野生和人工培養(yǎng)紅貝俄氏孔菌化學(xué)成分及抑菌活性測(cè)定

盧衛(wèi)紅　朱峰　吳善瑩　洪茵

摘要：[目的]考察不同培養(yǎng)基對(duì)紅貝俄氏孔菌乙酸乙酯提取物化學(xué)成分及抑菌活性的影響，為紅貝俄氏孔菌的人工培養(yǎng)提供理論依據(jù)。[方法]分別用葡萄糖酵母膏蛋白胨培養(yǎng)基（GYP）和綜合馬鈴薯培養(yǎng)基（CPDA）對(duì)紅貝俄氏孔菌進(jìn)行人工培養(yǎng)，采用乙酸乙酯提取菌絲體和發(fā)酵液化學(xué)成分，通過(guò)氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）對(duì)比分析野生和人工培養(yǎng)紅貝俄氏孔菌乙酸乙酯提取物的化學(xué)成分，通過(guò)微量稀釋培養(yǎng)法評(píng)價(jià)野生菌和人工培養(yǎng)紅貝俄氏孔菌乙酸乙酯提取物對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌活性。[結(jié)果]GC-MS分析結(jié)果表明，野生菌和培養(yǎng)菌絲體乙酸乙酯提取物的主要成分為棕櫚酸甲酯、棕櫚酸和油酸等，其中，從野生菌檢測(cè)出13種成分，含量較高的主要成分是亞油酸甲酯（18.522%）、棕櫚酸甲酯（15.976%）和棕櫚酸（11.164%）；產(chǎn)品GYP培養(yǎng)菌絲體共檢出13種成分，含量較高的主要成分是棕櫚酸（28.677%）、油酸（15.108%）和棕櫚酸甲酯（8.983%）；從CPDA培養(yǎng)菌絲體共檢出14種成分，含量較高的主要成分是棕櫚酸甲酯（22.575%）、棕櫚酸（17.643%）和硬脂酸甲酯（4.787%）；有7種相同成分共同存在于3種提取物中，有3種成分僅在野生菌中檢測(cè)到，有7種成分僅在培養(yǎng)菌絲體中發(fā)現(xiàn)。從GYP培養(yǎng)液中共檢出9種成分，含量較高的主要成分是十八甲基環(huán)壬硅氧烷（4.663%）、1-十九碳烯（2.423%）和（E）-3-十八碳烯（1.785%）；從CPDA培養(yǎng)液中共檢出14種成分，含量較高的主要成分是棕櫚酸（12.913%）、（z，E）-2，13-十八碳二烯-1-醇（5.985%）和棕櫚酸甲酯（5.591%）。體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，GYP培養(yǎng)液提取物對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性最強(qiáng)，其最低抑菌濃度（MIC）為0.80 mg/mL，其余提取物對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的MIC均為1.60 mg/mL。[結(jié)論]可采用GYP和CPDA作為培養(yǎng)基對(duì)野生紅貝俄氏孔菌進(jìn)行規(guī)模培養(yǎng)，以解決野生紅貝俄氏孔菌資源不足的問(wèn)題。

關(guān)鍵詞：紅貝俄氏孔菌；化學(xué)成分；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）；抑菌活性

0引言

[研究意義]大多數(shù)木生真菌除了具有降解木質(zhì)纖維素的功效外，還因含有多種活性成分而具有多種藥用價(jià)值（戴玉成，2009；戴玉成和崔寶凱，2010）。紅貝俄氏孑L菌[Earliella scabrosa（Pers.）Gilb.&Ryvarden]為木生菌，屬多孔菌科（Polyporaceae）俄氏孔菌屬（Earliella sp.），具有鎮(zhèn)驚、活血、止血、療風(fēng)、止癢等藥用功效（鄧春英等，2013）。由于野生紅貝俄氏孑L菌資源收集困難，目前對(duì)該菌的開(kāi)發(fā)利用還非常有限。因此，研究利用人工培養(yǎng)物替代野生子實(shí)體進(jìn)行紅貝俄氏孔菌活性成分的開(kāi)發(fā)利用具有重要現(xiàn)實(shí)意義。[前人研究進(jìn)展]高等真菌化學(xué)成分因種類、菌株、培養(yǎng)基組成和菌齡的不同而有所差異，且菌絲體與子實(shí)體、菌蓋與菌柄之間的化學(xué)成分也存在差異（姚秋生，2011）。在高等真菌培養(yǎng)條件研究方面，李德舜等（2008）以抗金黃色葡萄球菌活性為指標(biāo)，對(duì)楊樹(shù)菇液體發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化研究，獲得了最佳培養(yǎng)基。冀瑞卿等（2012）經(jīng)前期試驗(yàn)驗(yàn)證鵝膏菌菌株AV對(duì)楊樹(shù)爛皮病病原菌金黃殼囊孢菌有抑制作用，通過(guò)比色法和生物量測(cè)定結(jié)果得出其抑菌物質(zhì)產(chǎn)生的最佳營(yíng)養(yǎng)條件。蟲(chóng)草素是蛹蟲(chóng)草的主要有效化學(xué)成分，其最佳培養(yǎng)基為以大米、玉米等作主料，另添加10%-25%的蠶蛹粉或奶粉提高蛹蟲(chóng)草子實(shí)體的品質(zhì)（譚琪明，2014）。李羿等（2016）分別以營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、藥性培養(yǎng)基和復(fù)合藥性培養(yǎng)基為初始發(fā)酵培養(yǎng)基，比較天然茯苓、發(fā)酵茯苓、藥性發(fā)酵茯苓和復(fù)合藥性發(fā)酵茯苓等不同茯苓樣品化學(xué)成分的差異，發(fā)現(xiàn)不同初始發(fā)酵培養(yǎng)基對(duì)茯苓液體發(fā)酵有較大影響，不同來(lái)源茯苓間的化學(xué)成分存在明顯差異。目前有關(guān)紅貝俄氏孔菌的研究主要集中在生物降解、抗菌活性和精油成分分析方面。Guem等（2008）、Lyra等（2009）研究發(fā)現(xiàn)，E.scabrosa對(duì)合成染料具有很好的脫色效果。Peng和Don（2013）通過(guò)搖瓶培養(yǎng)E scabrosa，發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)菌絲水提取物和甲醇提取物對(duì)受試橡膠樹(shù)病原真菌表現(xiàn)出顯著的抗真菌活性。岑婉瑩等（2016）研究了野生紅貝俄氏孔菌精油化學(xué)成分，發(fā)現(xiàn)該精油具有一定的抗氧化活性。[本研究切人點(diǎn)]迄今為止，尚未見(jiàn)關(guān)于野生和人工培養(yǎng)紅貝俄氏孔菌化學(xué)成分及抑菌活性對(duì)比分析的研究報(bào)道。[擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題]分別用葡萄糖酵母膏蛋白胨培養(yǎng)基（GYP）和綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（CPDA）對(duì)紅貝俄氏孔菌進(jìn)行人工培養(yǎng)，通過(guò)氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）對(duì)比分析野生菌子實(shí)體、人工培養(yǎng)菌絲和培養(yǎng)液3種材料的乙酸乙酯提取物的化學(xué)成分，并采用肉湯微量稀釋培養(yǎng)法評(píng)價(jià)各提取物的體外抑菌活性，考察人工培養(yǎng)對(duì)紅貝俄氏孔菌化學(xué)成分和抑菌活性的影響，旨在為紅貝俄氏孔菌人工培養(yǎng)物的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

野生紅貝俄氏孔菌子實(shí)體于2015年6月采自廣東省佛山市南海區(qū)體育公園。通過(guò)組織分離法從新鮮野生菌子實(shí)體分離獲得純菌種。純菌種用CPDA培養(yǎng)基（去皮馬鈴薯200 g，蛋白胨1 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，KH2PO4 3 g，MgS04 1.5 g，維生素B1 10mg，水1000 mL，pH 6.0）培養(yǎng)，保存于4℃冰箱。分析純乙酸乙酯購(gòu)自廣州市番禺力強(qiáng)化工廠。主要儀器設(shè)備：RV8型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)IKA公司），氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）（型號(hào)7890A-5975C，美國(guó)安捷倫科技公司）。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1茵絲培養(yǎng) 將GYP培養(yǎng)基（葡萄糖20 g，蛋白胨5 g，酵母膏2 g，KHzP04 1 g，水1000 mL，pH6.0）和CPDA培養(yǎng)基分別裝入1000 mL三角瓶中，每種培養(yǎng)基各2瓶，每瓶300 mL。0.15 MPa滅菌30 min，冷卻后通過(guò)無(wú)菌操作將菌種分別接種到三角瓶中，室溫靜置培養(yǎng)45 d。

1.2.2有效成分提取 培養(yǎng)物用紗布過(guò)濾，得菌絲體和培養(yǎng)液。菌絲體風(fēng)干后用100 mL甲醇室溫浸泡提取3次，每次24 h。合并甲醇提取液，合并液于50℃通過(guò)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到菌絲體浸膏。浸膏用乙酸乙酯溶解，硅膠短柱過(guò)濾，用乙酸乙酯充分洗脫。乙酸乙酯洗脫液于50℃下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，回收溶劑后剩余的洗脫物即為菌絲提取物，源于GYP培養(yǎng)基的菌絲提取物記為JSGYP，源于CPDA培養(yǎng)基的菌絲提取物記為JSCPDA。野生菌子實(shí)體按相同方法提取，得提取物記為FBWILD。

培養(yǎng)液分別用等體積乙酸乙酯萃取3次，萃取液合并后在50℃下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，回收乙酸乙酯后，得到培養(yǎng)液粗提物。粗提物用乙酸乙酯溶解，硅膠短柱過(guò)濾，用乙酸乙酯充分洗脫，乙酸乙酯洗脫液合并后在50℃下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，回收溶劑，剩余的洗脫物即為紅貝俄氏孔菌培養(yǎng)液提取物，其中源于GYP培養(yǎng)基的培養(yǎng)液提取物記為FLGYP，源于CP-DA培養(yǎng)基的培養(yǎng)液提取物記為FLCPDA。

1.2.3 GC-MS分析 樣品溶液：分別取一定量FBWILD、JSGYP、JSCPDA、FLGYP和FLCPDA共5種提取物，用乙酸乙酯溶解并配制成1 mg/mL樣品溶液。采用GC-MS分析樣品溶液化學(xué)成分。色譜條件：色譜柱采用J&w 122-0132DB-1ms石英毛細(xì)管柱（30 m×250um×0.25 Bm）；升溫程序：起始溫度65℃，恒溫4 min，然后以40℃/min速度升溫至280℃，恒溫5 min；溶劑延遲：6.8 min；進(jìn)樣口溫度：260℃，進(jìn)樣量1uL；載氣為氦氣。質(zhì)譜條件：EI離子源，離子源溫度220℃，電子能量70 eV，掃描范圍50-550 m/z。定性定量方法：峰面積歸一法。質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)：美國(guó)NIST08.L譜庫(kù)。

1.2.4體外抑茵活性試驗(yàn) 采用CLSI（2012）介紹的微量稀釋培養(yǎng)法測(cè)定紅貝俄氏孔菌5種提取物FBWILD、JSGYP、JSCPDA、FLGYP和FLCPDA體外對(duì)金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureu）和大腸桿菌（Escherichia coli）的抑制作用，以獸用鏈霉素和青霉素為對(duì)照。操作步驟：（1）制作供試菌菌懸液：將供試細(xì)菌接種于M-H肉湯培養(yǎng)基中，于室溫下靜置培養(yǎng)18-24 h，獲得細(xì)菌懸液，用M-H肉湯培養(yǎng)基將細(xì)菌懸液稀釋成106 CFU/mL接種液。（2）配制抑菌藥液：用二甲基亞砜溶液分別將5種紅貝俄氏孑L菌提取物和對(duì)照藥品溶解并配制成起始濃度為12.80 mg/mL的藥液（參照物初始濃度為1.28 mg/mL），用針頭濾器濾菌備用。（3）96微孔板的準(zhǔn)備：選用無(wú)菌96微孑L板，外圍孔中加200uL無(wú)菌水，其余孔中加100uL M-H肉湯培養(yǎng)基；將濾菌后的藥液100uL加到各行的第1孔中，用移液槍吸打混勻，再將稀釋后的藥液100uL移入第2孔中，如此反復(fù)，對(duì)藥液進(jìn)行倍半稀釋，使不同孔中藥液濃度范圍為6.40-0.025 mg/mL；最后向每一檢測(cè)孔中均加入接種液100uL。（4）抑菌培養(yǎng)：將培養(yǎng)板置于36 ℃孵育18 h，再向每孔加入20uL對(duì)碘硝基四唑紫（INT），繼續(xù)孵育1 h，觀察孔內(nèi)溶液的顏色變化，粉紅色的板孔為陽(yáng)性生長(zhǎng)，最低抑菌濃度（MIC）定義為阻止顏色變?yōu)榉奂t色的最低藥物濃度。試驗(yàn)重復(fù)3次。

2結(jié)果與分析

2.1紅貝俄氏孔菌野生子實(shí)體和培養(yǎng)菌絲化學(xué)成分對(duì)比分析結(jié)果

從3.38 g風(fēng)干野生菌子實(shí)體得到膏狀提取物FBWILD 0.11 g，提取率為3.25%；從600 mL GYP培養(yǎng)基獲得的2.88 g風(fēng)干菌絲體得到膏狀提取物JSG-YP 0.14 g，提取率為4.86%；從600 mL CPDA培養(yǎng)基獲得的2.96 g風(fēng)干菌絲體得到膏狀提取物JSCPDA0.14 g，提取率為4.73%。

采用GC-MS分析FBWILD、JSGYP和JSCPDA的化學(xué)成分得到總離子流色譜圖（圖1）。從FBWILD分離獲得59個(gè)組分，通過(guò)NIST08.L譜庫(kù)檢索，共檢出13種化學(xué)成分，占總油量的74.943%，其主要成分分別為亞油酸甲酯（18.522%）、棕櫚酸甲酯（15.976%）、棕櫚酸（11.164%）、油酸（7.660%）和苯甲酸（5.330%）；從JSGYP分離獲得50個(gè)組分，通過(guò)NIST08.L譜庫(kù)檢索，共檢出13種化學(xué)成分，占總油量的74.886%，其主要成分分別為棕櫚酸（28.677%）、油酸（15.108%）、棕櫚酸甲酯（8.983%）、硬脂酸（6.626%）和油酸甲酯（4.160%）；從JSCPDA分離獲得61個(gè)組分，通過(guò)NIST08.L譜庫(kù)檢索，共檢出14種化學(xué)成分，占總油量的65.131%，其主要成分分別為棕櫚酸甲酯（22.575%）、棕櫚酸（17.643%）、硬脂酸甲酯（4.787%）、硬脂酸（4.277%）和油酸（3.861%）（表1）。

由圖1和表1可知，F(xiàn)BWILD、JSGYP和JSCPDA的化學(xué)組成不完全相同，但大多數(shù)化學(xué)成分相同，只是含量發(fā)生了變化，如棕櫚酸在野生菌中含量為11.164%，在GYP培養(yǎng)菌絲中含量為28.677%，在CPDA培養(yǎng)菌絲中含量為17.643%。分析已鑒定出的化學(xué)成分發(fā)現(xiàn)，在3種樣品中均檢測(cè)到十五碳酸甲酯、棕櫚酸甲酯、棕櫚酸、珠光脂酸甲酯、亞油酸甲酯、油酸和硬脂酸等7種化合物，其中棕櫚酸甲酯、棕櫚酸和油酸是3種樣品共同的主要成分；十五碳酸只存在于FBWILD和JSGYP中，2-十一烷酮、油酸甲酯和（10反，12順）-十八碳二烯酸甲酯只存在于人工培養(yǎng)菌絲中；苯甲酸、9-甲基肉豆蔻酸甲酯和珠光脂酸只在野生菌子實(shí)體中檢測(cè)到，2-羥基硬脂酸甲酯和肉豆蔻酸甲酯只在JSCPDA中檢測(cè)到，十九碳烷和二十八碳烷僅在JSGYP中檢測(cè)到。

2.2紅貝俄氏孔菌培養(yǎng)液化學(xué)成分對(duì)比分析結(jié)果

采用GYP和CPDA兩種培養(yǎng)基對(duì)紅貝俄氏孔菌進(jìn)行人工培養(yǎng)。從600 mL GYP培養(yǎng)液獲得的1.66 g粗提物中得到膏狀洗脫物FLGYP 0.44 g，產(chǎn)量0.73mg/mL。從600 mL CPDA培養(yǎng)液獲得的1.34 g粗提物中得到洗脫物FLGYP 0.37 g，產(chǎn)量0.62 mg/mL。

用GC-MS分析FLGYP和FLCPDA的化學(xué)成分得到總離子流色譜圖（圖2）。從FLGYP分離獲得68個(gè)組分，通過(guò)NIST08.L譜庫(kù)檢索，共檢出9種化學(xué)成分，占總油量的14.361%，其中含量較高的成分依次為十八甲基環(huán)壬硅氧烷（4.663%）、1-十九碳烯（2.423%）、（E）-3-十八碳烯（1.785%）、棕櫚酸甲酯（1.642%）和十八烷基2，2，2-三氯乙基碳酸酯（1.546%）；從FLCPDA分離獲得63個(gè)組分，通過(guò)NIST08.L譜庫(kù)檢索，共檢出14種化學(xué)成分，占總油量的47.485%，其主要成分分別為棕櫚酸（12.913%）、（Z，E）-2，13-十八碳二烯-1-醇（5.985%）、棕櫚酸甲酯（5.591%）、亞油酸甲酯（4.492%）和1-十九碳烯（3.420%）（表2）。

由圖2和表2可知，F(xiàn)LGYP和FLCPDA的化學(xué)組成有明顯差異。FLGYP的化學(xué)成分更豐富，有68個(gè)組分，而FLCPDA只有63個(gè)組分。分析已鑒定出的化學(xué)成分發(fā)現(xiàn)，在FLGYP和FLCPDA中均檢測(cè)到棕櫚酸甲酯、棕櫚酸、棕櫚酸乙酯、1-十九碳烯、十八烷基2，2，2-三氯乙基碳酸酯和2，4-二（1-甲基-1-苯基乙基）苯酚，但含量發(fā)生了變化，如棕櫚酸在GYP培養(yǎng)中含量為0.322%，而在CPDA培養(yǎng)液中為12.913%；（E）-3-十八碳烯、十八甲基環(huán)壬硅氧烷和（E）-1，3，3-三甲基-2-（3-甲基-2-亞甲基-3-丁烯叉）環(huán)己醇只存在于FLGYP中；十七碳烷、十五碳酸甲酯、3，5-二叔丁基-4-羥基苯丙酸甲酯、亞油酸甲酯、亞油酸、（Z，E）-2，13-十八碳二烯-1-醇、7，11-十六碳二烯醛和1-二十四碳醇只在FLCPDA中檢測(cè)到。

2.3體外抑菌活性測(cè)定結(jié)果

紅貝俄氏孔菌5種不同提取物體外對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌活性測(cè)定結(jié)果（表3）表明，5個(gè)樣品均有一定的抑菌活性，其中FLGYP的抑菌活性最強(qiáng)，對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為0.80 mg/mL，其余樣品對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的MIC均為1.60 mg/mL。

3討論

高等真菌的生長(zhǎng)及其化學(xué)成分受碳源、氮源等因素的影響（譚琪明，2014；楊培新等，2015），獲得高等真菌產(chǎn)活性物質(zhì)的最佳培養(yǎng)條件是馴化野生真菌的關(guān)鍵，而GC-MS在易揮發(fā)化學(xué)成分分析中應(yīng)用廣泛（岑婉瑩等，2016），因此采用GC—MS可快速準(zhǔn)確地分析不同培養(yǎng)基下紅貝俄氏孔菌子實(shí)體和培養(yǎng)液易揮發(fā)化學(xué)成分。

本研究通過(guò)GYP和CPDA兩種培養(yǎng)基對(duì)野生紅貝俄氏孔菌菌絲進(jìn)行人工培養(yǎng)，結(jié)果該菌在供試兩種培養(yǎng)基中長(zhǎng)勢(shì)良好，從600 mL GYP培養(yǎng)基中獲得風(fēng)干菌絲2.88 g，產(chǎn)量4.80 mg/mL，從600 mL CPDA培養(yǎng)基中獲得風(fēng)干菌絲2.96 g，產(chǎn)量4.93 mg/mL。另外，從人工培養(yǎng)菌絲獲得的洗脫物獲得率分別為4.86%（JSGYP）和4.73%（JSCPDA），均高于從野生菌子實(shí)體獲得的洗脫物FBWILD獲得率（3.25%），特別是從培養(yǎng)液中還獲得了該菌的次級(jí)代謝粗提物，從600 mL GYP培養(yǎng)液獲得粗提物1.66 g，產(chǎn)量2.77mg/mL，從600 mL CPDA培養(yǎng)液中獲得粗提物1.34 g，產(chǎn)量2.23 mg/mL。

GC-MS分析結(jié)果表明，人工培養(yǎng)菌絲和野生菌子實(shí)體的化學(xué)組成不完全相同，而且含量發(fā)生了明顯變化。如棕櫚酸甲酯在野生菌子實(shí)體中的含量為15.976%，但在人工培養(yǎng)菌絲中的含量分別為8.983%（GYP培養(yǎng)基）和22.575%（CPDA培養(yǎng)基）。一些存在于野生菌子實(shí)體中的化學(xué)成分如苯甲酸在人工培養(yǎng)菌絲中未能發(fā)現(xiàn)，但在人工培養(yǎng)菌絲中發(fā)現(xiàn)了野生菌子實(shí)體不存在的化學(xué)成分，特別是從人工培養(yǎng)液中獲得了豐富的次級(jí)代謝產(chǎn)物，大部分次級(jí)代謝產(chǎn)物在野生菌子實(shí)體或人工培養(yǎng)菌絲中均未得到。對(duì)FLGYP和FLCPDA的GC-MS分析表結(jié)果明，培養(yǎng)基不同，其次級(jí)代謝產(chǎn)物也不完全相同。本研究通過(guò)GC-MS只鑒定出了供試5個(gè)洗脫物中的少數(shù)化學(xué)成分，大多數(shù)化學(xué)成分未能得到鑒定，仍需要進(jìn)一步通過(guò)分離純化，結(jié)合NMR等技術(shù)加以解析。

體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，紅貝俄氏孔菌不同提取物FBWILD、JSGYP、JSCPDA、FLGYP和FLCPDA對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均有一定的抑菌活性，其中FLGYP的抑菌活性最強(qiáng)，對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為0.80 mg/mL，其余樣品對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的MIC均為1.60 mg/mL，說(shuō)明這些樣品中可能含有相同的抑菌活性成分，但FLGYP對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性更強(qiáng)，說(shuō)明FLGYP中可能還含有其他抑菌活性成分。

由于GC-MS只能通過(guò)與NIST譜庫(kù)中已知化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)對(duì)比以鑒定樣品中的化合物，對(duì)于樣品中含有但NIST譜庫(kù)中未記錄的化合物尚未能得到鑒定。同時(shí)，樣品中的高沸點(diǎn)化合物也不能通過(guò)GC-MS進(jìn)行鑒定。因此，紅貝俄氏孔菌中可能存在其他未知的抗菌活性成分，有待通過(guò)規(guī)模培養(yǎng)，采用現(xiàn)代分離純化技術(shù)獲得足夠量的單體化合物，然后進(jìn)一步通過(guò)核磁共振波譜、高分辨質(zhì)譜等技術(shù)加以結(jié)構(gòu)解析。

4結(jié)論

運(yùn)用GC-MS分析紅貝俄氏孔菌野生菌子實(shí)體、人工培養(yǎng)菌絲體和培養(yǎng)液乙酸乙酯提取物的化學(xué)成分，并通過(guò)NIST08.L譜庫(kù)檢索鑒定樣品中的化合物，結(jié)果表明，GYP和CPDA培養(yǎng)獲得的菌絲體與野生菌子實(shí)體的化學(xué)組成不完全相同，主要成分均為棕櫚酸、棕櫚酸甲酯和油酸等，但含量存在差異；從人工培養(yǎng)獲得的培養(yǎng)液中可獲得豐富的次級(jí)代謝產(chǎn)物，主要成分均為棕櫚酸甲酯和棕櫚酸，但在不同培養(yǎng)條件下各培養(yǎng)液中的次級(jí)代謝產(chǎn)物存在差異。體外抑菌活性試驗(yàn)結(jié)果表明，紅貝俄氏孔菌人工培養(yǎng)菌絲提取物及野生菌子實(shí)體提取物對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均表現(xiàn)出抑制活性。因此，可采用GYP和CPDA為培養(yǎng)基對(duì)野生紅貝俄氏孔菌進(jìn)行規(guī)模培養(yǎng)，以解決野生紅貝俄氏孔菌資源不足的問(wèn)題。