姜黃素對2型糖尿病腎病大鼠保護(hù)作用及機(jī)制研究

王道周 裘志成 楊 艷 張滌華

(銅仁市人民醫(yī)院腎臟內(nèi)分泌血液科，銅仁554300)

姜黃素對2型糖尿病腎病大鼠保護(hù)作用及機(jī)制研究

王道周 裘志成①楊 艷②張滌華②

(銅仁市人民醫(yī)院腎臟內(nèi)分泌血液科，銅仁554300)

目的：探討姜黃素對2型糖尿病腎病(DN)大鼠保護(hù)作用及可能的作用機(jī)制。方法：30只Wistar大鼠隨機(jī)分為對照組、DN組和姜黃素組，每組10只。DN組和姜黃素組采用高脂飼料喂養(yǎng)后注射鏈脲佐菌素建立DN模型，造模成功后姜黃素組以200 mg/kg姜黃素灌胃，每天1次，對照組和DN組給予等量羧甲基纖維素鈉灌胃，連續(xù)給藥12周。末次給藥后收集24 h尿量，稱重，腹腔麻醉后心臟取血，檢測血糖(Blood glucose，BG)、總膽固醇(Total cholesterol，TC)、甘油三酯(Triacylglyceride，TG)、血尿素氮(Blood urea nitrogen，BUN)、血肌酐(Serum creatinine，Scr)、尿微量白蛋白(Vrine microalbumin，mAlb)，計(jì)算尿蛋白排泄率(Urinary protein excretion rate，UAER)；處死大鼠，摘取雙腎除去包膜后稱重(KM)，計(jì)算腎重指數(shù)(KI)；多聚甲酚固定腎皮質(zhì)用于蘇木素-伊紅(HE)染色，腎皮質(zhì)制成勻漿檢測MDA和SOD活性，Western blot檢測腎組織中核因子相關(guān)因子2(Nrf2)和血紅素加氧酶1(HO-1)蛋白表達(dá)。結(jié)果：DN組和姜黃素組BG、TC、TG、KI、BUN、Scr、UAER、MDA顯著高于對照組，BM、KM、SOD顯著低于對照組，且姜黃素組上述指標(biāo)升高或降低幅度小于DN組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HE染色結(jié)果顯示，與DN組比較，姜黃素組腎小管變性明顯減輕，炎性細(xì)胞浸潤明顯減少；Western blot結(jié)果顯示對照組Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)顯著低于DN組和姜黃素組，而姜黃素組顯著高于DN組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：姜黃素可能通過激活Nrf2/ARE信號通路，降低糖尿病腎病大鼠氧化應(yīng)激、發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。

姜黃素；2型糖尿病腎病；氧化應(yīng)激；Nrf2/ARE信號通路

糖尿病(Diabetes mellitus,DM)是一種全身性代謝疾病，以持續(xù)高血糖為主要特征，是嚴(yán)重危害人類健康的最常見慢性非傳染性疾病之一。各地區(qū)流行病數(shù)據(jù)均顯示，DM的患病率以及患病人數(shù)均顯著上升[1,2]。2013版的中國2型糖尿病防治指南中指出[3]，2007～2008年全國糖尿病流行病學(xué)調(diào)查顯示我國20歲以上成年人糖尿病患病率高達(dá)9.7%，糖尿病前期人數(shù)高達(dá)50%。糖尿病腎病(Diabetic nephropathy,DN)是常見的DM微血管并發(fā)癥，我國約39.7%的糖尿病患者合并慢性腎臟疾病[3]。DM患者由于系膜區(qū)細(xì)胞外基質(zhì)(Extra cellular matrix,ECM)進(jìn)行性積聚，腎小球基底膜增厚，引起腎小球呈彌漫性或結(jié)節(jié)性，甚至出現(xiàn)硬化，引起大量蛋白尿，腎功能呈進(jìn)行性下降，并最終發(fā)展為終末期腎病。DN是引起終末期腎病的重要原因之一，因此，探討DN有效治療方案，提高DN治療效果，對于改善患者生活質(zhì)量，保障人類生命健康具有重要的意義。

目前關(guān)于DN的發(fā)病機(jī)制不明確，研究發(fā)現(xiàn)糖代謝異常、遺傳易感、血流動(dòng)力學(xué)障礙、細(xì)胞因子過表達(dá)、脂質(zhì)代謝紊亂等多種因素和多個(gè)環(huán)節(jié)共同參與了DN的發(fā)病，且氧化應(yīng)激在諸多機(jī)制中均扮演了不同程度的作用[4]。轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)在腎小球ECM積聚、基底膜增厚等腎臟病理學(xué)形態(tài)改變中具有關(guān)鍵性的作用。作為重要的致纖維化因子，TGF-β1不僅能夠抑制ECM降解，還能誘導(dǎo)包括纖連蛋白在內(nèi)的多種ECM成分表達(dá)并積聚于腎小球內(nèi)，并引起腎間質(zhì)纖維化和腎小球硬化。而低水平的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)堆積以及高血糖介導(dǎo)的氧化應(yīng)激是TGF-β1激活和高表達(dá)的重要因素之一[5]。

Nrf2-ARE信號通路是一種重要的抗氧化應(yīng)答機(jī)制信號通路。核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，富含亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)，能夠調(diào)控細(xì)胞和機(jī)體對抗氧化應(yīng)激損傷。Nrf2結(jié)構(gòu)上的Neh1區(qū)域通過識(shí)別并結(jié)合抗氧化反應(yīng)元件(ARE)上的堿基系列啟動(dòng)ARE調(diào)控的抗氧化酶基因表達(dá)，從而清除ROS，降低細(xì)胞和機(jī)體受到的氧化應(yīng)激損傷，并維持細(xì)胞內(nèi)氧分壓動(dòng)態(tài)平衡[6]。Nrf2降低機(jī)體氧化應(yīng)激損傷可能通過激活或增加血紅素加氧酶1(Heme oxygenase-1,HO-1)等細(xì)胞內(nèi)氧化還原基因有關(guān)[7]。趙璐等[8]采用丙二醛(Malondialdehyde,MDA)處理腎小球系膜細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MDA能顯著抑制HO-1以及Nrf2的表達(dá)，認(rèn)為MDA可能通過抑制Nrf2/ARE來調(diào)控ROS生成，從而抑制腎小球系膜細(xì)胞的活性，影響DN。

姜黃素是一種植物多酚，是姜黃的主要成分，具有廣泛的生物活性。近年來，姜黃素已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床治療潰瘍性結(jié)腸炎、急性百草枯中毒、雙向情感障礙[9-11]。Stauffer等[12]研究發(fā)現(xiàn)姜黃素能夠增加CD20抗原表達(dá)促進(jìn)淋巴瘤細(xì)胞凋亡。關(guān)于姜黃素對DN大鼠腎臟保護(hù)作用已有報(bào)道，但研究具體作用機(jī)制的不多，且姜黃素可能通過多種途徑發(fā)揮腎臟保護(hù)作用[13]。本研究旨在探討姜黃素對DN大鼠腎臟保護(hù)作用及可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 30只2月齡雄性Wistar大鼠，體重150～170 g，均購自貴州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，許可證號：SCXK(黔)2012-0001；鏈脲佐菌素(STZ)購自美國Sigma公司；姜黃素購自上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：8239401，純度為99%；7600自動(dòng)生化分析儀購自日本Hitachi公司；血糖檢測儀購自羅氏公司；CP224S電子天平購自德國Sartorius公司；mAlb、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)、MDA試劑盒購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司；圖像分析系統(tǒng)為美國Media-Cybernetics公司Image-proplus6.5；光學(xué)顯微鏡購自日本Olympus公司；聚偏氟乙烯微孔膜購自德國Merck-Millipore公司；anti-β-actin、anti-Nrf2、anti-H1、anti-HO-1均購自美國Santa cruz公司；所有動(dòng)物飼養(yǎng)及后續(xù)實(shí)驗(yàn)均在醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室完成，飼養(yǎng)環(huán)境：溫度24℃～26℃，相對濕度40%～60%，每12 h光照和黑暗交替，飼養(yǎng)期間自由進(jìn)食和飲水。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施，符合動(dòng)物倫理相關(guān)規(guī)定。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及造模 適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d，隨機(jī)分為3組，對照組10只，始終給予正常飼養(yǎng)；DN組和姜黃素組各10只，實(shí)驗(yàn)開始時(shí)給予高脂飼料喂養(yǎng)，5周時(shí)饑餓12 h后注射25 mg/kg STZ，此時(shí)對照組大鼠腹腔注射等量生理鹽水。

1.2.2 給藥方法 STZ注射72 h后檢測BG，以BG大于16.7 mmol/L，24 h尿量以及尿白蛋白大于造模前50%為造模成功，兩組均造模成功，造模成功后姜黃素組以200 mg/kg(羧甲基纖維素鈉配置成混懸液)姜黃素灌胃，每天1次，對照組和DN組給予等量羧甲基纖維素鈉灌胃，連續(xù)給藥12周。

1.2.3 標(biāo)本收集及生化指標(biāo)檢測 末次給藥后收集24 h尿量，分裝保存待檢。稱重，腹腔麻醉后心臟取血、離心、分離血清保存待檢。采用血糖儀檢測BG，生化分析儀檢測TC、TG、BUN、Scr，按照試劑盒方法檢測mAlb，計(jì)算尿蛋白排泄率(UAER)=mAlb×24 h尿量/時(shí)間。處死大鼠，摘取雙腎除去包膜后稱重(KM)，計(jì)算腎重指數(shù)(KI)=BM/KM。取8 mm3腎皮質(zhì)，采用多聚甲酚固定，用于HE染色。剩余腎皮質(zhì)切成小塊置于液氮中待用。

1.2.4 腎皮質(zhì)勻漿中MDA和SOD活性檢測 取0.5g腎皮質(zhì)，制成10%的生理鹽水勻漿，離心分離上清液，按照試劑盒方法檢測MDA和SOD活性，嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行。

1.2.5 HE染色 多聚甲酚固定的腎組織石蠟包埋，切成3 μm切片，冷卻后備用。染色時(shí)常規(guī)脫蠟，水化；磷酸緩沖液(PBS)洗滌2～3次，每次5 min；蘇木素液染核2 min，鹽酸酒精分化后自來水沖洗至細(xì)胞核變藍(lán)，伊紅溶液染色3 min，自來水沖洗后乙醇脫水，樹膠封片后鏡下觀察。

1.2.6 Western blot 取腎皮質(zhì)組織0.1 mg，組織裂解液裂解，冰浴勻漿后離心取上清液，上清液加入上樣緩沖液進(jìn)行封閉，10 min沸水浴，-80℃保存。以20 μl總蛋白樣品上樣，聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF微孔膜，用脫脂奶粉封存60 min，4℃條件下一抗封閉。PBST(PBS溶液加上Tween-20)洗膜3次后加入二抗，常溫孵育60 min，PBST漂洗，采用凝膠成像系統(tǒng)成像并用Image-proplus6.5分析目的條帶灰度值。分別采用β-actin、H1對HO-1、Nrf2進(jìn)行校正。

2 結(jié)果

2.1 三組一般情況及體質(zhì)量、腎質(zhì)量比較 實(shí)驗(yàn)期間對照組體質(zhì)量緩慢增加，精神狀態(tài)良好，毛澤光滑，動(dòng)作自如，反應(yīng)靈敏，進(jìn)食、飲水和尿量正常。DN組建模成功后逐漸出現(xiàn)消瘦、 多食、多飲、多尿，精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、尾巴蒼白濕冷、毛發(fā)枯黃等表現(xiàn)；姜黃素組建模成功后表現(xiàn)以DN組類似，但給藥4周后毛色明顯轉(zhuǎn)好，精神狀態(tài)有所改善，飲水、進(jìn)食和尿量均有所改善，給藥8周后上述現(xiàn)象改善尤為明顯。待實(shí)驗(yàn)結(jié)束后稱重，對照組BM和KM顯著高于DN組和姜黃素組，KI顯著低于DN組和姜黃素組，而姜黃素組BM和KM顯著高于DN組，KI顯著低于DN組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2 三組血糖、血脂和腎功能指標(biāo)比較 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對照組BG、TC、TG、BUN、Scr和UAER均顯著低于DN組和姜黃素組，而姜黃素組上述指標(biāo)均顯著低于DN組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.3 三組腎皮質(zhì)勻漿中應(yīng)激指標(biāo)比較 對照組腎皮質(zhì)勻漿中SOD活性顯著高于DN組和姜黃素組，MDA水平顯著低于DN組和姜黃素組，姜黃素組SOD活性顯著高于DN組，MDA水平顯著低于DN組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

2.4 三組腎臟病理學(xué)變化比較 HE染色結(jié)果顯示，對照組大鼠腎小球毛細(xì)血管腔均勻一致，無狹窄；腎小管結(jié)構(gòu)清晰，背靠背排列緊密，上皮細(xì)胞基底膜完整，排列整齊，間質(zhì)未見炎性細(xì)胞浸潤。DN組腎小球肥大、變形，系膜細(xì)胞增生，腎小管上皮變性，部分腎小管管腔出現(xiàn)擴(kuò)張，間質(zhì)可見大量炎性細(xì)胞浸潤；姜黃素組腎小管變性明顯減輕，炎性細(xì)胞浸潤明顯減少，見圖1。

表1 各組體質(zhì)量、腎質(zhì)量比較

Tab.1 Comparison of body mass and kidney mass among each group

GroupsnBM(g)KM(g)KI(102)Controlgroup10349 21±14 421 63±0 212 14±0 25DNgroup10302 44±18 871)1 06±0 171)2 85±0 431)Curcumingroup10331 38±19 301)2)1 34±0 191)2)2 47±0 341)2)

Note：Compared with control group,1)P<0.05;compared with DN group,2)P<0.05.

表2 三組血糖、血脂和腎功能指標(biāo)比較

Tab.2 Comparison of blood sugar,blood lipid and renal function among three groups

Note：Compared with control group,1)P<0.05;compared with DN group,2)P<0.05.

表3 三組腎皮質(zhì)勻漿中SOD活性和MDA水平比較

Tab.3 Comparison of SOD activity and MDA level in renal cortex homogenate among three groups

GroupsCasesMDA(mmol/mg)SOD(U/mg)Controlgroup102 56±0 30523 12±56 64DNgroup104 02±0 621)332 64±42 891)Curcumingroup103 12±0 541)2)453 69±46 681)2)

Note：Compared with control group,1)P<0.05;compared with DN group,2)P<0.05.

圖1 三組腎臟病理組織HE染色結(jié)果Fig.1 HE staining results of renal pathological tissue in three groupsNote：CON.Control group；DN.DN group；CUR.Curcumin group,proportion is 100 μm,magnification is 400 times.

圖2 三組Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)Fig.2 Expression of Nrf2 and HO-1 in three groupsNote：CON.control group；DN.DN group；CUR.Curcumin group.

表4 三組Nrf2和HO-1蛋白相對表達(dá)量

Tab.4 Expression relatively of Nrf2 and HO-1 in three groups

GroupsCasesNrf2/H1HO?1/β?actinControlgroup100 51±0 030 54±0 04DNgroup101 04±0 061)0 87±0 081)Curcumingroup101 48±0 081)2)1 23±0 071)2)

Note：Compared with control group,1)P<0.05;compared with DN group,2)P<0.05.

2.5 三組Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)比較 Western blot結(jié)果顯示對照組Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)顯著低于DN組和姜黃素組，而姜黃素組顯著高于DN組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖2、表4。

3 討論

DN也可以稱為糖尿病腎小球硬化癥，這與其病理改變有關(guān)。DN早期病理表現(xiàn)為腎小球基底膜增厚和肥大，晚期表現(xiàn)為ECM在腎小球內(nèi)聚積，形成腎小球結(jié)節(jié)性病變，繼而出現(xiàn)典型的腎小球硬化改變?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療DN主要包括嚴(yán)格控制血壓、血脂和血糖，限制蛋白質(zhì)的攝入，抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)作用，減少蛋白尿排泄，終末期采用腎臟替代治療。傳統(tǒng)中醫(yī)中藥在DN的治療中具有顯著的優(yōu)勢，能夠顯著改善DN患者臨床癥狀、調(diào)節(jié)血脂、降低血糖、減少尿蛋白以及改善腎功能，發(fā)揮多靶點(diǎn)整體調(diào)節(jié)作用。從分子水平出發(fā)，探討中藥有效成分對DN的改善作用及機(jī)制是目前研究的熱點(diǎn)。本研究中姜黃素為黃酮類植物多酚，具有廣泛的生物活性。采用高脂飼料聯(lián)合低劑量STZ誘導(dǎo)2型糖尿病腎病大鼠模型，能夠很好的模擬人類2型糖尿病腎病疾病的特征和病程進(jìn)展。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，姜黃素能夠顯著降低血糖指標(biāo)BG、血脂指標(biāo)TC和TG、腎重指數(shù)以及腎功能指標(biāo)BUN、Scr、UAER，提高BM、KM，減輕腎小管變性和炎性細(xì)胞浸潤程度，發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。本研究結(jié)果與田華等[14]結(jié)果類似。

正常狀態(tài)機(jī)體產(chǎn)生少量的ROS可以被機(jī)體內(nèi)存在的抗氧化體系清除，使得ROS處于動(dòng)態(tài)平衡，而當(dāng)ROS產(chǎn)生過多或者抗氧化防御功能損傷時(shí)可引起機(jī)體氧化應(yīng)激。高糖主要通過以下途徑引起腎小球系膜細(xì)胞(Glomerular mesangial cells,MsC)生產(chǎn)ROS增多[15]：①高糖會(huì)引起MsC線粒體內(nèi)膜電位差增加，造成超極化，呼吸鏈復(fù)合物中輔酶Q的電子傳遞能夠還原氧分子，生成ROS；②高糖能夠形成非酶糖基化，通過激活多元醇通路、蛋白激酶C以及糖酵解等相關(guān)還原型氧化酶，生成大量ROS；③高糖還能間接通過晚期糖基化終末產(chǎn)物誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生。

Nrf2能夠防御氧化應(yīng)激反應(yīng)，是細(xì)胞重要的轉(zhuǎn)錄因子，通過結(jié)合ARE上調(diào)Ⅱ相解毒酶和抗氧化蛋白表達(dá)，增加細(xì)胞抗氧化能力。Ma等[16]發(fā)現(xiàn)，無論是防御內(nèi)源性或外源性氧化應(yīng)激，Nrf2信號通路均發(fā)揮重要的作用。Yang等[17]發(fā)現(xiàn)，Nrf2信號通路激活能夠降低2型糖尿病患者尿白蛋白排泄。Shang等[18]認(rèn)為Nrf2信號通路對以氧化應(yīng)激為主要發(fā)病機(jī)制的DN具有保護(hù)作用。正常生理狀態(tài)下，Nrf2與kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1(Kelch-like ech-associated protein-1,Keap1)形成二聚體，活性受到抑制。機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激時(shí)，Nrf2-Keap1二聚體解離，游離的Nrf2進(jìn)入細(xì)胞核，從而與ARE結(jié)合，激活下游靶分子HO-1以及SOD等抗氧化酶表達(dá)，增強(qiáng)抗氧化能力，發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用。此外，氧化應(yīng)激還能促進(jìn)Nrf2基因轉(zhuǎn)錄和蛋白合成。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DN組大鼠血清MDA顯著高于對照組，SOD顯著低于對照組，說明DN會(huì)引起機(jī)體氧化應(yīng)激。與對照組相比，DN組Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)顯著增加，說明氧化應(yīng)激會(huì)激活Nrf2-ARE信號通路發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用。而姜黃素組MDA顯著低于DN組，SOD顯著高于DN組，說明姜黃素治療可以降低DN氧化應(yīng)激反應(yīng)。姜黃素組Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)顯著高于DN組，說明姜黃素可能通過激活Nrf2/ARE信號通路降低糖尿病大鼠氧化應(yīng)激。

綜上所述，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，姜黃素對2型糖尿病腎病大鼠具有腎臟保護(hù)作用，能夠改善血脂和糖代謝，減輕腎小管變性和炎性細(xì)胞浸潤程度，保護(hù)腎臟功能，延緩腎臟損傷。其可能通過激活Nrf2/ARE信號通路，降低糖尿病腎病大鼠氧化應(yīng)激，發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。正如前文所言，DN的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，DN的發(fā)病受到多種因素和多個(gè)環(huán)節(jié)共同調(diào)節(jié)，姜黃素是否通過其他途徑發(fā)揮腎臟保護(hù)作用有待進(jìn)一步明確。

[1] Shah AD,Langenberg C,Rapsomaniki E,etal.Type 2 diabetes and incidence of cardiovascular diseases:a cohort study in 1·9 million people[J].Lancet Diabetes Endocrinol,2015,3(2):105-113.

[2] Adler AI.Trevor orchard:fruitful contributions to diabetes epidemiology[J].Diabetes Care,2015,38(9):1634-1637.

[3] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì).中國2型糖尿病防治指南(2013年版)[J].中國糖尿病雜志,2014,22(8):2-42.

[4] Dabhi B,Mistry KN.Oxidative stress and its association with TNF-α-308 G/C and IL-1α-889 C/T gene polymorphisms in patients with diabetes and diabetic nephropathy[J].Gene,2015,562(2):197-202.

[5] Tabur S,Korkmaz H,Eren MA,etal.Urotensin-II level and its association with oxidative stress in early diabetic nephropathy[J].J Diabetes Complications,2015,29(1):115-119.

[6] Jang M,Cho IH.Sulforaphane ameliorates 3-nitropropionic acid-induced striatal toxicity by activating the Keap1-Nrf2-ARE pathway and inhibiting the MAPKs and NF-κB pathways[J].Mol Neurobiol,2016,53(4):2619-2635.

[7] Izumi Y,Yamamoto N,Matsushima S,etal.Compensatory role of the Nrf2-ARE pathway against paraquat toxicity:Relevance of 26S proteasome activity[J].J Pharmacol Sci,2015,129(3):150-159.

[8] 趙 璐,孫俊波,金小琴.丙二醛通過抑制Nrf2/ARE促進(jìn)腎小球系膜細(xì)胞凋亡[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2015,35(1):69-73.

[9] Lang A,Salomon N,Wu JC,etal.Curcumin in combination with mesala mine induces remission in patients with mild-to-moderate ulcerative colitis in a randomized controlled trial[J].Clin Gastroenterol Hepatol,2015,13(8):1444-1449.

[10] 蔣 麗.姜黃素治療急性百草枯中毒的臨床研究[J].臨床急診雜志,2012,13(3):169-172.

[11] Brietzke E,Mansur RB,Zugman A,etal.Is there a role for curcumin in the treatment of bipolar disorder?[J].Med Hypotheses,2013,80(5):606-612.

[12] Stauffer RG,Mohammad M,Singh AT.Novel nanoscale delivery particles encapsulated with anticancer drugs,all-trans retinoic acid or curcumin,enhance apoptosis in lymphoma cells predo minantly expressing CD20 antigen[J].Anticancer Res,2015,35(12):6425-6429.

[13] Qu W,Xiao J,Zhang H,etal.B19,a novel monocarbonyl analogue of curcu min,induces human ovarian cancer cell apoptosis via activation of endoplasmic reticulum stress and the autophagy signaling pathway[J].Int J Biol Sci,2013,9(8):766-777.

[14] 田 華,母傳賢,尤麗菊,等.姜黃素對糖尿病腎病大鼠腎臟的保護(hù)作用及其機(jī)制[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2013,39(4):747-750,866.

[15] Zheng J,Inoguchi T,Sasaki S,etal.Phycocyanin and phycocyanobilin from Spirulina platensis protect against diabetic nephropathy by inhibiting oxidative stress[J].Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol,2013,304(2):R110-120.

[16] Ma WW,Li CQ,Yu HL,etal.The oxysterol 27-hydroxycholesterol increases oxidative stress and regulate Nrf2 signaling pathway in astrocyte cells[J].Neurochem Res,2015,40(4):758-766.

[17] Yang H,Xu W,Zhou Z,etal.Curcumin attenuates urinary excretion of albumin in type II diabetic patients with enhancing nuclear factor erythroid-derived 2-like 2(Nrf2)system and repressing inflammatory signaling efficacies[J].Exp Clin Endocrinol Diabetes,2015,123(6):360-367.

[18] Shang G,Tang X,Gao P,etal.Sulforaphane attenuation of experimental diabetic nephropathy involves GSK-3 beta/Fyn/Nrf2 signaling pathway[J].J Nutr Biochem,2015,26(6):596-606.

[收稿2016-06-06 修回2016-08-11]

(編輯 許四平)

Protective effect of curcumin on type 2 diabetic nephropathy rats and mechanism research

WANGDao-Zhou,QIUZhi-Cheng,YANGYan,ZHANGDi-Hua.

DepartmentofRenalEndocrinology,TongrenPeople′sHospital,Tongren554300,China

Objective:To explore the protective effect of curcumin on type 2 diabetic nephropathy rats and the possible mechanism.Methods：30 Wistar rats were randomly divided into control group,the DN group and curcumin group,10 cases in each group,rats in DN and curcumin group were fed with high fat,after that they were used the streptozotocin injection to set up DN model.In addition,rats in curcumin group were given 200 mg/kg curcumin once a day,other two group were given sodium carboxymethylcellulose half-and-half.After 12 weeks,the 24 h urine were collected at the last delivery,the blood glucose(BG),total cholesterol(TC),triglyceride(TG),blood urea nitrogen(BUN),serum creatinine(Scr),microalbu minuria(mAlb) were tested,the urinary albumin excretion rate(UAER) was calculated.Furthermore,rats were sacrificed,kidney mass weighed,and the kidney index(KI) was calculated.Renal cortical was fixed with polymers cresol for hematoxylin-eosin(HE) staining,renal cortical was also made renal cortex homogenate and the SOD activity,MDA were detected,the expression of nuclear factor related factor 2(Nrf2) and heme oxygenase 1(HO-1) protein in the kidney tissues was detected with Western blot detection.Results：BG,TC,TG,KI,BUN,Scr,UAER,MDA of DN group and curcumin group were significantly higher than control group,and BM,KM,SOD was significantly lower than the control group,the amplitude raising or reducing in curcumin group were less than DN group,the difference had statistical significance(P<0.05);HE staining results showed that,compared with DN group,renal tubule degeneration in curcumin group was obviously reduced,inflammatory cells infiltration was decreased significantly;Western blot results showed that expression of Nrf2 and HO-1 protein in control group were significantly lower than DN group and curcumin group,and curcumin group was significantly higher than the DN group,the differences were statistically significant(P<0.05).Conclusion：Curcumin may play a role of kidney protection through the activation of Nrf2/ARE signaling pathway to reduce oxidative stress in diabetic nephropathy rats.

Curcumin;Type 2 diabetic nephropathy;Oxidative stress;Nrf2/ARE signaling pathways

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.04.023

王道周(1967年-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事腎臟病、內(nèi)分泌及代謝性疾病方面的診治工作，E-mail：wangdaozhou88@163.com。

R285.5

A

1000-484X(2017)04-0588-05

①遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎病風(fēng)濕科，遵義 563003。

②中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，廣州 510080。