菊苣提取物對(duì)高尿酸血癥大鼠腎臟果糖轉(zhuǎn)運(yùn)體9表達(dá)的影響

王雨+林志健+聶安政+李麗玉+張冰

[摘要]該研究給予雄性SD大鼠10%果糖飲水建立高尿酸血癥模型，將其分為正常組、模型組、苯溴馬隆組（20 mg·kg^-1·d^-1）、菊苣提取物高、中、低劑量組（5，7.5，10 g·kg^-1·d^-1），連續(xù)42 d。分別測(cè)定血尿酸、血肌酐、尿素氮、尿尿酸，計(jì)算腎臟尿酸清除率；免疫組化法、逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）法分別檢測(cè)果糖轉(zhuǎn)運(yùn)體9（glucose transporter family member 9，Glut9）在大鼠腎臟的蛋白及基因的表達(dá)水平。探討中藥菊苣提取物降尿酸作用及對(duì)腎臟Glut9表達(dá)的影響。結(jié)果顯示菊苣提取物能降低高尿酸血癥大鼠血尿酸水平，增加腎臟尿酸清除率，降低腎臟Glut9的蛋白表達(dá)，抑制腎臟尿酸重吸收，從而促進(jìn)腎臟尿酸排泄。

[關(guān)鍵詞] 菊苣； 高尿酸血癥； 果糖； 腎臟轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白； Glut9

[Abstract] Sixty SD male rats were randomly divided into normal group， model group， benzbromarone group（20 mg·kg^-1·d^-1）， chicory extract high dose， middle dose and low dose groups （5， 7.5， 10 g·kg^-1·d^-1）. The rats in normal group were given with water， and the rats in other groups were given with 10% fructose solution to establish hyperuricemia models. All the rats were sacrificed on the 42th day. Then their serum uric acid（SUA）， serum creatinine（CRE）， urea nitrogen（BUN） and urinary uric acid（UUA） levels were detected to calculate the clearance rate of uric acid in kidney（CUA）. Meanwhile， the protein and gene expression levels of renal glucose transporter family member 9（Glut9） were detected by immunohistochemical and Real-time quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction（RT-qPCR） methods. The effects of Chinese herb chicory extract on expression of renal Glut9 and decreasing uric acid were explored in this study， and the results showed that chicory extract could reduce SUA level in rats with hyperuricemia， increase renal CUA， decrease the protein expression of renal Glut9， inhibit uric acid re-absorption in kidney， and thus promote renal uric acid excretion.

[Key words] chicory； hyperuricemia； fructose； renal transporter； Glut9

中藥菊苣為菊科植物毛菊苣或菊苣的干燥地上部分或根，可清肝利膽，健胃消食，利尿消腫^[1]。高尿酸血癥是血尿酸水平在體內(nèi)持續(xù)性升高或血尿酸鹽過(guò)飽和的一種病理狀態(tài)，高尿酸血癥不僅是痛風(fēng)發(fā)生的主要病因，還是糖尿病、高血壓、心血管疾病及代謝綜合征的獨(dú)立危險(xiǎn)因素^[2-3]。本課題組長(zhǎng)期從事菊苣防治高尿酸血癥的研究，發(fā)現(xiàn)菊苣可穩(wěn)定降低血尿酸水平，并從尿酸生成途徑對(duì)其藥效機(jī)制進(jìn)行了探討^[4-5]。尿酸生成過(guò)多與排泄障礙均會(huì)升高血尿酸水平，機(jī)體內(nèi)66%尿酸由腎臟排泄，33%尿酸由腸道排泄。研究顯示90%的高尿酸血癥是由于腎臟對(duì)尿酸的重吸收增加和（或）分泌減少所致^[6]，腎臟中存在多種與尿酸相關(guān)的轉(zhuǎn)運(yùn)體，如果糖轉(zhuǎn)運(yùn)體Glut9（glucose transporter family member 9），有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體OAT1，OAT3（organic anion transporter 1，organic anion transporter 3）等，這些轉(zhuǎn)運(yùn)體通過(guò)影響腎小管對(duì)尿酸的重吸收或排泄從而改變腎臟的尿酸排泄。其中果糖轉(zhuǎn)運(yùn)體Glut9由SLC2A9編碼，其基因多態(tài)性與尿酸生成及尿酸鹽腎臟重吸收密切相關(guān)，全基因組學(xué)關(guān)聯(lián)研究亦指出其與血尿酸水平變化相關(guān)^[7]。本研究從尿酸的腎臟排泄角度，切入腎臟轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut9，探討中藥菊苣降尿酸的藥效機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物 雄性SD大鼠60只，體重（240±10） g，購(gòu)于斯貝福（北京）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（京）2011-0004。

1.2 藥物及試劑 菊苣根購(gòu)于新疆市場(chǎng)，由北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院黃建梅教授鑒定為菊苣Cichorii Herba。本課題組提取分離得菊苣地下部分水提取物（以下簡(jiǎn)稱菊苣提取物）：菊苣藥材粉碎浸泡，10倍水回流提取1 h后收集濾液，再8倍水回流提取1 h，合并濾液后濃縮。苯溴馬隆片（德國(guó)赫曼大藥廠，批號(hào)1208106）；D-果糖（美國(guó)AMRESCO公司，批號(hào)3573C350）；尿酸（serum uric acid，SUA）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)151221）；肌酐（creatinine，CRE）、尿素氮（ureanitrogen，BUN）檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)于南京建成生物工程研究所，批號(hào)20151218，20151230；Trizol（美國(guó)Ambion公司，批號(hào)94302）；氯仿、異丙醇等分析純?cè)噭┚?gòu)于北京化工廠；6×RNA loading buffe，Glodview核酸染料，均購(gòu)于博邁德生物科技有限公司，批號(hào)705685BB，705972BE；水合氯醛、瓊脂糖（北京拜爾迪有限公司）；Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit，美國(guó)賽默飛公司，批號(hào)00270373；Universal SYBR Green Supermix（美國(guó)Bio-Rad公司，批號(hào)730003407）；Anti-GLUT9 polyclonal antibody（美國(guó)Millipore公司，批號(hào)Q2361577）；兔超敏二步免疫組化試劑PV-9001，DAB顯色試劑盒，抗體稀釋液，均購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)K156617G，K165214C，16175A01。

1.3 儀器 Sunrise酶標(biāo)儀（瑞士Teacan公司）；低溫高速離心機(jī)（德國(guó)Sigma）；恒溫水浴箱（北京醫(yī)療設(shè)備廠）；Quawell UV-Vis Spectrotometer Q5000（北京五洲東方科技發(fā)展有限公司）；CFX96 PCR儀（美國(guó)Bio-Rad公司）；FluorChem凝膠成像系統(tǒng)（香港安萊公司）；石蠟組織切片機(jī)（美國(guó)AO公司）；BX53顯微鏡，DP72CCD相機(jī)（日本奧林巴斯）；Imagine Pro-Plus 6.0圖像分析軟件。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組及處理 SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后，按體重隨機(jī)分為正常組、模型組、苯溴馬隆組、菊苣提取物高、中、低劑量組，每組10只。正常組給予清水，其余各組給予10%果糖飲水造模。正常組與模型組給予清水灌胃，苯溴馬隆組給予20 mg·kg^-1苯溴馬隆灌胃，菊苣提取物高、中、低劑量組分別給予相應(yīng)的菊苣提取物灌胃（相當(dāng)于生藥量10，7.5，5 g·kg^-1·d^-1）。

2.2 相關(guān)指標(biāo)檢測(cè) 動(dòng)物取血前禁食不禁水12 h，并稱量體重，分別于實(shí)驗(yàn)的第10，20，30，40天尾尖取血，3 000 r·min^-1離心10 min，分離血清，檢測(cè)血清尿酸（serum uric acid，SUA）、血清肌酐（creatinine，CRE）、血清尿素氮（urea nitrogen，BUN）。實(shí)驗(yàn)第40天，將動(dòng)物放進(jìn)代謝籠，禁食不禁水，收集24 h尿液，檢測(cè)尿尿酸（urine uric acid，UUA）。計(jì)算尿酸清除率（CUA），CUA=UUA/SUA×每分鐘尿量（mL·min^-1）。實(shí)驗(yàn)第42天，10%水合氯醛麻醉，處死動(dòng)物取材。部分腎臟以4%多聚甲醛固定，用于制作組織石蠟切片，部分腎臟立即于-80 ℃保存，用于提取腎臟總mRNA。

2.3 免疫組化染色 4 μm組織石蠟切片60 ℃烤片1 h，常規(guī)脫蠟復(fù)水，PBS孵育3×5 min；0.01 mol·L^-1檸檬酸鈉緩沖溶液水浴熱修復(fù)30 min后冷卻至室溫，PBS孵育3×5 min；滴加3%H₂O₂，避光濕溫孵育15 min，PBS孵育3×5 min；滴加一抗（1∶1 000稀釋），濕盒內(nèi)4 ℃孵育過(guò)夜；37 ℃復(fù)溫孵育1 h，PBS孵育3×5 min；滴加PV-9001聚合物輔助劑，37 ℃濕溫孵育1 h，PBS清洗3×5 min；滴加PV-9001辣根酶標(biāo)記抗兔IgG聚合物，37 ℃濕溫孵育1 h，PBS清洗3×5 min；滴加新鮮配制DAB工作液，顯微鏡下觀察，棕色顆粒染色后PBS清洗3×5 min；乙醇梯度脫水，二甲苯透明，中性光學(xué)樹(shù)脂封固，封片。

2.4 圖像采集與分析 顯微鏡下采集圖像，各組織切片選取5個(gè)互不重疊的視野，高速彩色CCD相機(jī)采集圖像。以Imagine Pro-Plus 6.0圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行免疫組化染色結(jié)果分析，測(cè)定陽(yáng)性顆粒積分光密度IOD（inergral optical density），陽(yáng)性表達(dá)面積Area。

2.5 提取RNA與合成cDNA RNA提?。喝⌒迈r凍存的大鼠腎臟組織50～100 mg，于液氮中充分研磨至粉末狀，置于無(wú)酶EP管中，加入1 mL Trizol，室溫孵育5 min，加入200 μL氯仿，劇烈振蕩15 s，室溫孵育3 min，于4 ℃ 12 000×g離心15 min，取上清500 μL置于新管中，加入等體積異丙醇，混勻，室溫孵育10 min，于4 ℃ 12 000×g離心15 min，棄上清，加入1 mL 4 ℃預(yù)冷75%乙醇，4 ℃ 7 500×g離心10 min，棄上清，空氣干燥10 min，加入30 μL無(wú)酶水溶解，55 ℃水浴10 min。于波長(zhǎng)260，280 nm下測(cè)定吸光度，計(jì)算A260/A280和腎臟總RNA濃度。1%瓊脂糖凝膠電泳，180 V，15 min，觀察腎臟總RNA完整性。cDNA合成：每個(gè)樣本取4 μg總RNA作為模板按Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit步驟合成cDNA第一鏈。4 μg RNA模板，oligo（dt）181 μL，無(wú)酶水補(bǔ)足體積至12 μL，混勻，65 ℃孵育5 min，冰上驟冷，加入5×reaction buffer 4 μL，Ribolockrnase inhibitor 1 μL，10 mmol·L^-1NTP Mix 2 μL，Reveraid M-MVLV RT 1 μL，42 ℃孵育60 min，70 ℃孵育5 min，終止反應(yīng)。

2.6 Real-time RT-PCR檢測(cè)Glut9 mRNA表達(dá) 用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)PCR引物，選用看家基因GAPDH為內(nèi)參基因，由北京博邁德基因技術(shù)有限公司合成。Glut9 mRNA引物序列為：Forward 5′-TGCATTGGCGTGTTTTCTGG-3′，Reverse 5′-GTTTGGAAGGCTTTCGTGGC-3′；GAPDH引物序列為：Forward 5′-GGTGGACCTCATGGCCTACA-3′，Reverse 5′-ATTGTGAGGGAGATCCTCAGTGT-3′。

Real-time RT-PCR反應(yīng)體系為20 μL，包含cDNA模板2 μL，上下游引物各1 μL，Universal SYBR Green Supermix 10 μL，無(wú)酶水7 μL。擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，60 ℃退火/延伸30 s，40個(gè)循環(huán)；65～95 ℃，每5 s升高0.5 ℃進(jìn)行溶解曲線分析。

2.7 統(tǒng)計(jì)處理 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SAS 9.0統(tǒng)計(jì)，數(shù)據(jù)均采用±s表示，多組間數(shù)據(jù)比較根據(jù)各組正態(tài)及方差齊與否選擇單因素方差分析或是Kruskal-Wallis軼和檢驗(yàn)，組間兩兩比較根據(jù)方差齊與否選擇采用Dunnett-t檢驗(yàn)或Dunnett′s T3檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。qPCR結(jié)果用2-ΔΔCt法統(tǒng)計(jì)，以相對(duì)值表示。

3 結(jié)果

3.1 動(dòng)物一般狀態(tài) 實(shí)驗(yàn)期間各組動(dòng)物生長(zhǎng)狀態(tài)良好，體重逐漸增長(zhǎng)且各組無(wú)組間差異。

3.2 大鼠血清尿酸水平變化 實(shí)驗(yàn)第10天至第40天，與正常組相比，模型組血尿酸水平均顯著升高（P<0.01或P<0.05）；與模型組相比，苯溴馬隆組血尿酸水平顯著降低（P<0.05或P<0.01）；菊苣提取物高劑量組SUA水平顯著降低（P<0.05或P<0.01）。實(shí)驗(yàn)第10天至第30天，菊苣提取物中劑量組血尿酸水平顯著降低（P<0.01）；實(shí)驗(yàn)第20天，菊苣提取物低劑量組血尿酸水平顯著降低（P<0.01），見(jiàn)表1。

3.3 大鼠腎功能指標(biāo) 與正常組相比，實(shí)驗(yàn)第10天至第40天，模型組肌酐水平差異無(wú)顯著性，尿素氮水平顯著降低（P<0.01）；與模型組相比，實(shí)驗(yàn)期間其余各組肌酐、尿素氮水平差異無(wú)顯著性，見(jiàn)表2。

3.4 腎臟尿酸排泄指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)第40天，各組尿尿酸無(wú)明顯差異。與正常組相比，模型組24 h尿量顯著減少（P<0.05），腎臟尿酸清除率無(wú)顯著性差異；與模型組相比，菊苣提取物中劑量組24 h尿量顯著增加（P<0.05），菊苣提取物高、中劑量組腎臟尿酸清除率顯著增加（P<0.05），其余組無(wú)明顯差異，見(jiàn)表3。

3.5 大鼠腎臟Glut9免疫組化染色及半定量分析 免疫組化染色結(jié)果見(jiàn)圖1，Glut9在各組大鼠腎臟均有表達(dá)，主要表達(dá)于腎臟近曲小管頂膜。相較于正常組，模型組陽(yáng)性表達(dá)面積與積分吸光度均顯著增加（P<0.01）。相較于模型組，苯溴馬隆組陽(yáng)性表達(dá)面積顯著減少（P<0.05），積分吸光度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；菊苣提取物高、中、低劑量組陽(yáng)性表達(dá)面積PEA與積分吸光度IOD均顯著減少，見(jiàn)表4。

3.6 大鼠腎臟Glut9 mRNA表達(dá)的變化 提取的腎臟總RNA經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳后紫外成像，清晰可見(jiàn)18S和28S條帶，見(jiàn)圖2。構(gòu)建內(nèi)參基因GAPDH和目的基因Glut9的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到斜率為-3.386，-3.338，其相關(guān)系數(shù)分別為0.998，0.997，計(jì)算得其擴(kuò)增效率分別為97.4%，99.3%。Real-time RT-PCR結(jié)果顯示內(nèi)參基因GAPDH和目的基因Glut9擴(kuò)增曲線呈“S”型，溶解曲線為尖銳單峰，擴(kuò)增產(chǎn)物單一，引物特異性較好。

Real-time RT-PCR檢測(cè)大鼠腎臟Glut9 mRNA相對(duì)表達(dá)量，用內(nèi)參基因GAPDH歸一目的基因Glut9的Ct值，相較于正常組，模型組Glut9 mRNA有上調(diào)趨勢(shì)（P=0.102）；相較于模型組，苯溴馬隆組與菊苣提取物高劑量組Glut9 mRNA有下調(diào)趨勢(shì)（P=0.085，P=0.101），菊苣提取物中、低劑量組Glut9 mRNA表達(dá)未見(jiàn)明顯改變，見(jiàn)圖3。

4 討論

4.1 果糖與高尿酸血癥 高尿酸血癥（HUA，hyperuricemia）是血尿酸水平在體內(nèi)持續(xù)性升高或者血尿酸鹽過(guò)飽和的一種病理狀態(tài)，現(xiàn)代高尿酸血癥患病率的增高與人民飲食結(jié)構(gòu)的改變具有密切聯(lián)系^[8]。果糖為己糖單糖，相關(guān)流行病學(xué)及臨床研究表明果糖過(guò)量攝入可導(dǎo)致代謝綜合征，其中，血清尿酸水平升高是其主要表現(xiàn)之一^[9-12]，近年來(lái)的相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與上述流行病學(xué)及臨床研究具有一致性^[13-14]。本研究中給予大鼠10%高果糖飲水造模，實(shí)驗(yàn)第10～40天，與正常組相比，給予果糖造模組大鼠血尿酸水平持續(xù)穩(wěn)定顯著性升高。

果糖誘導(dǎo)高尿酸血癥的病理機(jī)制可能與尿酸生成增加或排泄減少有關(guān)。有學(xué)者認(rèn)為高果糖攝入引起高尿酸血癥是由于果糖在肝臟迅速被轉(zhuǎn)化為果糖-1-磷酸，從而刺激ATP水解增加腺嘌呤核糖核苷酸AMP，AMP在腺苷脫氨酶ADA的催化下生成次黃嘌呤核苷，并進(jìn)一步在黃嘌呤氧化酶的作用下生成尿酸^[15]。另有研究顯示果糖誘導(dǎo)的血尿酸升高可能與調(diào)控腎臟尿酸分泌的有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體OAT，尿酸陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體UAT有關(guān)^[16]。此外，有研究認(rèn)為高果糖的攝入可引起腎臟血液動(dòng)力學(xué)以及排泄功能的改變^[17]。本研究顯示，實(shí)驗(yàn)第40天，與正常相比，果糖造模組24 h尿量，UUA及CUA均無(wú)顯著性差異，而在實(shí)驗(yàn)期間，果糖模型組血尿酸水平顯著升高，表明其尿酸排泄量相對(duì)減少。同時(shí)本研究測(cè)定了腎臟功能相關(guān)指標(biāo)，與正常組相比，果糖模型組CRE水平差異無(wú)顯著性，BUN水平顯著降低。CRE與BUN均為評(píng)價(jià)腎臟功能的指標(biāo)，其中BUN為機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的終產(chǎn)物，果糖模型組大鼠BUN水平顯著高于正常組，可能與其果糖飲水增多，飲食攝入減少有關(guān)，本研究結(jié)果不能說(shuō)明存在腎臟功能損害。

4.2 Glut9促進(jìn)腎臟尿酸重吸收，為促進(jìn)腎臟尿酸排泄的藥物作用靶點(diǎn) 尿酸生成過(guò)多與排泄減少均可使血尿酸水平升高，機(jī)體內(nèi)2/3尿酸經(jīng)由腎臟排泄，1/3經(jīng)由腸道排泄^[18]，腎臟在尿酸排泄途徑中有重要作用。腎臟的尿酸排泄主要包括腎小球?yàn)V過(guò)、腎小管和集合管重吸收以及重吸收后的再分泌，其中，腎小球?yàn)V過(guò)的尿酸約98%被腎小管重吸收^[19]。因此，腎小管的重吸收在腎臟的尿酸排泄過(guò)程中占重要地位。近年有研究顯示，果糖轉(zhuǎn)運(yùn)體Glut9與SUA水平密切相關(guān)，是高通量、低能量的尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體^[20-21]。Glut9由基因SLC2A9編碼，分為Glut9a和Glut9b 2個(gè)亞型，Glut9a由12個(gè)外顯子編碼，含540個(gè)氨基酸，表達(dá)于多個(gè)代謝器官，而Glut9b由13個(gè)外顯子編碼，含512個(gè)氨基酸，只在肝臟和腎臟中發(fā)現(xiàn)，并且腎小管是Glut9的主要表達(dá)場(chǎng)所，故Glut9是高尿酸血癥的危險(xiǎn)因子之一。

本研究中免疫組化染色顯示Glut9在大鼠腎臟近曲小管頂膜表達(dá)，模型組Glut9蛋白表達(dá)水平顯著高于正常組，表明其血尿酸升高可能與Glut9蛋白表達(dá)增加有關(guān)。相較于模型組，苯溴馬隆組Glut9蛋白表達(dá)水平顯著低于模型組，這與近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)的苯溴馬隆可抑制Glut9，減少腎臟尿酸重吸收的報(bào)道一致^[22]，結(jié)合苯溴馬隆組大鼠血尿酸水平顯著低于模型組，表明抑制Glut9蛋白表達(dá)，減少腎臟尿酸重吸收，可作為促進(jìn)腎臟尿酸排泄的藥物作用靶點(diǎn)。

4.3 菊苣可能通過(guò)抑制腎臟Glut9表達(dá)，減少腎臟尿酸的重吸收發(fā)揮促尿酸排泄作用 中藥菊苣為維吾爾族習(xí)用藥材，具有清肝利膽，健胃消食，利尿消腫的功效，本課題組長(zhǎng)期從事中藥菊苣的研究，發(fā)現(xiàn)其可穩(wěn)定的降低血尿酸水平。本研究顯示，實(shí)驗(yàn)期間相較于模型組，各菊苣提取物組的血清尿酸水平均顯著性降低，且存在一定的時(shí)效關(guān)系，這與本課題組前期研究結(jié)果一致^[23]。

本課題組前期從尿酸的生成途徑對(duì)菊苣降尿酸的藥效機(jī)制進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)菊苣可改變尿酸合成過(guò)程中關(guān)鍵酶的活性來(lái)抑制尿酸的生成，從而起到降低血尿酸的作用，如黃嘌呤氧化酶、腺苷脫氨酶^[4-24]。相關(guān)研究表明，對(duì)腎臟尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的調(diào)控可能是傳統(tǒng)中藥及其有效成分發(fā)揮降尿酸作用的機(jī)制之一^[25]。本研究結(jié)果顯示，與模型組相比，各菊苣提取物組大鼠CUA顯著升高，表明菊苣提取物可能通過(guò)促進(jìn)尿酸的腎臟排泄發(fā)揮降尿酸作用。尿酸水平的升高與腎臟Glut9過(guò)表達(dá)增加尿酸重吸收有關(guān)，本研究顯示，苯溴馬龍、菊苣提取物高、中、低劑量組可顯著降低高尿酸血癥大鼠腎臟Glut9蛋白的表達(dá)，有下調(diào)Glut9 mRNA表達(dá)的趨勢(shì)，表明菊苣提取物可通過(guò)抑制Glut9的表達(dá)，從而減少腎小管對(duì)尿酸的重吸收，促進(jìn)腎臟尿酸排泄發(fā)揮降尿酸作用，Glut9可能為菊苣提取物干預(yù)高尿酸血癥的作用靶點(diǎn)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 中國(guó)藥典.一部[S].2015：310.

[2] Billiet L， Doaty S， Katz J D， et al. Review of hyperuricemia as new marker for metabolic syndrome[J]. Isrn Rheumatol， 2014（5/6）：852954.

[3] Juraschek S P， Kovell L C， Miller E R， et al. Dose-response association of uncontrolled blood pressure cardiovascular disease riske factors with hyperuricemia and gout[J].PLoS ONE，2013，8（2）：e56546.

[4] 王雪潔，林志健，張冰，等.菊苣小分子化合物對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制作用的分子對(duì)接研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2015，40（19）：3818.

[5] 黃勝男，林志健，張冰，等.菊苣干預(yù)高尿酸血癥鵪鶉尿酸及相關(guān)代謝酶活性研究[J]. 中藥新藥與臨床藥理，2015（1）：9.

[6] So A，Thorens B. Uric acid transport and disease[J]. J Clin Invest，2010，120（6）：1791.

[7] Vitart V， Rudan I， Hayward C， et al. SLC2A9 is a newly identified urate transporter influencing serum urate concentration， urate excretion and gout.[J]. Nat Genet， 2008， 40（4）：437.

[8] 臧路平，劉志剛，吳新榮.高尿酸血癥發(fā)病機(jī)制及其藥物治療研究進(jìn)展[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011（1）：69.

[9] Bray G A. Energy and fructose from beverages sweetened with sugar or high-fructose corn syrup pose a health risk for some people [J]. Adv Nutr， 2013，4（2）：220.

[10] Batt C， Phippsgreen A J，Black M A，et al. Sugar-sweetened beverage consumption： a risk factor for prevalent gout with SLC2A9 genotype-specific effects on serum urate and risk of gout [J]. Ann Rhenum Dis， 2014，73（12）：2101.

[11] Pillinger M H， Abeles A M. Such sweet sorrow： fructose and the incidence of gout [J]. Curr Rheumatol Rep， 2010， 12（2）：77.

[12] Wang D D， Sievenpiper J L， Souza R J， et al. The effects of fructose intake on serum uric acid vary among controlled dietary trials [J]. J Nutr，2012， 142（5）：916.

[13] Nakagawa T，Hu H， Tuttle K R， et al.A causal role for uric acid in fructose-induced metabolic syndrome[J]. Am J Physiol-Renal，2006， 290（290）：F625.

[14] 李麗玉，林志健，張冰，等.連續(xù)高果糖飲水對(duì)大鼠尿酸水平的影響及其病理機(jī)制[J].中華臨床營(yíng)養(yǎng)雜志，2014，22（6）：368.

[15] 任路平，宋光耀.高果糖飲食與代謝綜合征研究新進(jìn)展[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2011，11：1278.

[16] Hu Q H， Wang C， Li J M， et al. Allopurinol， rutin， and quercetin attenuate hyperuricemia and renal dysfunction in rats induced by fructose intake： renal organic ion transporter involvement [J]. Am J Physiol-Renal， 2009，297（4）：F1080.

[17] Chen L， Lan Z， Zhou Y， et al. Astilbin attenuates hyperuricemia and ameliorates nephropathy in fructose-induced hyperuricemic rats [J]. Planta Med， 2011，77（16）：1769.

[18] Abramson R G， Levitt M F. Use of pyrazinamide to assess renal uric acid transport in the rat： a micropuncture study [J]. Am J Physiol，1976，230（5）：1276.

[19] Lipkowitz M S. Regulation of uric acid excretion by the kidney [J]. Curr Rheumatol Rep， 2012， 14（2）：179.

[20] Dalbeth N， House M E， Gamble G D， et al. Population-specific influence of SLC2A9 genotype on the acute hyperuricaemic response to a fructose load [J]. Ann Rheum Dis， 2013，72（11）：1868.

[21] Hastie N D. A′complexity′of urate transporters[J]. Kidney Int， 2010，78（5）：446.

[22] Bibery S， Hess S K， Firsov D， et al. Mouse GLUT9：evidences for a urate uniporter [J]. Am J Physiol-Renal， 2009， 297（3）：F612.

[23] 朱文靜，張冰，劉小青，等.大鼠高尿酸血癥證候?qū)W特征及菊苣的干預(yù)研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2013，12：3636.

[24] 黃勝男，林志健，張冰，等.菊苣干預(yù)高尿酸血癥鵪鶉尿酸及相關(guān)代謝酶活性研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2015（1）：9.

[25] Wang C P，Wang X， Zhang X， et al. Morin improves urate excretion and kidney function through regulation of renal organic ion transporters in hyperuricemic mice[J]. J Pharm Sci，2010，13（3）：411.

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