣的得率分別達(dá)到98.16%、97.9%、98.15%,純度都能達(dá)到97%以上。江敏[6]等人將牡蠣殼在900 ℃灰化后制成石灰乳,與L-乳酸合成L-乳酸鈣,產(chǎn)率能達(dá)到92.45%,含量為98.41%。彭元懷[7]等人以生蠔殼、食品級(jí)檸檬酸為原料生產(chǎn)檸檬酸鈣,得出制備檸檬酸的最佳工藝條件為生蠔殼粉細(xì)度為40目,室溫下反應(yīng),檸檬酸濃度為14%,靜置時(shí)間為4 h,檸檬酸鈣的得率為78%。此外,還有學(xué)者研究用牡蠣殼制備納米碳酸鈣[8]、活性鈣[9-11]、檸檬酸-蘋(píng)果酸鈣[12]、螯合鈣[13-14]等。檸檬酸鈣作為一種食品風(fēng)味酸絡(luò)合劑,能促進(jìn)脂肪分解,保持身體酸堿平衡,也可用于制成含鈣保健營(yíng)養(yǎng)食品,并且有抗凝血作用,可預(yù)防和治療高血壓和心肌梗死。本文研究以欽州本地養(yǎng)殖的近江牡蠣的殼為原料制備檸檬酸鈣的工藝,為欽州等沿海地區(qū)牡蠣殼的資源利用提供一種途徑,也為今后利用牡蠣殼生產(chǎn)檸檬酸鈣提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

牡蠣殼 取自廣西欽州市鴻發(fā)市場(chǎng);一水合檸檬酸、無(wú)水碳酸鈉、鹽酸、三乙醇胺、氫氧化鈉、乙二胺四乙酸二鈉,高氯酸、硝酸釷、茜素磺酸鈉等(均為國(guó)產(chǎn)分析純)。

IR Tracer-100傅里葉變換紅外光譜儀 日本島津公司;HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋 國(guó)華電器有限公司;DZF真空干燥箱、GZX-GF電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海龍躍儀器設(shè)備有限公司;SHZ-(III)A循環(huán)水式多用真空泵 鄭州盛達(dá)儀器有限公司;FW177中草藥粉碎機(jī) 天津市泰斯特有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 牡蠣殼的預(yù)處理 用刷子刷去牡蠣殼上的水泥和殘肉,再用自來(lái)水沖洗干凈,然后用0.5 mol/L的鹽酸浸泡0.5 h,再用清水漂洗,除去牡蠣殼表面的色素層和少量可溶性有機(jī)物質(zhì)。晾干,100 ℃下干燥6 h后用粉碎機(jī)粉碎,過(guò)100目篩子,密封好備用。

1.2.2 檸檬酸鈣的制備 制備工藝:牡蠣殼粉→稀鹽酸溶解→過(guò)濾→濾液→碳酸鈉沉淀鈣離子→碳酸鈣沉淀→抽濾分離→洗滌→烘干→碳酸鈣粉末→加檸檬酸和水反應(yīng)→析出晶體→抽濾分離→洗滌→烘干→檸檬酸鈣產(chǎn)品。

鹽酸用量對(duì)碳酸鈣得率的影響:按鹽酸與碳酸鈉的摩爾比為2∶1來(lái)確定碳酸鈉的用量,分別在體積為10、15、20、25、30、40 mL的1 mol/L鹽酸溶液中加入1 g牡蠣殼粉,反應(yīng)30 min后,過(guò)濾,往濾液中加入碳酸鈉固體,反應(yīng)30 min后,沉淀經(jīng)過(guò)濾、烘干后得到純的碳酸鈣產(chǎn)品。

碳酸鈉用量對(duì)碳酸鈣得率的影響:在最佳鹽酸用量的基礎(chǔ)上,將1 g的牡蠣殼粉加入到鹽酸溶液中,反應(yīng)30 min后,過(guò)濾,往濾液中分別加入0.5、1.0、1.5、2.0 g的碳酸鈉固體,反應(yīng)30 min后,沉淀經(jīng)過(guò)濾、烘干后得到純的碳酸鈣產(chǎn)品。

檸檬酸用量對(duì)檸檬酸鈣產(chǎn)率的影響:在最佳鹽酸用量和碳酸鈉用量的基礎(chǔ)上,在30 mL的水中分別加入1 g牡蠣殼粉制得的碳酸鈣產(chǎn)品和檸檬酸得到反應(yīng)液,檸檬酸的用量分別為1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 g,反應(yīng)液經(jīng)12 h結(jié)晶后,過(guò)濾,洗凈,60 ℃烘干得到白色的檸檬酸鈣產(chǎn)品。

水的用量對(duì)檸檬酸鈣產(chǎn)率的影響:在最佳鹽酸用量和碳酸鈉用量的基礎(chǔ)上,將1 g牡蠣殼粉制得的碳酸鈣產(chǎn)品和1.5 g檸檬酸加入一定體積的水中得到反應(yīng)液,水的體積分別為10、15、20、25、30 mL,反應(yīng)液經(jīng)12 h結(jié)晶后,過(guò)濾,60 ℃烘干得到白色的檸檬酸鈣產(chǎn)品。

結(jié)晶時(shí)間對(duì)檸檬酸鈣產(chǎn)率的影響:在最佳鹽酸用量和碳酸鈉用量的基礎(chǔ)上,將1 g牡蠣殼粉制得的碳酸鈣產(chǎn)品和1.5 g檸檬酸加入15 mL的水中得到反應(yīng)液,反應(yīng)液在不同的恒溫條件下(25、30、35、40、50 ℃)反應(yīng)結(jié)晶的時(shí)間分別為0.5、1.0、1.5、2.0、4.0、8.0、12.0 h,晶體經(jīng)過(guò)濾,60 ℃烘干后得到白色的檸檬酸鈣產(chǎn)品。

1.2.3 檸檬酸鈣的產(chǎn)率 因制備過(guò)程中有碳酸鈣這個(gè)中間產(chǎn)品的產(chǎn)生,所以檸檬酸鈣的產(chǎn)率計(jì)算需要考慮碳酸鈣的得率。碳酸鈣得率的計(jì)算公式為:

則檸檬酸鈣的產(chǎn)率計(jì)算公式為:

式中:m1、m2、m3分別為牡蠣殼粉、碳酸鈣和檸檬酸鈣的質(zhì)量,1.9為碳酸鈣與檸檬酸鈣的質(zhì)量轉(zhuǎn)化系數(shù)。

1.2.4 紅外光譜定性分析 取少量樣品與固體KBr研磨均勻,壓片,利用FTIR測(cè)定紅外光譜,光譜掃描范圍為400～4000 cm-1,分辨率為4 cm-1,采用ORIGIN 9.1軟件進(jìn)行譜圖處理及數(shù)據(jù)分析。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

每組實(shí)驗(yàn)做三個(gè)平行樣,采用ORIGIN 9.1、EXCEL 2007軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 鹽酸用量對(duì)碳酸鈣得率的影響

用鹽酸溶解牡蠣殼粉會(huì)有氣泡產(chǎn)生,如果鹽酸濃度過(guò)大,反應(yīng)劇烈,過(guò)小會(huì)增長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間。由圖1可看出,當(dāng)鹽酸的體積小于20 mL時(shí),碳酸鈣的產(chǎn)率隨著鹽酸用量的增大而迅速增大;當(dāng)鹽酸的體積大于20 mL時(shí),碳酸鈣的產(chǎn)率變化不大,但都在90%以上。這是因?yàn)檫^(guò)量的鹽酸會(huì)與碳酸鈉反應(yīng),導(dǎo)致與氯化鈣反應(yīng)的碳酸鈉減少,所以生成的碳酸鈣的質(zhì)量會(huì)有所減少。則1 mol/L鹽酸的用量取20 mL較佳。

圖1 鹽酸用量與碳酸鈣得率的關(guān)系曲線Fig.1 The relation between dosage of hydrochloric acid and yield of calcium carbonate

2.2 碳酸鈉的用量對(duì)碳酸鈣得率的影響

碳酸鈉的用量直接影響到鈣離子是否沉淀完全,若過(guò)量則浪費(fèi)資源,若不足則鈣離子沉淀不完全。由圖2可知隨碳酸鈉用量的增加,碳酸鈣得率呈現(xiàn)先增大后趨于平穩(wěn)的趨勢(shì)。當(dāng)碳酸鈉用量小于1.5 g時(shí),溶液中的氯化鈣處于過(guò)量狀態(tài),因而碳酸鈣的產(chǎn)率隨碳酸鈉的用量增加而增大;當(dāng)碳酸鈉用量大于1.5 g時(shí),溶液中的碳酸鈉處于過(guò)量狀態(tài),氯化鈣已全部轉(zhuǎn)化成碳酸鈣,所以碳酸鈣的產(chǎn)量保持在穩(wěn)定的狀態(tài)。即牡蠣殼粉用量為1 g,1 mol/L鹽酸20 mL的條件下,碳酸鈉的用量為1.5 g最佳,碳酸鈣的產(chǎn)率為92.3%。

圖2 碳酸鈉用量與碳酸鈣得率的關(guān)系曲線Fig.2 The relation between dosage of sodium carbonate and yield of calcium carbonate

2.3 檸檬酸用量對(duì)檸檬酸鈣產(chǎn)率的影響

由圖3可看出,檸檬酸的用量對(duì)檸檬酸鈣的產(chǎn)率有較大的影響。檸檬酸鈣的產(chǎn)率隨檸檬酸用量的增大先增大后減小,在用量為1.5 g時(shí)產(chǎn)率最大。碳酸鈣和檸檬酸反應(yīng)生成四水合檸檬酸鈣的理論質(zhì)量比為1∶1.4,實(shí)驗(yàn)結(jié)果與理論相符,按牡蠣殼中碳酸鈣含量為90%折算成牡蠣殼粉質(zhì)量和檸檬酸的質(zhì)量比為1.1∶1.4。在牡蠣殼粉用量為1 g的條件下,當(dāng)檸檬酸用量小于1.4 g時(shí),碳酸鈣過(guò)量,所以隨檸檬酸用量的增大檸檬酸鈣的產(chǎn)率也隨著增大,當(dāng)檸檬酸用量大于1.4 g時(shí),檸檬酸過(guò)量,過(guò)量的檸檬酸會(huì)和檸檬酸鈣繼續(xù)反應(yīng)生成檸檬酸氫鈣,所以,檸檬酸鈣的產(chǎn)率隨檸檬酸的增加而下降。為保證碳酸鈣完全轉(zhuǎn)化為檸檬酸鈣,檸檬酸需稍微過(guò)量,所以牡蠣殼粉與檸檬酸的最佳質(zhì)量比為1∶1.5。

圖3 檸檬酸用量與檸檬酸鈣產(chǎn)率的關(guān)系曲線Fig.3 The relation between dosage of calcium citrate and yield of calcium carbonate

2.4 水的用量對(duì)檸檬酸鈣產(chǎn)率的影響

水的用量會(huì)影響反應(yīng)液中各物質(zhì)的濃度和檸檬酸鈣的結(jié)晶效果。從圖4可看出,檸檬酸鈣的產(chǎn)率隨水的用量增加先增后減,水的用量從15 mL到30 mL增加了一倍,檸檬酸鈣的產(chǎn)率只減少了4%,可見(jiàn)水的用量對(duì)檸檬酸鈣的產(chǎn)率有一定的影響,但不顯著。理論上水的用量少,檸檬酸的濃度大,則反應(yīng)速率快;水的用量大,檸檬酸的濃度小,反應(yīng)速率慢。由圖4得知水的用量并非越少越好,在碳酸鈣用量為1 g,檸檬酸用量為1.5 g的條件下,水的用量為15 mL左右最有利于檸檬酸鈣的生成,此時(shí)得到的檸檬酸鈣為1.56 g,產(chǎn)率達(dá)到88.95%。

圖4 水的用量與檸檬酸鈣產(chǎn)率的關(guān)系曲線Fig.4 The relation between dosage of water and yield of calcium carbonate

2.5 結(jié)晶時(shí)間對(duì)檸檬酸鈣產(chǎn)率的影響

由圖5可知,結(jié)晶時(shí)間對(duì)檸檬酸鈣的產(chǎn)率有較大的影響。在4 h內(nèi),檸檬酸鈣的產(chǎn)率隨時(shí)間的增加迅速上升,4 h后,增長(zhǎng)的趨勢(shì)變緩,檸檬酸鈣的產(chǎn)率在90%以上。結(jié)晶溫度對(duì)檸檬酸鈣的產(chǎn)率在4 h之內(nèi)影響顯著,30～50 ℃溫度范圍內(nèi)4 h之后影響甚微，因此選擇30 ℃。檸檬酸鈣晶體的析出必須是溶液達(dá)到飽和狀態(tài)才能進(jìn)行,隨著溫度的升高,碳酸鈣和檸檬酸的反應(yīng)速率加快,溶液中的檸檬酸鈣易達(dá)到飽和狀態(tài),所以析出的速率也加快。考慮到4 h后檸檬酸鈣的產(chǎn)率變化不大,最佳的結(jié)晶時(shí)間可取4 h,此時(shí)檸檬酸鈣的產(chǎn)量為1.60 g,產(chǎn)率達(dá)到91.24%。

圖5 結(jié)晶時(shí)間與檸檬酸鈣產(chǎn)率的關(guān)系曲線Fig.5 The relation between crystallization time and yield of calcium carbonate

2.6 紅外光譜定性分析

以KBr為基質(zhì),在4000～400 cm-1范圍內(nèi)測(cè)定檸檬酸鈣的紅外光譜,見(jiàn)圖6。檸檬酸的特征峰有νO-H3496.4 cm-1,νC-H3297.7 cm-1,νC=O1700.9 cm-1,νC-C1178.3 cm-1,δO-H775.3 cm-1[15],由圖可知,檸檬酸鈣的峰形與之比較吻合,只是略有偏移。其中O-H伸縮振動(dòng)出現(xiàn)在3442.9 cm-1,減少了53.5 cm-1,而羥基峰向低波數(shù)移動(dòng),出現(xiàn)在1539.2 cm-1,說(shuō)明羧酸根與鈣離子形成了配位鍵,反應(yīng)物檸檬酸已轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物檸檬酸鈣,得到了預(yù)期的產(chǎn)品。

2.7 檸檬酸鈣產(chǎn)品的質(zhì)量分析

按照食品添加劑檸檬酸鈣GB17203-1998[16]的要求對(duì)產(chǎn)品的部分理化指標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè),并和標(biāo)準(zhǔn)中的理化指標(biāo)進(jìn)行對(duì)照,結(jié)果如表1所示。由表1可知,根據(jù)實(shí)驗(yàn)制得的檸檬酸鈣產(chǎn)品符合食品添加劑檸檬酸鈣所規(guī)定的理化指標(biāo)要求。

表1 檸檬酸鈣的質(zhì)量指標(biāo)及測(cè)定結(jié)果Tabel 1 Quality index and measure results of calcium citrate

圖6 檸檬酸鈣的紅外光譜圖Fig.6 Infrared spectrum of calcium citrate

3 結(jié)論

通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)研究了牡蠣殼經(jīng)鹽酸溶解,碳酸鈉沉淀制備純的碳酸鈣后與檸檬酸反應(yīng)制備檸檬酸鈣的工藝,探討了鹽酸用量、碳酸鈉用量對(duì)碳酸鈣得率和檸檬酸用量、水用量、結(jié)晶時(shí)間等對(duì)檸檬酸鈣產(chǎn)率的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,鹽酸用量和碳酸鈉用量對(duì)碳酸鈣得率影響較大,檸檬酸用量和結(jié)晶時(shí)間對(duì)檸檬酸鈣產(chǎn)率影響顯著,這和彭元懷[7]的研究結(jié)果有相似之處。1 g牡蠣殼粉在1 mol/L鹽酸20 mL、碳酸鈉用量1.5 g,檸檬酸用量1.5 g、水用量15 mL、反應(yīng)溫度30 ℃、結(jié)晶時(shí)間4 h的條件下能制備1.60 g檸檬酸鈣,產(chǎn)率達(dá)到91.24%,產(chǎn)品達(dá)到國(guó)標(biāo)中食品添加劑檸檬酸鈣的質(zhì)量要求。本工藝制備檸檬酸鈣具有成本低、制備工藝簡(jiǎn)單、產(chǎn)量高、保護(hù)環(huán)境等優(yōu)點(diǎn),具有較好的應(yīng)用前景。

[1]洪鵬志,章超樺,郭家輝,等.牡蠣殼制備活性鈣[J]. 湛江海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2000,20(4):46-49.

[2]范崢,楊栩,關(guān)嘉慶,等. 以廢棄牡蠣殼為原料制備食品級(jí)醋酸鈣[J]. 食品工業(yè)科技,2015,36(10):254-258.

[3]李峰. 以牡蠣殼為原料制備食品級(jí)添加劑丙酸鈣的工藝研究[D].西安：西北大學(xué),2008.

[4]陳聰,劉淇,魏玉西,等. 牡蠣殼丙酸鈣的非煅燒法制備工藝及其抑菌活性研究[J]. 食品工業(yè)科技,2010,31(3):245-247.

[5]藍(lán)尉冰,韓鑫,覃銀松,等. 牡蠣殼制備丙酸鈣的工藝研究[J]. 欽州學(xué)院學(xué)報(bào),2014,29(2):1-3,17.

[6]江敏,李鑒,梁潔玲,等. 牡蠣殼合成L-乳酸鈣的工藝研究[J]. 食品科技,2008(3):123-125,141.

[7]彭元懷,黎蕭宇,李建霖.食品級(jí)檸檬酸鈣的綠色生產(chǎn)工藝-生蠔殼制備檸檬酸鈣的研究[J].農(nóng)業(yè)機(jī)械,2011(8):129-131.

[8]李文艷. 牡蠣殼為原料制備納米碳酸鈣及表面改性的研究[D].西北大學(xué),2009.

[9]吳少林,徐京鵬. 廢棄牡蠣殼生產(chǎn)活性鈣[J]. 資源開(kāi)發(fā)與市場(chǎng),2003,19(4):195-196.

[10]俞?；? 用牡蠣殼制備活性鈣粉[J]. 今日科技,1994(12):19.

[11]周銀龍. 由牡蠣殼制取離子化鈣(活性鈣)[J]. 天津藥學(xué),1994,6(4):28-30.

[12]張振謙,梅運(yùn)海,陶烈軍. 牡蠣殼及花蛤殼制備檸檬酸-蘋(píng)果酸鈣的研究[J].廣西工學(xué)院學(xué)報(bào),2005,16(4):69-72.

[13]邵江娟,王唯,陳斌寅,等. 以牡蠣殼為鈣源的L-天冬氨酸螯合鈣的合成及其生物利用度研究[J]. 南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,28(4):371-373.

[14]王家明,魏玉西,殷邦忠,等.以牡蠣殼為鈣源的谷氨酸螯合鈣制備工藝研究[J].中國(guó)海洋藥物,2010,29(2):22-26.

[15]林麗麗,文健,潘榮楷,等. 以貝殼制備檸檬酸鈣的研究[J].湛江師范學(xué)院學(xué)報(bào),2010,31(6):95-98.

[16]GB17203-1998. 食品添加劑檸檬酸鈣[S].

Study on the technology of preparation of the calcium citrate from oyster shells

DENG Qin,LAI Jia-feng,LIANG Xing-tang,WANG Yun,SHI Hai-xin

(College of Petroleum and Chemical Engineering,Qinzhou University,Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory of Beibu Gulf Oil and Natural Gas Resource Effective Utilization,Qinzhou 535000,China)

The technology of preparation of the calcium citrate from oyster shells was studied using the yield of calcium citrate as index.Single factor experiments were adopted to explore the influence of hydrochloric acid amount and sodium carbonate amount on the yield of calcium carbonate and citric acid amount,water dosage and crystallization time on the yield of calcium citrate.The results showed that the yield of calcium citrate could reach 92.3% under the conditions of 1 g of oyster shell powder,20 mL of hydrochloric acid with 1 mol/L and 1.5 g of sodium carbonate. Under this condition,the rate was 91.24% with 1.5 g of citric acid reacting with calcium carbonate in 15 mL of water,crystallizing under 30 ℃ for 4 h. The process has high yield for calcium citrate prepared by oyster shells,can be applied in practice.

shells;calcium carbonate;calcium citrate

2016-12-08

鄧勤(1983-)，女，碩士，講師，研究方向：固體廢棄物回收與資源化利用，E-mail：dq21_0@163.com。

廣西高校科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(LX2014451)；廣西高?；瘜W(xué)工藝重點(diǎn)學(xué)科自主項(xiàng)目(2015KLOG21)；欽州學(xué)院校級(jí)科研項(xiàng)目(2012XJKY-17B)。

TS202.3

B

1002-0306(2017)11-0251-04

10.13386/j.issn1002-0306.2017.11.039