婦幼保健院內(nèi)乳腺科CA—MRSA感染危險因素分析及耐藥基因檢測

賴衛(wèi)明+趙長安+唐玲玲+穆小萍

【摘要】 目的：分析婦幼保健院內(nèi)獲得性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（CA-MRSA）感染危險因素及耐藥基因檢測情況。方法：將2014年1月-2016年7月婦幼保健院內(nèi)CA-MRSA感染的乳腺癌患者560例作為研究對象，分析導致CA-MRSA感染的危險因素，使用聚合酶連反應(yīng)方法（Polymerase-Chain Reaction，PCR）檢測耐藥基因。結(jié)果：多因素非條件Logistic回歸分析顯示，基礎(chǔ)疾病嚴重、侵入性操作及長期使用抗菌藥物是導致CA-MRSA感染的危險因素（P<0.05）。結(jié)論：基礎(chǔ)疾病嚴重、侵入性操作及長期使用抗菌藥物是導致CA-MRSA感染的危險因素，CA-MRSA呈多重耐藥性。

【關(guān)鍵詞】 婦幼保健院； CA-MRSA； 感染危險因素； 耐藥基因； 分析

Analysis of Risk Factors of CA-MRSA Infection and Detection of Drug Resistance Genes in Department of Internal Medicine of Maternal and Child Health Care Hospital/LAI Wei-ming，ZHAO Chang-an，TANG Ling-ling，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（12）：128-130

【Abstract】 Objective：To analyze the risk factors of CA-MRSA infection and the detection of drug resistance genes in Maternal and Child Health Care Hospital.Method：560 CA-MRSA infection in breast cancer patients in Maternal and Child Health Care Hospital from January 2014 to July 2016 were selected as objects，the risk factors of CA-MRSA infection were analyzed，and the drug resistance genes were detected by polymerase chain reaction.Result：Multivariate non conditional Logistic regression analysis showed that severe underlying diseases，invasive procedures， and long-term use of antibiotics were risk factors for CA-MRSA infection（P<0.05）.Conclusion：The underlying disease is serious，invasive operation and long-term use of antibiotics is a risk factor for CA-MRSA infection，CA-MRSA showed multiple drug resistance.

【Key words】 Maternal and child health care； CA-MRSA； Infection risk factor； Drug resistance gene； Analysis

First-authors address：Guangdong Province Maternal and Child Health Care Hospital，Guangzhou 511400，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.12.036

本研究將2014年1月-2016年7月婦幼保健院內(nèi)獲得性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（CA-MRSA）感染的乳腺癌患者560例作為研究對象，現(xiàn)將本次研究的結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2014年1月-2016年7月婦幼保健院內(nèi)CA-MRSA感染的乳腺癌患者560例作為研究對象，所有患者均為乳腺癌，年齡最小22歲，最大67歲，平均（46.5±2.6）歲。入選患者在就診前1周均無系統(tǒng)應(yīng)用抗生素史，排除先天或后天免疫缺陷疾病的患者，詳細記錄患者的性別、年齡、住址、臨床診斷。

1.2 方法

1.2.1 采集菌株 采集患者發(fā)生感染部位的分泌物，使用無菌棉簽蘸取，如果患者感染部位有完整的水泡或膿皰，要用無菌注射器抽取皰內(nèi)液體，將提取得分泌物放在血平皿中[1-2]，在35 ℃的條件下，孵育18～24 h，根據(jù)菌落的形態(tài)、色素和產(chǎn)生的溶血素識別金黃葡萄球菌，鑒定方法是用梅里埃的VITEK 2 COMPACT GP鑒定卡鑒定[3]。將鑒定后確定為金黃葡萄球菌的菌株經(jīng)單一菌落轉(zhuǎn)種在血平皿上進行純培養(yǎng)，在35 ℃的條件下，孵育24 h，然后使用紙片法收集后，在-80 ℃的冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆肹4-5]。

1.2.2 MRSA檢測 使用GP67藥敏卡的苯唑西林（OX）耐藥和頭孢西丁確證試驗陽性。

1.2.3 PCR檢測 使用細菌試劑盒提取細菌中的DNA，將0.5～2.0 mL培養(yǎng)液，在低溫高速離心機中離心30 s，轉(zhuǎn)速為10 000 r/min，將上清液丟棄，盡可能的吸凈上清液，收集菌體[6]。然后加入200 μL緩沖液RB重懸洗滌細胞，同樣使用離心機離心30 s，轉(zhuǎn)速10 000 r/min，將上清液丟棄后，振蕩細胞或吹打重懸于200 μL緩沖液RB中[7]，進行PCR檢測[8-10]。

1.2.4 PCR反應(yīng)條件 擴增mecA是在94 ℃的條件下預(yù)變性3 min，50 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，反復循環(huán)35次，最后在72 ℃的時候延伸5 min，在反應(yīng)結(jié)束后，將得出的產(chǎn)物放在4 ℃的條件下保存[11-14]。擴增tetM4、aac（6）/aph（2”）、aph（3）-Ⅲ、ant（4，4”）的基因檢測方法相同，都是在93 ℃的條件下預(yù)變性2 min，93 ℃變形30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，共35次循環(huán)。擴增erm基因反應(yīng)條件是在93 ℃的條件下預(yù)變性2 min，在93 ℃ 1 min，37 ℃ 90 s，72 ℃ 2 min，循環(huán)35次[15]。

1.3 觀察指標 觀察統(tǒng)計患者CA-MRSA感染的危險因素、9種抗菌藥物的耐藥性。

1.4 統(tǒng)計學處理 本次研究收集的所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以平均值±標準差（x±s），采用t檢驗；單因素和多因素統(tǒng)計分析分別采用 x2檢驗和Logistic回歸模型，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 CA-MRSA感染危險因素分析 根據(jù)患者感染危險因素，對年齡、婚姻狀況、基礎(chǔ)性疾病、侵入性操作、抗菌藥物使用時間進行單因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，基礎(chǔ)性疾病、侵入性操作、抗菌藥物使用時間與感染的發(fā)生具有相關(guān)性（P<0.05），見表1。根據(jù)單因素分析結(jié)果，行多因素非條件Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，基礎(chǔ)疾病嚴重、侵入性操作和長期使用抗菌藥物是導致CA-MRSA感染的危險因素（P<0.05），見表2。

2.2 耐藥基因檢測分析 通過PCR檢測方法，檢測出CA-MRSA菌株304株，對304株菌株進行耐藥基因的檢查，結(jié)果顯示，四環(huán)類（tetM）耐藥菌211株，氨基糖苷類aac（6）/aph（2”）耐藥菌54株，紅霉素（erm）相關(guān)耐藥菌24株，氨基糖苷類aph（3）-Ⅲ耐藥菌15株，而未檢測出ant（4，4”）。

3 討論

為分析婦幼保健院內(nèi)CA-MRSA感染危險因素及耐藥基因檢測情況，本研究將2014年1月-2016年

7月婦幼保健院內(nèi)CA-MRSA感染的乳腺癌患者560例作為研究對象，分析導致CA-MRSA感染的危險因素，使用聚合酶連反應(yīng)方法（Polymerase-Chain Reaction，PCR）檢測耐藥基因，結(jié)果顯示，根據(jù)患者感染危險因素，患者的年齡、婚姻狀況、基礎(chǔ)性疾病、侵入性操作、抗菌藥物使用時間進行單因素Logistic回歸分析顯示，基礎(chǔ)性疾病、侵入性操作、抗菌藥物使用時間與感染的發(fā)生具有相關(guān)性。而根據(jù)單因素分析結(jié)果，行多因素非條件Logistic回歸分析顯示，基礎(chǔ)疾病嚴重、侵入性操作和長期使用抗菌藥物是導致CA-MRSA感染的危險因素（P<0.05）。分析原因，基礎(chǔ)性疾病如呼吸系統(tǒng)疾病、血液疾病、復合外傷等，會使患者存在被感染的風險，而侵襲性操作多為機械通氣、靜脈置管等方式，再加上患者使用抗菌藥物的時間較長，患病后機體免疫功能下降，從而增加了感染機率。而在導致感染發(fā)生的形式上，最初的感染是在受損皮膚和軟組織上[17]，但在感染后未及時治療會導致重癥肺炎或肺膿腫，嚴重時會導致患者休克，因此，要對患者的感染情況給予鑒別。

在耐藥基因檢測上，本研究采用PCR檢測方法，檢測出CA-MRSA菌株304株，對304株菌株進行耐藥基因的檢查，結(jié)果顯示，四環(huán)類（tetM）耐藥菌211株，氨基糖苷類aac（6）/aph（2”）耐藥菌54株，紅霉素（erm）相關(guān)耐藥菌24株，氨基糖苷類aph（3）-Ⅲ耐藥菌15株，而未檢測出ant（4，4”）。分析原因，耐甲氧西林金黃葡萄球菌能夠改變抗生素作用位點，對氨基糖苷類等抗生素產(chǎn)生耐藥性[18]。由于mecA基因復合體的結(jié)構(gòu)明確，主要是mecA和mecR1、mecI組成，對耐甲氧西林金黃葡萄球菌耐藥性的表達起到控制的作用[15-18]，mecA基因復合體是MRSA的分子標志，只存在葡萄球菌中，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，其作為耐甲氧西林金黃葡萄球菌的分子基礎(chǔ)，是甲氧西林金黃色葡萄球菌敏感株不具有的，因此是檢驗?zāi)退幖籽跷髁纸瘘S葡萄球菌的金標準。

參考文獻

[1]黃冠新.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌院內(nèi)感染的危險因素與防治現(xiàn)狀[J].應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學，2012，18（3）：189-192.

[2]吳霞，王傳清，嚴秀峰，等.兒童耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的耐藥性和耐藥基因研究[J].中華傳染病雜志，2013，31（11）：641-645.

[3]張蓉映，朱健銘，翁幸鐾，等.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌毒力與耐藥基因分型研究[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2014，24（14）：3384-3385，3388.

[4]吳德群，巢國祥.金黃色葡萄球菌耐藥基因分析及多位點序列分子分型[J].臨床檢驗雜志，2014，32（7）：513-518.

[5]曹敏.78株耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的耐藥分析[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2014，12（24）：3388-3389.

[6]郝崇華，萬艷紅，裴世靜，等.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的耐藥基因與毒力基因分析[J].中國藥物與臨床，2015，15（12）：1712-1713.

[7]程運濤，吳為民，常青，等.社區(qū)獲得性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌兒童分離株功能基因分型[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2014，24（20）：4967-4969，4995.

[8]張新玲，向大偉，謝文龍，等.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌環(huán)境影響因素研究[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2014，24（20）：4963-4966.

[9]周劍波，董筱莉，翁幸鐾，等.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌耐藥基因與毒力基因檢測研究[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2014，24（17）：4164-4167.

[10]林顏玉，陳文偉，王柏旺，等.中山市部分地區(qū)金黃色葡萄球菌感染的臨床分布及耐藥基因研究[J].廣州醫(yī)藥，2016，47（2）：7-10.

[11]郭云龍，趙先進，韓宏艷，等.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌耐藥表型分型與耐藥基因檢測分析研究[J].中國藥物與臨床，2012，12（1）：32-35.

[12]溫偉洪，李介華，鐘國權(quán)，等.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌醫(yī)院感染與社區(qū)感染比較分析[J].實用醫(yī)學雜志，2013，29（5）：810-812.

[13]蘇冬梅，黃燕，劉一，等.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌血流感染的臨床特征及易感因素分析[J].實用醫(yī)學雜志，2016，32（20）：3412-3415.

[14]倪俊，許獻榮，陳瑞彩，等.難愈性創(chuàng)面感染耐甲氧西林金黃色葡萄球菌危險因素[J].中國感染控制雜志，2014，13（9）：530-533.

[15]牛瑞兵，郭利平，王新剛，等.醫(yī)院獲得性與社區(qū)獲得性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌耐藥性差異[J].中國感染控制雜志，2015，11（7）：476-478，482.

[16]葉慧芬，曾俊韶，覃文周，等.兒童感染社區(qū)獲得性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的研究進展[J].臨床兒科雜志，2013，13（8）：779-783.

[17]王文灝，曹銀芳.356例耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的感染分布及耐藥性分析#[J].中國醫(yī)藥導刊，2015，11（8）：843-844.

[18]邢茜，江榮林，馬偉斌，等.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的研究進展[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2014，24（14）：3638-3640.