馬齒莧正丁醇提取物對(duì)α淀粉酶活性影響的研究

□李廷昕

(成都實(shí)驗(yàn)外國(guó)語學(xué)校西區(qū)四川成都610213)

馬齒莧正丁醇提取物對(duì)α淀粉酶活性影響的研究

□李廷昕

(成都實(shí)驗(yàn)外國(guó)語學(xué)校西區(qū)四川成都610213)

本研究對(duì)馬齒莧正丁醇提取物進(jìn)行提取與純化，研究了其對(duì)α淀粉酶的抑制作用。對(duì)馬齒莧正丁醇提取物用α淀粉酶進(jìn)行體外活性抑制檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，繪制出抑制曲線，并計(jì)算半抑制濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：馬齒莧正丁醇提取物對(duì)α淀粉酶具有良好的抑制作用，當(dāng)馬齒莧正丁醇提取物濃度達(dá)0.45mg/mL時(shí)，對(duì)α淀粉酶的抑制率可達(dá)到78.2%，其半抑制濃度IC50=0.274mg/mL。本研究為馬齒莧正丁醇提取物在防治糖尿病方面提供了一定的理論依據(jù)和指導(dǎo)意義。關(guān)鍵詞：馬齒莧；正丁醇提取物；α淀粉酶；降血糖

糖尿病是一種因胰島素分泌不足或胰島素抵抗引起的多因素代謝性疾病，嚴(yán)重威脅著人們的生活與健康。據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè)到2025年，全球糖尿病患者人數(shù)將會(huì)接近4億[1]。糖尿病主要分為1型和2型，2型糖尿病主要特征為胰島素抵抗以及胰島β細(xì)胞功能缺失，其發(fā)病原因復(fù)雜，與遺傳因素和環(huán)境因素密切相關(guān)[2;3]。目前，臨床上對(duì)糖尿病的治療主要有注射胰島素、口服雙胍類降壓藥等[4]。α葡萄糖苷酶抑制劑是一類口服型餐后降血糖藥物，通過競(jìng)爭(zhēng)性抑制方式抑制小腸中各類α葡萄糖苷酶活性，從而降低餐后血糖，預(yù)防或減緩糖尿病的發(fā)展[5]。由于目前上市的的α葡萄糖苷酶抑制劑具有一定的副作用，越來越多的研究集中于通過天然產(chǎn)物尋找更加安全、有效的α葡萄糖苷酶抑制劑[6]。

馬齒莧（Portulaca oleracea L.）又名長(zhǎng)壽草、馬舌菜，廣泛分布于我國(guó)各個(gè)地方。性味酸寒，具有清熱解毒、消腫止血等功效。含有豐富的化學(xué)成分如多糖、黃酮、生物堿、不飽和脂肪酸等，具有較高的食藥用價(jià)值[7-9]。其中，關(guān)于馬齒莧正丁醇類提取物對(duì)α淀粉酶的活性影響尚未見報(bào)道。本研究以馬齒莧為原料，采用正丁醇提取馬齒莧中化學(xué)成分，并就其對(duì)α淀粉酶的抑制活性進(jìn)行初步探索。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

馬齒莧購自當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，經(jīng)四川師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物學(xué)教研室鑒定為馬齒莧（Portulaca oleracea L.）；馬鈴薯淀粉：選用優(yōu)質(zhì)馬鈴薯制成1%馬鈴薯淀粉溶液；阿卡波糖（拜耳醫(yī)藥保健公司）；3，5-二硝基水楊酸（DNS）；胰α淀粉酶；乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、丙三醇、氯仿、鹽酸、氫氧化鈉均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 馬齒莧正丁醇提取物的提取與純化

按文獻(xiàn)方法提取馬齒莧正丁醇提取物并對(duì)其進(jìn)行純化[9]。稱取馬齒莧若干粉碎，用75%乙醇回流提取2次，冷卻后過濾，用乙酸乙酯萃取濃縮，再用飽和正丁醇萃取，濃縮制成馬齒莧正丁醇提取物。

1.3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

采用DNS顯色法繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線[10]。取不同試管依次分別加入10mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL，以及2mL DNS試劑，用蒸餾水補(bǔ)足4mL。沸水浴5min后，冷卻定容至25mL。以0號(hào)作為空白對(duì)照，用分光光度計(jì)在540nm下讀取各管吸光值，并繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 測(cè)定馬齒莧正丁醇提取物對(duì)α淀粉酶活力的影響

同樣采用DNS顯色法，共用15個(gè)濃度梯度，每個(gè)梯度重復(fù)3次。每支試管依次加入2mL馬鈴薯淀粉溶液，0.1mL1.2%NaCl溶液，0.5mL磷酸緩沖液（pH=6.8），以及不同濃度梯度的馬齒莧正丁醇提取物，用蒸餾水補(bǔ)足至3.5mL。混勻后37℃保溫，加入α淀粉酶溶液（4.8×10-5g/mL）0.5mL，37℃水浴10min，取出后加入1mol/LHCl終止反應(yīng)。分別加入2mLDNS試劑，沸水浴5min后，冷卻定容至25mL，測(cè)定540nm下各管吸光值。抑制率計(jì)算公式為：抑制率=[(A1-A2)/A1]×100%

其中，A1為不加馬齒莧正丁醇提取物時(shí)在540nm處的吸光值，A2是加入馬齒莧正丁醇提取物時(shí)在540nm處的吸光值。然后繪制抑制曲線，計(jì)算馬齒莧正丁醇提取物對(duì)胰α淀粉酶的半抑制濃度IC50。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

測(cè)定不同濃度葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的光吸收值，繪制出葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.2526x+0.0041，R2=0.995，具有較好的線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線可行。

2.2 測(cè)定馬齒莧正丁醇提取物對(duì)α淀粉酶活力的影響

按實(shí)驗(yàn)方法1.4所述，檢測(cè)不同濃度的馬齒莧正丁醇提取物對(duì)α淀粉酶活力的影響，并計(jì)算其對(duì)α淀粉酶半抑制濃度IC50。共繪制10個(gè)不同濃度梯度的馬齒莧正丁醇提取物對(duì)α淀粉酶活力的影響的抑制曲線。隨著馬齒莧正丁醇提取物濃度的增加，其對(duì)α淀粉酶活力的抑制作用越大，說明其具有明顯的抑制作用，當(dāng)馬齒莧正丁醇提取物濃度達(dá)0.45mg/mL時(shí)，對(duì)α淀粉酶的抑制率可達(dá)到78.2%，其半抑制濃度IC50=0.274mg/mL。

3 討論與結(jié)論

餐后血糖升高的主要原因是食物中的碳水化合物在小腸中經(jīng)α葡萄糖苷酶水解成葡萄糖并吸收進(jìn)入血液造成的，可引起胰島素敏感性降低，導(dǎo)致糖尿病病情加重[5;11]。因此，如何控制餐后血糖水平，抑制α葡萄糖苷酶的活性是防治糖尿病的有效手段之一。目前常用的α葡萄糖苷酶抑制劑——阿卡波糖在治療糖尿病時(shí)，會(huì)產(chǎn)生腹脹、腹瀉等副作用。因此，如何尋找更加安全、無副作用的α葡萄糖苷酶抑制劑已經(jīng)成為當(dāng)前熱門研究。

作為天然食藥用植物，馬齒莧含有豐富的化學(xué)成分，有報(bào)道指出馬齒莧沸水提取物對(duì)超氧陰離子自由基和羥自由基均具有清除作用，同時(shí)馬齒莧正丁醇提取物能顯著改善D-半乳糖致衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙，能提高其腦組織SOD活性，降低MDA的含量[7;9]。本實(shí)驗(yàn)采用3，5-二硝基水楊酸顯色法研究α淀粉酶的活力，以及通過對(duì)馬齒莧正丁醇提取物的提取與純化，證明了馬齒莧正丁醇提取物對(duì)α淀粉酶具有良好的抑制作用，當(dāng)馬齒莧正丁醇提取物濃度達(dá)0.45mg/mL時(shí)，對(duì)α淀粉酶的抑制率可達(dá)到78.2%，其半抑制濃度IC50=0.274mg/mL。表明了馬齒莧正丁醇提取物具有較好的輔助降血糖功能，能有效控制餐后血糖水平，為馬齒莧正丁醇提取物的實(shí)際應(yīng)用提供了一定的理論依據(jù)和指導(dǎo)意義。

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1004-7026（2017）20-0061-02

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10.16675/j.cnki.cn14-1065/f.2017.20.045