三種高密度脂蛋白膽固醇檢驗(yàn)方法的比較

鄒淑琴

[摘要]目的 對(duì)比分析高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的檢驗(yàn)中聚陰離子多聚物/表面活性劑（PPD）法和PEG修飾酶/硫酸α-環(huán)糊精（PEGME）法及沉淀法的準(zhǔn)確性和特異性。方法 分別將已知濃度為1.0～2.0、2.0～4.0 mmol/L的HDL-C、LDL-C在生化分析儀上進(jìn)行測(cè)試，運(yùn)用兩點(diǎn)終點(diǎn)法對(duì)參數(shù)進(jìn)行分析，主、輔波長(zhǎng)分別為600、700 nm，在3 μl標(biāo)本量中加入240 μl R1，288 s后讀取吸光度A1，反應(yīng)5 min后再將80 μl R2加入其中，600 s后讀取吸光度A2。依據(jù)參考品的HDL-C、LDL-C濃度值計(jì)算其含量。結(jié)果 PPD法試劑對(duì)HDL-C具有相對(duì)緩慢的作用，對(duì)LDL的非特異性反應(yīng)較為顯著，達(dá)到10%～20%；PEGME法試劑對(duì)HDL-C具有相對(duì)較快的作用，對(duì)LDL-C基本不具有非特異性反應(yīng)，僅為5%以下。HDL-C、LDL-C、Trig的正常值分別為1.1～1.7、1.7～2.9、0.4～1.8 mmol/L，PPD法的結(jié)果高于沉淀法7%～15%。將參照設(shè)定為沉淀法結(jié)果，如果血清標(biāo)本在正常膽紅素濃度范圍內(nèi)，則PPD法測(cè)定結(jié)果就具有假性增高的表現(xiàn)，而如果血清標(biāo)本膽紅素濃度>20 μmol/L，則PPD法測(cè)定結(jié)果就具有明顯降低的表現(xiàn)，達(dá)到參照值的60%；膽紅素濃度變化極少干擾PEGME法測(cè)定結(jié)果。將參照設(shè)定為沉淀法結(jié)果，PPD法測(cè)定結(jié)果受到三酰甘油的影響顯著提升了20%以上，而三酰甘油濃度的提升使其進(jìn)一步假性增高；PEGME法較少受到三酰甘油的影響。兩者均與三酰甘油濃度成負(fù)性關(guān)系。PPD法的結(jié)果顯著高于沉淀法（t=4.303，P<0.05）。結(jié)論 HDL-C的檢驗(yàn)中PEGME法優(yōu)于PPD法，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)謹(jǐn)慎應(yīng)用PPD法，值得臨床重視。

[關(guān)鍵詞]高密度值蛋白膽固醇；沉淀法；聚陰離子多聚物/表面活性劑法；PEG修飾酶/硫酸α-環(huán)糊精法

[中圖分類(lèi)號(hào)] R446.11+2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2016）12（a）-0148-04

Comparative analysis of three test methods of high density protein cholesterol

ZOU Shu-qin

Clinical Laboratory，People′s Hospital of Fengshun County in Meizhou City，Guangdong Province，F(xiàn)engshun 514300，China

[Abstract]Objective To compare and analyze the accuracy and specificity of polyanionic polymer/surfactant （PPD） method and PEG-modified enzyme/sulfate α-cyclodextrin method （PEGME） and precipitation method in high-density lipoprotein cholesterol （HDL-C） inspection.Methods The known concentration 1.0 to 2.0，2.0 to 4.0 mmol/L of HDL-C，LDL-C were tested on biochemical analyzer，the parameters were analyzed by two point end method，the primary and secondary wavelength were 600 nm，700 nm，respectively，240 μl R1 were joint to 3 μl sample，288 s absorbance A1 volume was readed out，the reaction for 5 min before the 80 μl R2 added，600 s absorbance A2 after reading it.values were calculated its content according to the reference product of HDL-C，LDL-C concentration.Results PPD reagent had relatively slow effect on HDL-C，nonspecific response to LDL-C was up to 10% to 20%；PEGME reagent had relatively high effect on HDL-C，the LDL-C did not have a nonspecific response， only 5%.The normal values of HDL-C，LDL-C and 1.1 to 1.7 mmol/L were respectively Trig，1.7 to 2.9，0.4 to 1.8，and the result of PPD method was higher than that of precipitation method 7% to 15%.The reference set for precipitation results，if the serum samples in normal bilirubin concentration range，so the test results of the PPD method with false increase performance，and if the serum bilirubin concentration of >20 mol/L，then PPD assay results had significantly lower performance，reached the reference value of 60%；the change of bilirubin concentration little interference PEGME determination results.The reference set for precipitation results，PPD determination results were influnced by the triglyceride，and was significantly improved more than 20%，while raising the concentration of triglyceride increased further pseudo PEGME method；less triglyceride effect.The two were negatively correlated with triglyceride concentration.The result of PPD method was significantly higher than that of precipitation method （t=4.303，P<0.05）.Conclusion The PEGME method is better than PPD method in HDL-C inspection， the clinical laboratory should prudent application of PPD method，so is worthy of the clinical′s attention.

[Key words]High density protein cholesterol；Precipitation method；PPD method；PEGME method

在臨床陸續(xù)普及高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）直接測(cè)定法后，沉淀法已經(jīng)發(fā)展成為臨床采用的重要比較方法[1]?？贵w包裹（IS）法是直接測(cè)定法的起源，優(yōu)于臨床很難制備該法的特異性抗體，同時(shí)該法具有較多的反應(yīng)步驟，因此只在一些特定型號(hào)的儀器上適用，在臨床的應(yīng)用中受到了極大程度的限制[2]。目前，聚陰離子多聚物/表面活性劑（PPD）法和PEG修飾酶/硫酸α-環(huán)糊精（PEGME）法已經(jīng)在臨床得到了廣泛應(yīng)用，國(guó)內(nèi)主要對(duì)PPD法進(jìn)行了研究[3]。近年來(lái)，一種消除法出現(xiàn)，其對(duì)HDL-C沒(méi)有非特異性反應(yīng)，且具有較為特異而迅速的作用，特別是三酰甘油水平不對(duì)其造成影響。其類(lèi)似于低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）測(cè)定的消除法，但是仍然需要相關(guān)醫(yī)學(xué)學(xué)者對(duì)其試劑的確切性進(jìn)行考證[4]。為了將有效依據(jù)提供給臨床，本研究對(duì)比分析沉淀法、PPD法、PEGME法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1儀器和試劑

應(yīng)用序列超離制備HDL-C、LDL-C，d分別為1.070～1.100、1.025～1.050 g/ml。購(gòu)買(mǎi)BM公司生產(chǎn)的HDL-C/LDL-C校準(zhǔn)血清（HDL-C、LDL-C分別為1.40、2.61 mmol/L），本中心自備沉淀法試劑，購(gòu)買(mǎi)羅氏生產(chǎn)的PPD法、PEGME法試劑，具體見(jiàn)表1。

1.2方法

分別將已知濃度為1.0～2.0、2.0～4.0 mmol/L的HDL-C、LDL-C在生化分析儀上進(jìn)行測(cè)試，運(yùn)用兩點(diǎn)終點(diǎn)法對(duì)參數(shù)進(jìn)行分析，主、輔波長(zhǎng)分別為600、700 nm，在3 μl標(biāo)本量中加入240 μl R1，288 s后讀取吸光度A1，反應(yīng)5 min后再將80 μl R2加入其中，600 s后讀取吸光度A2。依據(jù)參考品的HDL-C、LDL-C濃度值將其含量計(jì)算出來(lái)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 PPD法、PEGME法試劑對(duì)HDL-C、LDL-C的作用情況

PPD法試劑對(duì)HDL-C具有相對(duì)緩慢的作用，對(duì)LDL-C的非特異性反應(yīng)較為顯著，達(dá)到了10%～20%；PEGME法試劑對(duì)HDL-C具有相對(duì)較快的作用，對(duì)LDL-C基本不具有非特異性反應(yīng)，僅為5%以下。由于人體LDL-C濃度顯著高于HDL-C，因此其結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確性。

2.2沉淀法、PPD法、PEGME法對(duì)正常血清標(biāo)本HDL-C的測(cè)試結(jié)果

HDL-C、LDL-C、Trig的正常值分別為1.1～1.7、1.7～2.9、0.4～1.8 mmol/L，PPD法的結(jié)果高于沉淀法7%～15%，提升原因?yàn)镻PD法對(duì)LDL-C具有非特異性反應(yīng)；PEGME法和沉淀法結(jié)果較好地吻合，見(jiàn)表2。

2.3 PPD法、PEGME法在不同膽紅素濃度下所測(cè)HDL-C值和沉淀法測(cè)值的比較

將參照設(shè)定為沉淀法結(jié)果，若血清標(biāo)本在正常膽紅素濃度范圍內(nèi)，則PPD法測(cè)定結(jié)果就具有假性增高的表現(xiàn)，而如果血清標(biāo)本膽紅素濃度>20 μmol/L，則PPD法測(cè)定結(jié)果就具有明顯降低的表現(xiàn)，達(dá)到參照值的60%；膽紅素濃度變化極少干擾PEGME法測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表3。

2.4 PPD法、PEGME法在不同三酰甘油濃度下所測(cè)HDL-C值和沉淀法測(cè)值的比較

將參照設(shè)定為沉淀法結(jié)果，PPD法測(cè)定結(jié)果受到三酰甘油的影響顯著提升了20%以上，而三酰甘油濃度的提升使其進(jìn)一步假性增高；PEGME法較少受到三酰甘油的影響，兩者均與三酰甘油濃度成負(fù)性關(guān)系，見(jiàn)表4。

2.5 PPD法、PEGME法在符合HDL-C/LDL-C校準(zhǔn)血清下所測(cè)HDL-C值和沉淀法測(cè)值的比較

PPD法的結(jié)果顯著高于沉淀法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.303，P<0.05），增高原因?yàn)槠鋵?duì)LDL-C具有非特異性反應(yīng)；PEGME法和沉淀法結(jié)果具有較好的吻合，見(jiàn)表5。

3討論

相關(guān)醫(yī)學(xué)學(xué)者研究表明[5]，PPD法缺乏足夠準(zhǔn)確的試劑，高膽紅素標(biāo)本甚至?xí)?2%的偏差出現(xiàn)。研究表明[6]，PPD法具有較差的準(zhǔn)確性和特異性，甚至認(rèn)為PPD法應(yīng)該在臨床檢驗(yàn)中慎用[7]，認(rèn)為該法無(wú)法將反應(yīng)酶系對(duì)LDL-C顯著的副作用從根本上消除掉，隨時(shí)可能會(huì)發(fā)生假性增高或降低，因此，臨床普遍認(rèn)為[8]，在檢驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)該慎用PPD法試劑。PEGME法具有較好的效果，但是三酰甘油會(huì)使其具有較低的結(jié)果[9]。本研究結(jié)果表明，PPD法試劑對(duì)HDL-C具有相對(duì)緩慢的作用，對(duì)LDL-C的非特異性反應(yīng)較為顯著，達(dá)到10%～20%；PEGME法試劑對(duì)HDL-C具有相對(duì)較快的作用，對(duì)LDL-C基本不具有非特異性反應(yīng)，僅為5%以下。由于人體LDL-C濃度顯著高于HDL-C，因此其結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確性；PPD法與沉淀法比較具有較大的偏差，結(jié)果具有較多的假性增高，發(fā)生這一現(xiàn)象的原因?yàn)槠渚哂休^差的準(zhǔn)確性和特異性，具體表現(xiàn)在對(duì)HDL-C具有較弱的反應(yīng)性，對(duì)LDL-C的非特異性反應(yīng)顯著，具有較差的抗膽紅素和三酰甘油干擾能力；PEGME法和沉淀法具有較好的吻合，其具有較為優(yōu)良的抗干擾性能、反應(yīng)速度及選擇性，因此具有較為理想的效果，顯著優(yōu)于PPD法，在常規(guī)分析中較為適用，將兩種測(cè)定方法的本質(zhì)情況基本反映出來(lái)，與上述相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致。

測(cè)試機(jī)制是PPD法和PEGME法差異的根源，PPD法對(duì)HDL-C進(jìn)行檢測(cè)的途徑為將聚陰離子對(duì)超低密度酯蛋白（VLDL）及LDL-C的吸附作用充分利用起來(lái)，同時(shí)將表面活性劑溶解有利HDL-C的作用充分利用起來(lái)。但是，該方法本真無(wú)法將反應(yīng)酶系接觸LDL-C引發(fā)的顯著副作用從根本上消除掉[10]。而PEGME法則對(duì)這一問(wèn)題進(jìn)行了較好的解決，一方面LDL-C受到了硫酸α-環(huán)糊精等的有效遮蔽，另一方面大分子LDL-C復(fù)合物接觸酶的現(xiàn)象在修飾酶中PEG修飾劑形成的空間障礙的作用下得到了有效避免[11]。在評(píng)價(jià)HDL-C自動(dòng)化測(cè)定試劑的過(guò)程中應(yīng)該至少?gòu)囊韵聝蓚€(gè)方面考察：①對(duì)HDL-C具有快速完全的反應(yīng)；②很少作用于或不作用于LDL-C等組分，結(jié)果的準(zhǔn)確性和非特異性反應(yīng)控制的嚴(yán)格性成顯著的正相關(guān)[12]。評(píng)定過(guò)程中應(yīng)該對(duì)應(yīng)用復(fù)合標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)象進(jìn)行有效的避免，將受到非特異性反應(yīng)的影響程度減輕到最低限度，從而將標(biāo)本情況客觀反映出來(lái)，對(duì)結(jié)果假性增高或降低現(xiàn)象的發(fā)生進(jìn)行有效的避免[13-18]。從總體上來(lái)說(shuō)，國(guó)內(nèi)關(guān)于有效提升HDL-C自動(dòng)化測(cè)定的相關(guān)研究尚少，多為低水平的重復(fù)或?qū)M(jìn)口品種的依賴(lài)，因此對(duì)一些至關(guān)重要的基礎(chǔ)研究工作進(jìn)行積極開(kāi)展極為必要和重要，如脂蛋白各組分解離對(duì)表面活性劑的影響、脂蛋白亞組分釋放受到緩沖液離子強(qiáng)度變化的影響等，只有這樣才能有效提升研究水平，切實(shí)有效地保證試劑質(zhì)量[19]。

綜上所述，HDL-C的檢驗(yàn)中PEGME法優(yōu)于PPD法，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)謹(jǐn)慎應(yīng)用PPD法，值得臨床重視。

[參考文獻(xiàn)]

[1]中國(guó)成人血脂異常防治指南制訂聯(lián)合委員會(huì).中國(guó)成人血脂異常防治指南[J].中華心血管病雜志，2007，33（5）：390-419.

[2]張琳，羅乾元.四川東北地區(qū)6249名健康體檢者血脂水平現(xiàn)狀分析[J].中國(guó)健康月刊A版，2011，30（11）：16-17.

[3]李志勤.健康體檢人群血脂四項(xiàng)水平的調(diào)查研究[J].醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2011，24（3）：363-364.

[4]霍素華.血脂檢驗(yàn)對(duì)糖尿病的臨床意義分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（27）：171-172.

[5]王榮就.血脂檢測(cè)及其異常病因診斷[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32（3）：429.

[6]甘紅，孫有霞.健康體檢血脂檢測(cè)結(jié)果分析及應(yīng)對(duì)措施[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師（醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)），2011，13（11）：206.

[7]杜修立，俞喬.住院醫(yī)療費(fèi)用的影響因素研究：基于醫(yī)院樣本的實(shí)證分析[J].中國(guó)衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)，2011，30（2）：59-61.

[8]蔣偉勇.中老年人健康體檢血脂異常分析[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志，2012，20（4）：637-638.

[9]廖春盛，戴小波，魏濤，等.分級(jí)檢驗(yàn)在腎臟生化中的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（6）：720-722.

[10]王俊杰.1589例體檢者血糖血脂檢測(cè)結(jié)果分析[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2013，15（1）：71-72.

[11]何治軍，王孟仙，寧敏曼.強(qiáng)肝膠囊治療非酒精性脂肪肝合并高脂血癥的療效觀察[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，10（14）：1518-1520.

[12]李凝旭，涂艷，劉曉霞，等.糖尿病合并骨質(zhì)疏松癥患者炎癥因子、脂肪因子變化的研究[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，6（5）：438-440.

[13]Reimund M，Larsson M，Kovrov O，et al.Evidence for two distinct binding sites for lipoprotein lipase on glycosylphosphatidylinositol-anchored high density lipoprotein-binding protein 1 （GPIHBP1）[J].J Biol Chem，2015，290（22）：13919-13934.

[14]Liu SY，Wang T，Xie J，et al.An analysis on the association between lipid metabolism and low birth body mass and relative factors among rural and urban adolescents[J].Zhongguo Yi Xue Ke Xue Yuan Cue Bao，2016，38（2）：210-216.

[15]Apro J，Parini P，Broijersén A，et al.Levels of atherogenic lipoproteins are unexpectedly reduced in interstitial fluid from type 2 diabetes patients[J].J Lipid Res，2015，56（8）：1633-1639.

[16]Piper DE，Romanow WG，Gunawardane RN，et al.The high-resolution crystal structure of human LCAT1[J].J Lipid Res，2015，56（9）：1711-1719.

[17]Luthi AJ，Lyssenko NN，Quach D，et al.Robust passive and active efflux of cellular cholesterol to a designer functional mimic of high density lipoprotein[J].J Lipid Res，2015，56（5）：972-985.

[18]Amar MJ，Kaler M，Courville AB，et al.Randomized double blind clinical trial on the effect of oral α-cyclodextrin on serum lipids[J].Lipids Health Dis，2016，15（1）：115.

[19]Bal BS.Effects of chandra nadi pranayama on hematological parameters[J].Ad Phys Edu，2015，5（2）：128-135.