血漿谷氧還蛋白水平與新診斷2型糖尿病患者頸動脈粥樣硬化的相關(guān)性研究

張紅蕊，房 輝，李春霞，張志月，馬一嘉，姚滿紅，胡玲玲，王曉迪，趙 凱

血漿谷氧還蛋白水平與新診斷2型糖尿病患者頸動脈粥樣硬化的相關(guān)性研究

張紅蕊1，房 輝2，李春霞1，張志月3，馬一嘉3，姚滿紅3，胡玲玲3，王曉迪3，趙 凱1

（1.河北省唐山市人民醫(yī)院，河北 唐山 063000；2.河北省唐山市工人醫(yī)院，河北 唐山 063000；3.華北理工大學(xué)，河北 唐山 063000）

目的 探討血漿谷氧還蛋白（Grx）水平與新診斷2型糖尿?。═2DM）患者頸動脈粥樣硬化（CAS）的相關(guān)性。方法 選取2016年1月～2016年5月于唐山市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科就診的新診斷T2DM患者100例作為研究對象。根據(jù)頸動脈超聲檢查結(jié)果將其分為CAS組（CAS組，n=52例）和非CAS組（NCAS組，n=48例）。同時從該院健康體檢中心選取非糖尿病健康人群55例作為正常對照組（NC組，n=55例）。記錄其年齡、性別、體重指數(shù)（BMI）、收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP），收集其臨床檢驗結(jié)果，包括空腹血糖（FPG）、糖化血紅蛋白（HbA1C）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、同型半胱氨酸（Hcy）及超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血漿Grx水平。結(jié)果 3組間Grx水平比較結(jié)果顯示，CAS組和NCAS組均高于NC組，CAS組高于NCAS組（均P＜0.05）；在T2DM患者中，Grx與HbA1c、hs-CRP均呈正相關(guān)（均P＜0.05）；在T2DM患者中，經(jīng)Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，年齡（OR∧=1.225，P=0.021）、HbA1c（OR∧

谷氧還蛋白；新診斷2型糖尿?。活i動脈粥樣硬化

糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）患者常常合并多種心腦血管疾病的危險因素，是心腦血管疾病的高發(fā)人群。其中大血管病變是DM患者致死的主要原因[1]，而動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）則是心腦血管疾病的基礎(chǔ)病理改變。頸動脈位置表淺，易于通過超聲檢查，研究表明頸動脈粥樣硬化（carotid atherosclerosis，CAS）不僅作為全身AS的主要標志，還可以作為獨立危險因素來預(yù)測DM患者心腦血管疾病的發(fā)生風(fēng)險。目前2型糖尿?。═ype 2 diabetes，T2DM）導(dǎo)致CAS的機制尚不明確，與多種因素有關(guān)。谷氧還蛋白（Glutaredoxin，Grx）是參與調(diào)解細胞氧化還原狀態(tài)的重要蛋白之一，參與了機體的氧化應(yīng)激過程[2]?？紤]到氧化應(yīng)激在DM血管并發(fā)癥發(fā)生中的重要作用，因此本研究的目的是在新診斷T2DM患者中探討Grx與CAS的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2016年1月-2016年5月在唐山市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科就診的新診斷T2DM患者100例，均符合1999年WHO糖尿病診斷標準。根據(jù)頸動脈超聲檢查結(jié)果將其分為頸動脈硬化組（CAS組，n=52例）和非頸動脈硬化組（NCAS組，n=48例）。同時從本院健康體檢中心選取非糖尿病健康人群55例為正常對照組（NC組，n=55例）。所有入組對象均排除以下情況：急、慢性感染性疾??；糖尿病急性并發(fā)癥，嚴重的糖尿病腎?。?期以上）及視網(wǎng)膜病（增殖期）；痛風(fēng)、風(fēng)濕及類風(fēng)濕及其他自身免疫性疾?。患谞钕偌凹谞钆韵偌膊』蛘咂渌c內(nèi)分泌相關(guān)的疾??；癌癥、肝病、腎病、中重度高血壓、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、腦卒中；正在服用降糖藥、降脂藥、降壓藥、炎癥抑制劑以及維生素C、E等抗氧化劑。

1.2 研究方法

1.2.1 一般臨床資料收集 記錄患者的人口學(xué)資料，包括年齡、性別、體重指數(shù)（body mass index，BMI）、收縮壓（systolic blood pressure，SBP）、舒張壓（diastolic blood pressure，DBP）。收集其臨床檢驗結(jié)果，包括空腹血糖（fasting plasma glucose，F(xiàn)PG）、糖化血紅蛋白（glycosylated hemoglobin A1c，HbA1c）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）及超敏C反應(yīng)蛋白（high sensitive C reactive protein，hs-CRP）。

1.2.2 血漿Grx水平檢測 患者于晨起6～7時抽取空腹靜脈血3 ml，室溫放置30 min后3 000 r/min離心15 min，收集上清液放入-80℃冰箱冷凍保存待用。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血漿Grx水平（試劑盒購自美國cloud-clone公司）。

1.2.3 頸動脈超聲檢查 采用多功能彩色多普勒超聲診斷儀檢測雙側(cè)頸動脈內(nèi)膜厚度?；颊呷フ砥脚P位，頭后仰并偏向?qū)?cè)，充分暴露其頸部，探頭自頸動脈起始部逐節(jié)段探測兩側(cè)頸總動脈、頸動脈分叉部及頸內(nèi)動脈，測量頸動脈內(nèi)膜—中層厚度（intima-media wall thickness，IMT），以IMT＜0.9 mm診斷頸動脈正常，IMT≥0.9 mm診斷CAS。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。各組數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示。組間計量資料比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗；計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。單因素相關(guān)分析采用Pearson分析，多因素相關(guān)性分析采用多元線性逐步回歸，危險因素篩查采用非條件一般Logistic回歸分析。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組間一般資料比較

經(jīng)單因素方差分析比較發(fā)現(xiàn)，3組間年齡、FPG、HbA1c、hs-CRP差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）（見表1）。經(jīng)LSD檢驗兩兩比較發(fā)現(xiàn)，年齡CAS組＞NC組（P=0.011），CAS組＞NCAS組（P=0.008），NCAS組和NC組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.217）；FPG CAS組＞NC組（P=0.000），CAS組＞NCAS組（P=0.002），NCAS組＞NC組（P=0.000）；HbA1c CAS組＞NC組（P=0.000），CAS組＞NCAS組（P=0.001），NCAS組＞NC組（P=0.000）；hs-CRPCAS組＞NC組（P=0.000），NCAS組＞NC組（P=0.000），CAS組和NCAS組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.139）。

2.2 3組間Grx水平比較

經(jīng)單因素方差分析發(fā)現(xiàn)，3組間Grx水平差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（見表1）。經(jīng)LSD檢驗兩兩比較發(fā)現(xiàn)，Grx CAS組＞NC組（P=0.000），CAS組＞NCAS組（P=0.001），NCAS組＞NC組（P=0.000）。

2.3 Grx與T2DM患者一般資料的相關(guān)性分析

在T2DM患者中，經(jīng)單因素相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，Grx與HbA1c（r=0.642，P=0.009）、hs-CRP（r=0.133，P= 0.015）呈正相關(guān)；經(jīng)多元線性逐步回歸分析校正年齡、性別、BMI、SBP、DBP、FPG、HbA1c、TC、TG、HDL-C、LDL-C、Hcy及hs-CRP的影響后，Grx仍與HbA1c（b=1.983，P=0.000）、hs-CRP（b=0.517，P= 0.022）呈正相關(guān)。見表2。

2.4 T2DM患者頸動脈硬化危險因素Logistic回歸分析

在T2DM患者中，以是否合并CAS為因變量，以年齡、性別、BMI、SBP、DBP、FPG、HbA1c、TC、TG、HDL-C、LDL-C、Hcy、hs-CRP及Grx為自變量，經(jīng)Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，年齡（OR∧=1.225，P=0.021）、HbA1c（OR∧

=1.754，P=0.016）、Grx（OR∧=1.556，P= 0.009）均為CAS發(fā)生的危險因素。見表3。

表1 3組間一般資料比較結(jié)果 （x±s）

表2 Grx水平與T2DM患者一般資料的相關(guān)性分析

表3 T2DM患者CAS危險因素的Logistic回歸分析

3 討論

T2DM是一種以慢性血糖升高為特征的疾病，長期的高血糖可以損害機體多種臟器，如腦、眼、心臟、腎臟、血管以及神經(jīng)等。許多研究表明，與健康人群相比，糖尿病患者細胞內(nèi)環(huán)境處于一種氧化應(yīng)激狀態(tài)[3]。高血糖導(dǎo)致的氧化應(yīng)激可以使得DNA受損、脂質(zhì)及蛋白質(zhì)發(fā)生氧化，引起各種炎癥反應(yīng)，最終產(chǎn)生多種糖尿病并發(fā)癥。對于血管內(nèi)皮細胞來說，當存在氧化應(yīng)激時，內(nèi)皮細胞內(nèi)一些酶的激活，如黃嘌呤氧化酶、NADPH氧化酶以及內(nèi)皮誘導(dǎo)型NO合酶的激活均會促進活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生[4]，而ROS隨之可以導(dǎo)致LDL發(fā)生氧化，此外還可以促進ROS敏感的炎癥因子如血管細胞黏附分子 （vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）、單核細胞趨化因子（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）表達增加，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，從而引起動脈粥樣硬化[5]。

Grx由HOLMGREN等[6]于1976年在大腸桿菌中首次發(fā)現(xiàn)，又稱作巰基轉(zhuǎn)移酶，是巰基-二硫鍵氧化還原酶家族的重要組成部分。目前在哺乳動物中發(fā)現(xiàn)2種Grx，根據(jù)存在部位的不同分為Grx1和Grx2，Grx1位于胞質(zhì)內(nèi)，而Grx2位于線粒體和細胞核內(nèi)[7]。目前認為血漿中的Grx基本全為Grx1，本文中所檢測的Grx即為Grx1。Grx是一種具有多種生物學(xué)功能的細胞因子，它可以作為核糖核酸還原酶的輔酶、參與氧化應(yīng)激及抗凋亡作用[8]。當機體存在氧化應(yīng)激導(dǎo)致 ROS、H2O2增加時，谷胱甘肽（glutathione，GSH）可以對其進行還原清理，生成谷胱甘肽二硫化合物（GSSG），而GSSG同時可以與機體內(nèi)的多種蛋白質(zhì)結(jié)合，導(dǎo)致蛋白質(zhì)發(fā)生谷胱甘肽化，使其結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，而Grx能特異性催化蛋白質(zhì)去谷胱甘肽化，恢復(fù)其生物學(xué)活性[7]。此外，LI等[9]的研究結(jié)果表明Grx可以通過促進內(nèi)皮型NO合酶的磷酸化，增加NO的釋放，同時還可以通過抑制JNK/NF-ΚB信號途徑，降低凋亡因子caspase3的水平來抑制高糖誘導(dǎo)的冠狀動脈內(nèi)皮細胞的凋亡。而LEKLI等[10]發(fā)現(xiàn)Grx基因轉(zhuǎn)染可以通過抑制JNK、P38凋亡信號途徑，激活A(yù)kt/FoxO途徑來改善糖尿病大鼠缺血再灌注的心肌功能。同樣，LIU等[11]也發(fā)現(xiàn)Grx可以通過增加Akt的磷酸化及抑制Akt的谷胱甘肽化，增強或保護Akt的活性，降低前凋亡因子Bax、caspase3的表達，促進抗凋亡因子Bcl-2的合成，從而起到抑制H2O2誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞的凋亡。上述這些證據(jù)表明Grx可以通過抗氧化應(yīng)激的作用來起到保護機體的作用。本研究結(jié)果顯示與T2DM非CAS患者相比，CAS患者血漿Grx水平升高，表明CAS患者體內(nèi)存在更多的氧化應(yīng)激，而Grx的升高也許是通過代償性保護作用來抵抗高糖對機體的損傷。有基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)[12]，在過氧化氫誘導(dǎo)的冠狀動脈平滑肌細胞，Grx的表達水平增加，與本實驗結(jié)論相似。

綜上所述，血漿Grx可能參與了T2DM患者CAS的發(fā)生及發(fā)展過程，機制可能與其抗氧化應(yīng)激的作用有關(guān)。Grx也許可以作為CAS的臨床檢驗指標，為T2DM患者CAS的預(yù)防和治療提供新的線索。由于本研究屬于回顧性研究，參與CAS的因素較多，因此對于Grx與CAS之間是否存在因果關(guān)系以及是否可以通過補充或增強Grx作用來抑制或者緩解CAS的發(fā)生還有待進一步的臨床試驗或動物試驗來證實。

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（張蕾 編輯）

Association of plasma glutaredoxin with carotid atherosclerosis in newly-diagnosed type 2 diabetic patients

Hong-rui Zhang1,Hui Fang2,Chun-xia Li1,Zhi-yue Zhang3,Yi-jia Ma3, Man-hong Yao3,Ling-ling Hu3,Xiao-di Wang3,Kai Zhao1
(1.Tangshan People's Hospital,Tangshan,Hebei 063000,China;2.Tangshan Gongren Hospital, Tangshan,Hebei 063000,China;3.North China University of Science and Technology, Tangshan,Hebei 063000,China)

Objective To investigate the association of plasma glutaredoxin(Grx)with carotid atherosclerosis(CAS) in newly-diagnosed type 2 diabetic patients.Methods A total of 100 patients who were newly diagnosed as T2DM and cared in the Department of Endocrinology of Tangshan People's Hospital from January 2016 to May 2016 were recruited,and divided into CAS group(52 cases)and non-CAS group(NCAS group,48 cases).At the same time,55 healthy subjects without T2DM from the Medical Examination Center were recruited as normal control(NC)group. Data including age,sex,BMI,SBP and DBP were recorded.Clinical parameters including FPG,HbA1c,TC,TG, LDL-C,HDL-C,Hcy and hs-CRP were collected.Plasma Grx level was measured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Results The levels of Grx of the CAS and NCAS groups were both higher than that of the NC group,and the levels of Grx of the CAS group was higher than that of the NCAS group(allP＜0.05).In theT2DM patients,Grx was positively correlated with HbA1c and hs-CRP(P＜0.05).Logistic regression analysis showed that age(OR∧=1.225,P=0.021),HbA1c(OR∧=1.754,P=0.016)and Grx(OR∧=1.556,P=0.009)were the risk factors of CAS in the T2DM patients.Conclusions Plasma Grx is closely correlated with carotid atherosclerosis in newly-diagnosed type 2 diabetic patients,suggesting that plasma Grx may be involved in the occurrence and development of carotid atherosclerosis in newly-diagnosed T2DM patients.

newly-diagnosed type 2 diabetes;glutaredoxin;carotid atherosclerosis

R587.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.04.010

1005-8982（2017）04-0051-04

2016-06-18

房輝，Email:fanghui@medmail.com.cn

=1.754，P=0.016）、Grx（OR∧

=1.556，P=0.009）均為其CAS發(fā)生的危險因素。結(jié)論 新診斷T2DM患者血漿Grx與其CAS相關(guān)，提示Grx可能參與了CAS的發(fā)生及發(fā)展。