不同類型嬰兒濕疹皮損處微生物菌群檢出情況分析

宋志琴 ，盧致民，張瓊方，馮冬梅，吳遠慧，周向昭

(1.河北北方學院，河北 張家口 075000;2.河北北方學院附屬第一醫(yī)院皮膚科，河北 張家口 075000)

不同類型嬰兒濕疹皮損處微生物菌群檢出情況分析

宋志琴1，盧致民1，張瓊方1，馮冬梅2，吳遠慧2，周向昭2

(1.河北北方學院，河北 張家口 075000;2.河北北方學院附屬第一醫(yī)院皮膚科，河北 張家口 075000)

目的 檢測不同類型嬰兒濕疹(infantile eczema,IE)皮損處微生物菌群，分析其致病相關性。方法 取IE患兒皮損、非皮損處及健康嬰兒皮膚表面分泌物或皮屑行微生物培養(yǎng)及鑒定，對比分析不同類型IE患兒皮損處微生物檢出類別的差異。結果 IE患兒皮損處金黃色葡萄球菌(SA)、糠秕孢子菌(MF)、鏈球菌(SP)檢出率均明顯高于非皮損及健康嬰兒(P<0.05)，三者間表皮葡萄球菌(SE)檢出率差異無統(tǒng)計學差異。不同類型IE患兒皮損處微生物檢出種類差異明顯，其中滲出型濕疹患兒皮損處SA檢出率最高，明顯高于脂溢型及干燥型濕疹(P<0.05)；脂溢型及干燥型濕疹患兒皮損處MF檢出率均明顯高于滲出型濕疹(P<0.05)，但前兩者間差異無顯著性(P>0.05)。結論 微生物感染或定植與IE發(fā)病密切相關，且不同類型IE皮損處微生物類型存在一定差異。

嬰兒濕疹；皮損；微生物

嬰兒濕疹(infantile eczema, IE)是最常見也是最早發(fā)生在嬰兒期的變態(tài)反應性疾病，近年來IE發(fā)生率有上升趨勢[1]，常伴有瘙癢等不適，且與過敏性鼻炎、過敏性哮喘等其他過敏性疾病相關(即“過敏歷程”)[2]。相關研究表明，IE的發(fā)病不僅與遺傳、環(huán)境、免疫等有關，還與患兒皮膚表面的微生物感染或定植相關[3]。我們對468例IE患兒皮損、非皮損處及60例健康嬰兒皮膚表面分別進行微生物培養(yǎng)、鑒定，旨在探討嬰兒濕疹與不同微生物之間的致病相關性，現(xiàn)報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

2014-08—2016-05月就診于河北北方學院附屬第一醫(yī)院皮膚科門診的468例IE患兒，診斷均符合《中國臨床皮膚病學》相關標準[4]，均征得家屬知情同意。其中男213例，女255例；年齡20 d～12個月；根據(jù)皮損特點，分為滲出型、脂溢型、干燥型3種[4,5]，其中以面頰、額部、頭皮處為重的滲出型濕疹168例(男82例，女86例)，以眉區(qū)、頭皮及耳后為重的脂溢型濕疹219例(男98例，女121例)，以四肢、軀干為重的干燥型濕疹81例(男33例，女48例)。60例健康嬰兒均來自我院新生兒科或小兒科，其中男28例，女32例；年齡18 d～12個月。所有患兒及健康嬰兒納入研究前2周內均未接受局部或系統(tǒng)抗組胺、抗生素、抗真菌或激素類藥物系統(tǒng)治療，3 d內未洗浴，無明顯發(fā)熱、流膿等感染癥狀，未合并過敏性哮喘等其他過敏性疾病及器質性疾病，無過敏性家族史。

1.2 方法

1.2.1 細菌的鑒定

1.2.1.1 樣本采集 患兒確診為IE后，在實驗室清潔區(qū)于患兒皮損最嚴重部位、非皮損部位(距離皮損處至少10 cm以外的正常部位皮膚或皮損的對稱部位)分別采集樣本。滲出型皮損用無菌棉拭子取分泌物，非滲出型皮損先用無菌生理鹽水沖洗，隨后以吸附無菌生理鹽水的無菌棉拭子摩擦皮損3～5次，取樣立即送檢。健康嬰兒取顏面部皮膚表面皮屑，操作同上。

1.2.1.2 細菌培養(yǎng)及鑒定 樣本取材后首先行涂片鏡檢，隨后用分區(qū)劃線法將標本接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基及一次性血瓊脂培養(yǎng)基(天津市金章科技發(fā)展有限公司)平板，置于35 ℃溫箱中培養(yǎng)24 h，根據(jù)菌落形態(tài)與涂片鏡檢進行分離與純化，隨后采用Phoenix-100全自動細菌鑒定/藥敏系統(tǒng)(美國BD)對標本進行培養(yǎng)及鑒定。操作過程嚴格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》以及Phoenix-100系統(tǒng)說明書進行：首先將鑒定管放在加樣盤上，使用無菌棉簽挑取經(jīng)過夜培養(yǎng)的新鮮平板上的菌落至肉湯鑒定管，配制成0.5麥氏單位菌懸液，將其倒入檢測板，密封條封好，輸入并添加樣本信息，按要求運行系統(tǒng)，等待細菌鑒定結果并打印記錄。

1.2.2 真菌的鑒定

1.2.2.1 樣本取材 采集標本前用75%乙醇清潔待檢處皮膚，用火焰滅菌鈍刀從皮損的邊緣向外刮取皮屑或分泌物，立即進行真菌鏡檢及培養(yǎng)。若皮膚干燥且鱗屑較少，即采用黏著透明膠帶黏著面緊壓于皮損上，剝下后立即送檢。

1.2.2.2 真菌鏡檢 將上述所取標本立即置于載玻片上，加一滴10%KOH液，微加溫使角質溶解，加蓋玻片后于暗視野顯微鏡下觀察有無菌絲或孢子。用透明膠帶取材時，先加一滴10%KOH液于載玻片上，再將黏有標本的膠帶壓于其上，于顯微鏡下觀察并記錄結果。

1.2.2.3 真菌培養(yǎng) 取材后立即于超凈工作臺將樣本接種于含氯霉素及菜籽油的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(杭州天和微生物試劑有限公司)，并于(27±1) ℃恒溫箱中培養(yǎng)，每3天觀察一次，記錄菌落生長情況，共觀察15 d，然后根據(jù)菌落形態(tài)及顯微鏡下形態(tài)鑒別所屬菌種，記錄所得結果。操作過程避免污染，確保按照真菌培養(yǎng)規(guī)程進行。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，采用卡方檢驗，檢驗水準α=0.05，多樣本率兩兩間比較時檢驗水準α`=0.0125。

2 結 果

2.1 患兒皮損、非皮損處及健康嬰兒皮膚微生物檢測結果

IE患兒皮損處、非皮損處及健康嬰兒皮膚表面金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，SA)、糠秕孢子菌(Malasseziafurfur，MF)檢出率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=58.55，P<0.05；χ2=55.74，P<0.05)；SA在皮損處檢出率明顯高于非皮損及健康嬰兒皮膚(χ2=50.35，P<α`；χ2=55.74，P<α`)，后兩者間差異不明顯(χ2=1.06，P>0.0125)；MF在皮損處檢出率亦明顯高于非皮損及健康嬰兒皮膚(χ2=48.18，P<α`；χ2=15.08，P<α`)，后兩者間差異亦不明顯(χ2=0.92，P>α`)。三者間表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermedis，SE)檢出率差異無統(tǒng)計學意義(χ2=5.35，P>0.05)；鏈球菌(Streptococcusphages，SP)在皮損處檢出率高于非皮損(χ2=22.16，P<0.05)，在健康嬰兒皮膚表面無檢出(見表1)。

表1 IE患兒皮損、非皮損處及健康嬰兒皮膚微生物類型比較 n(%)

注：其他包括成團腸桿菌、糞腸球菌、犬小孢子菌等；合并菌種表示存在2種或2種以上微生物檢出。

2.2 不同類型IE患兒皮損處微生物檢出情況

三種類型IE患兒皮損處SE的檢出率均較高且差異無統(tǒng)計學意義(χ2=5.78，P>0.05)，IE患兒皮損、非皮損處及健康嬰兒皮膚SE的檢出率差異也無統(tǒng)計學意義，可認為SE是一種皮膚正常寄生菌，因此在以下統(tǒng)計分析中將SE剔除。滲出型中，SA的檢出率明顯高于MF、SP及其他類型(χ2分別為41.76、46.56、73.76，P<α`)，且滲出型中SA的檢出率也明顯高于脂溢型和干燥型(χ2分別為36.12、47.49，P<α`)。脂溢型中MF檢出率明顯高于SA、SP及其他類型(χ2分別為23.24、105.78、85.48，P<α`)，且脂溢型中MF檢出率也明顯高于滲出型(χ2=28.84,P<α`)，但與干燥型差異無顯著(χ2=0.56,P>α`)。類似于脂溢型，干燥型中MF檢出率也是明顯最高的(χ2分別為22.43、46.29、26.63，P<α`)。即滲出型IE皮損處微生物類型以SA為主，而脂溢型和干燥型則以MF為主(見表2)。

表2 不同類型IE患兒皮損處微生物類型比較 n(%)

3 討 論

IE是嬰兒期最常見的過敏性疾病，多發(fā)生于嬰兒頭面部，嚴重者可累及軀干及四肢。其病因及發(fā)病機制復雜，到目前為止尚無定論，多數(shù)學者認為是特應性皮炎(atopic dermatitis,AD)的嬰兒期表現(xiàn)[6]，《中國臨床皮膚病學》中將其歸于AD的范疇[4]。相關報道指出，微生物菌群，尤其是SA的感染或定植與濕疹的發(fā)生、發(fā)展有一定的相關性[7]。本研究中，468例IE患兒皮損、非皮損處及60例健康嬰兒皮膚表面微生物檢測對比分析發(fā)現(xiàn)，皮損處SA、MF、SP等微生物檢出率明顯高于非皮損處及健康嬰兒，以SA、MF檢出率最高，SE在三者間差異無統(tǒng)計學意義，與Hon KL[7]等的研究結果相似，提示SA、MF為最主要的致病菌，而SE作為皮膚正常寄生菌，對于IE的發(fā)生、發(fā)展影響不大。

IE的發(fā)生在一定程度上與皮膚屏障功能的減弱及抗菌肽的表達降低密切相關。研究表明，嬰兒自出生后至少需12個月的時間皮膚屏障功能才能達到成人水平[8]；此外，由于不同部位皮膚表面pH值不同[9]，直接影響抗菌肽的表達，因此不同部位皮膚表面抗菌肽的濃度也會有一定差異，同時，不同pH值環(huán)境也適宜不同微生物生長[10]，均可進一步導致皮損、非皮損部位微生物定植或感染的種類及濃度的差異存在。同時，皮膚表面微生物失衡、有害微生物濃度增加并產(chǎn)生微生物超抗原類毒素及蛋白酶類又可進一步加重皮膚屏障功能的破壞，導致疾病遷延難愈[11]。本研究中，不同類型IE患兒皮損處微生物檢測情況亦有一定差異，其中滲出型患兒皮損表面以SA為主，脂溢型及干燥型患兒皮損處以MF為主，表明不同類型濕疹患兒皮膚表面微生態(tài)(包括pH環(huán)境等)適宜于特定種類的微生物生存，同時，不同類型的微生物又可產(chǎn)生不同的超抗原類毒素，使機體產(chǎn)生不同的免疫反應，導致不同的皮損表現(xiàn)，于是出現(xiàn)不同的濕疹類型。本研究中，我們還觀察到濕疹患兒皮損處存在約35.25%的2種及以上混合菌種檢出，明顯高于非皮損及健康嬰兒，結合患兒病程及臨床癥狀，考慮混合菌群感染或定植與病情嚴重程度有關，尚需進一步研究其相關性。

綜上，以SA、MF為主的病源菌感染和定植是導致嬰兒濕疹的病因之一，同時不同類型的嬰兒濕疹皮損處存在不同類型的微生物，因此，要注意嬰兒皮膚屏障功能及微生態(tài)平衡的防護。在治療嬰兒濕疹時，要根據(jù)不同類型及表現(xiàn)制定不同的治療方案，在聯(lián)合應用抗生素的同時，要兼顧MF的治療。

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[責任編輯：李薊龍 英文編輯：劉彥哲]

Detection of Microbial Flora in Different Types of Infantile Eczema

SONG Zhi-qin1,LU Zhi-min1,ZHANG Qiong-fang1,FENG Dong-mei2,WU Yuan-hui2,ZHOU Xiang-zhao2
(1.Hebei North University,Zhangjiakou,Hebei 075000,China;2.Department of Dermatology,The First Affiliated Hospital of Hebei North University,Zhangjiakou,Hebei 075000,China)

Objective To investigate the microflora in skin lesions of infants with different types of eczema(IE),and analyze the association between microflora and IE.Methods Microbial culture and identification of the skin surface secretions or dander from skin lesions,non skin lesions of IE children and healthy infants were conducted.The differences among microorganisms were detected in skin lesions of different types of IE. Results The isolation rates ofStaphylococcusaureus(SA),Malasseziafurfur(MF)andStreptococcusphages(SP)in skin lesions of IE were significantly higher than those in non-lesions of IE and skins of healthy infants(P<0.05),while no significant differences ofStaphylococcusepidermidis(SE)were found among them.There were significant differences in the detection of the skin lesions from different types of IE.The detection rate of SA in the lesions of children with exudative eczema was the highest,which was significantly higher than that of seborrheic eczema and dry eczema(P<0.05).The detection rate of MF in lesional skin of patients with seborrheic dermatitis and dry eczema was significantly higher than that of exudative eczema(P<0.05),but there was no significant difference between the former two groups(P>0.05).Conclusions The infection or colonization of microflorais closely related to IE,and there were some differences in microorganisms detected in skin lesions of different types of IE.

infantile eczema; skin lesion; microorganism

宋志琴(1990-)，女，湖北黃岡人，河北北方學院2014級碩士研究生，研究方向：變態(tài)反應性皮膚病。

周向昭(1965-)，男，主任醫(yī)師，教授，碩士生導師，主要研究方向：變態(tài)反應性皮膚病。

R 758.23

A

10.3969/j.issn.1673-1492.2017.04.008

來稿日期：2016-12-02