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    《中華人民共和國獸藥典》2015年版三部培養(yǎng)基部分增修訂概況

    2017-06-05 09:09:05萬建青朱真楊挺英黃小潔
    中國獸藥雜志 2017年5期
    關鍵詞:藥典菌種無菌

    萬建青,朱真,楊挺英,黃小潔

    (中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,北京 100081)

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    《中華人民共和國獸藥典》2015年版三部培養(yǎng)基部分增修訂概況

    萬建青,朱真,楊挺英,黃小潔

    (中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,北京 100081)

    解讀《中華人民共和國獸藥典》2015年版三部培養(yǎng)基質(zhì)量標準的增修訂內(nèi)容和特點,以便廣大使用者了解和掌握培養(yǎng)基質(zhì)量標準的變化,并為《中華人民共和國獸藥典》2020年版的編制提供建議。

    《中華人民共和國獸藥典》2015年版三部;培養(yǎng)基;標準;增修訂

    《中華人民共和國獸藥典》(以下簡稱《中國獸藥典》或獸藥典)作為國家獸藥技術法典,是國家獸藥標準體系的核心,也是獸藥研究、生產(chǎn)、檢驗、經(jīng)營、使用以及監(jiān)督管理等環(huán)節(jié)必須共同遵守、具有強制性的技術準則和法定依據(jù)。《中國獸藥典》2015年版[1]已于2016年8月23日由農(nóng)業(yè)部公告第2438號正式頒布,自2016年11月15日起實施。本文重點就培養(yǎng)基相關增修訂概況進行介紹,為新版獸藥典的有效順暢實施提供參考。

    1 增修訂概況

    2005年版獸藥典收錄了《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》的主要內(nèi)容,將其作為《中國獸藥典》三部,使我國獸用生物制品首次有了獨立法典。培養(yǎng)基作為一種重要的原輔材料,也因此首次出現(xiàn)在獸藥典中,該部獸藥典當時收錄了13種培養(yǎng)基。2010年版獸藥典三部[2]在2005年版獸藥典基礎上,將培養(yǎng)基的品種增加至15種,增加了酪胨瓊脂培養(yǎng)基(GA)和無血清支原體培養(yǎng)基。在《中國獸藥典》2015年版三部編撰過程中,結(jié)合工作實際,并借鑒國內(nèi)外藥典標準的一些先進經(jīng)驗,對培養(yǎng)基部分進行了較大的修改,包括培養(yǎng)基的品種、配方、配制方法、檢驗方法等。與2010年版獸藥典相比,《中國獸藥典》2015年版三部收錄了22種培養(yǎng)基,其中新增10種、修訂12種、刪除3種,增修訂概況見表1。

    表1 《中國獸藥典》2015年版三部培養(yǎng)基品種增修訂概況Tab 1 Revisions of medium classes including in Chinese Veterinary Pharmacopoeia (volume III, 2015 edition)

    2 主要變化及特點

    2.1 編寫體例更加科學 在編寫體例上,借鑒美國藥典[3]、歐洲藥典[4]、英國藥典[5]、日本藥局方[6](以下簡稱國際藥典)和中國藥典[5]關于無菌檢驗法和支原體檢驗法的做法,對《中國獸藥典》2015年版三部的檢驗用培養(yǎng)基實行分類收載,將無菌檢驗、支原體檢驗培養(yǎng)基單獨列出,融入相應方法中,如無菌檢驗培養(yǎng)基收錄至“附錄3306無菌檢驗或純粹檢驗法”,支原體檢驗培養(yǎng)基收錄至“附錄3308支原體檢驗法”中,其他檢驗培養(yǎng)基一并收錄至“附錄3704檢驗用培養(yǎng)基配制法”,具體見表2。通過分類收錄,調(diào)整了培養(yǎng)基相關內(nèi)容在《中國獸藥典》2015年版三部中的內(nèi)容分布,其編寫體例與國際要求相統(tǒng)一,提高了科學性和規(guī)范性。

    表2 各類培養(yǎng)基收錄情況Tab 2 The inclusion of media

    2.2 編寫內(nèi)容更加合理 對檢驗用培養(yǎng)基,借鑒國際藥典的做法,對一些復雜配方的培養(yǎng)基,主要是新鮮培養(yǎng)基,采用二級結(jié)構的形式給出明確的配方。這種二級結(jié)構形成的配方稱為基礎培養(yǎng)基。在新版獸藥典中,新增了牛肉湯和豬胃消化液兩種常用的基礎培養(yǎng)基,并以附注1、附注2的形式收錄,它們是普通肉湯、馬丁肉湯、明膠培養(yǎng)基等多種培養(yǎng)基的基礎培養(yǎng)基。通過收錄基礎培養(yǎng)基,使檢驗用培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分的含量相對準確,對全面提升檢驗用培養(yǎng)基質(zhì)量具有重要意義。

    對無菌檢驗和支原體檢驗培養(yǎng)基,分別從培養(yǎng)基及配方和培養(yǎng)基的質(zhì)量控制兩部分進行闡述。同時,增加了前言部分,首次明確各培養(yǎng)基對質(zhì)控菌的適用范圍,使標準編寫更加規(guī)范,提高了內(nèi)容的整體性和邏輯性。

    對編寫細節(jié)的處理更加嚴謹,比如將溫度設為一個范圍,而不是一個點,如將金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)溫度設為“35~37 ℃”,替代原有的“37 ℃”。又如,根據(jù)中國普通微生物菌種保藏管理中心對菌種名稱的最新規(guī)定,將“白色念珠菌”和“黑曲霉”的名稱分別修訂為“白假絲酵母”、“巴西曲霉”,同時保留了原有名稱作為新舊名稱銜接的依據(jù),提高了編寫的科學性和嚴謹性。

    2.3 檢驗用培養(yǎng)基標準體系更加嚴謹 檢驗方法與檢驗用培養(yǎng)基有效銜接,通過整理獸藥典檢驗方法中所涉及的培養(yǎng)基種類,新增7種制品質(zhì)量標準中提到但未收錄的培養(yǎng)基,刪除1種與獸藥典收載的檢驗項目無關的培養(yǎng)基,提高了新版獸藥典檢驗方法與檢驗用培養(yǎng)基標準之間的銜接,加強了制品質(zhì)量標準的原輔材料控制,豐富了檢驗用培養(yǎng)基標準的內(nèi)涵。

    增加了檢驗培養(yǎng)基的適用范圍,提高了可追溯性。同時,根據(jù)實際工作,對個別培養(yǎng)基配制進行修訂,提高了標準的可操作性。

    2.4 無菌檢驗培養(yǎng)基質(zhì)控標準基本與國際接軌 國際藥典無菌檢驗培養(yǎng)基種類、配制方法及質(zhì)控標準于2005年統(tǒng)一,中國藥典無菌檢驗培養(yǎng)基種類及質(zhì)控標準亦于2015年與國際通用標準接軌,而2010年版獸藥典無菌檢驗培養(yǎng)基種類、配方仍沿用1985年版中國藥典標準。在參照國際藥典和中國藥典的基礎上,《中國獸藥典》2015年版三部無菌檢驗培養(yǎng)基部分不斷借鑒和采用國際先進技術,完善質(zhì)控標準。

    調(diào)整無菌檢驗培養(yǎng)基種類,在充分驗證的基礎上,新增了胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB)作為檢驗真菌和需氧菌的培養(yǎng)基;優(yōu)化了硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基的配方并更名為硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(TG);刪除了酪胨瓊脂培養(yǎng)基(GA)和葡萄 糖蛋白胨培養(yǎng)基(GP) 。同時,參照制品檢驗標準的編寫體例,對培養(yǎng)基提出了明確的檢驗參數(shù),如性狀、pH值、無菌檢驗、微生物促生長試驗等,相關變化見表3、表4。

    嚴格檢驗標準,提升檢驗質(zhì)量,比如硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的性狀檢驗由“淡黃色澄明液體,溶液上層0.5~1.0cm為紅色”修訂為“流體,氧化層的高度(上層粉紅色)不超過培養(yǎng)基深度的1/3”。同時,明確質(zhì)控菌種培養(yǎng)條件,細化接種步驟,保證了培養(yǎng)基的安全有效、質(zhì)量可控。比如,刪除了酪胨瓊脂培養(yǎng)基(GA)和葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基(GP),原因是GA主用于純粹檢驗,在必要情況下對TG的補充,且可被其他適宜病原菌生長的培養(yǎng)菌所替代;而GP是我們一直沿用中國藥典的培養(yǎng)基,但2015年版中國藥典采用了國際通用的檢驗真菌和需氧菌的TSB培養(yǎng)基,且經(jīng)徐偉東等[7]和本實驗室驗證,二者微生物促生長能力無差異,經(jīng)中國獸藥典委員會討論,同意刪除GA、GP,同時用TSB代替GP,用于檢驗真菌和需氧菌。

    完善質(zhì)控菌種管理,借鑒和采用國際藥典的先進做法,根據(jù)菌種性質(zhì)對質(zhì)控菌種進行了分類,將5種質(zhì)控菌的分為需氧菌、厭氧菌和真菌。增加菌種溯源,或追溯到美國典型菌種保藏中心ATCC、或追溯到中國醫(yī)學微生物菌種保藏管理中心(CMCC),規(guī)范了質(zhì)控菌種的來源。

    表3 無菌檢驗培養(yǎng)基變化對比Tab 3 Comparative change of asepsis medium

    表4 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配方及配制方法變化對比Tab 4 Comparative change in confect and confect methods of fluid thioglycollate medium

    修訂后無菌檢驗培養(yǎng)基種類設置科學、檢查項目系統(tǒng)、質(zhì)控菌種規(guī)范,基本實現(xiàn)了與國際藥典和中國藥典同步。

    2.5 支原體檢驗培養(yǎng)基檢驗方法更加完善 整合檢驗方法。按照歸類闡述的原則,將5種支原體檢驗培養(yǎng)基整合為液體和固體培養(yǎng)基兩類檢驗方法,替代了原有5種培養(yǎng)基5個相似的檢驗方法。同時,刪除不適用質(zhì)控方法,液體培養(yǎng)基僅保留靈敏度測定;固體培養(yǎng)基僅保留微生物促生長試驗,減少了重復,提升了檢驗的可操作性,為進一步建立更加科學的質(zhì)量標準奠定基礎。

    完善培養(yǎng)基配方。一是規(guī)范了固體培養(yǎng)基基礎成分的名稱,基本培養(yǎng)基成分稱為“固體培養(yǎng)基基礎成分”,輔助液成為“輔助培養(yǎng)基成分”。二是統(tǒng)一了配方中的個別成分及名稱,用“無水磷酸二氫鉀”替代“磷酸二氫鉀”;用“葡萄糖(含1個結(jié)晶水)”替代 “葡萄糖”,用“瓊脂”替代“瓊脂粉”。

    新增質(zhì)控菌種溯源,或追溯到美國典型菌種保藏中心ATCC,或可在獸醫(yī)微生物菌種保存中心查詢到菌種來源,規(guī)范了質(zhì)控菌種的來源。

    3 結(jié) 語

    《中國獸藥典》2015年版三部培養(yǎng)基部分在積極推行檢驗檢測新技術、提供質(zhì)控標準方面取得了很大進步,但仍存在一些不足,比如培養(yǎng)基的標準化研究不夠深入,新鮮培養(yǎng)基替代方法研究基礎薄弱等,這些問題在今后的研發(fā)工作中需進一步加強。

    總之,《中國獸藥典》2015年版三部不僅擴大了培養(yǎng)基品種的收載,也擴大了對培養(yǎng)基新技術新方法的收載和應用,加強了培養(yǎng)基對產(chǎn)品質(zhì)量標準的可控性,在檢驗方法和質(zhì)控標準上更加細化、科學,對進一步建立嚴格的質(zhì)量標準,豐富培養(yǎng)基標準的內(nèi)涵,全面提升培養(yǎng)基對獸用生物制品的技術支撐作用具有重要意義。

    [1] 中國獸藥典委員會. 中華人民共和國獸藥典2015年版三部[S].

    Commission of Chinese Veterinary Pharmacopeia. Veterinary Pharmacopoeia of the People’s Republic of China volumeⅢ 2015 edition[S].

    [2] 中國獸藥典委員會. 中華人民共和國獸藥典2010年版三部[S].

    Commission of Chinese Veterinary Pharmacopeia. Veterinary Pharmacopoeia of the People’s Republic of China volumeⅢ 2010 edition[S].

    [3] 美國藥典[S]. 35:71.

    USP[S]. 35:71.

    [4] 歐洲藥典[S].7.0:151.

    EP[S].7.0:151.

    [5] 英國藥典[S].2011:A407.

    BP[S].2011:A407.

    [6] 日本藥局方[S].16:114.

    JP[S].16:114.

    [7] 許偉東,徐華玉. 胰酪胨大豆培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基的微生物促生長能力考察[J].中國藥品標準,2013,14(4):271.

    XU W D, XU H Y. Microbial growth promotion evaluation of tryptic soybean medium and modified matin medium[J]. Drug Standards of China 2013, 14(4):271.

    (編輯:陳希)

    Revisions of Medium Including in the Veterinary Pharmacopoeia of the People's Republic of China(Volume III, 2015 Edition)

    WAN Jian-qing,ZHU Zhen,YANG Ting-ying,HUANG Xiao-jie

    (China Institute of Veterinary Drug Control, Beijing 100081 ,China)

    The article described the supplement and revision of medium including in the Veterinary Pharmacopoeia of the People's Republic of China(volume III, 2015 edition),which would help users to understand and master the differences between the two Veterinary Pharmacopoeia of 2015 edition and 2010 edition. The article also gave some advices for Veterinary Pharmacopoeia of the People's Republic of China(2020 edition)

    Veterinary Pharmacopoeia of the People's Republic of China(2015 edition); medium; standards; revisions

    10.11751/ISSN.1002-1280.2017.5.14

    萬建青,副研究員,從事培養(yǎng)基等原材料檢驗研究與管理工作。E-mail:wanjianqing@ivdc.org.cn

    2017-02-15

    A

    1002-1280 (2017) 05-0068-05

    S851.66

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