郁福來(lái)膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

倪玉佳，瞿發(fā)林

（中國(guó)人民解放軍第102醫(yī)院制劑中心，江蘇 常州 213003）

·檢驗(yàn)檢測(cè)·

郁福來(lái)膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

倪玉佳，瞿發(fā)林

（中國(guó)人民解放軍第102醫(yī)院制劑中心，江蘇 常州 213003）

目的制訂郁福來(lái)膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對(duì)郁福來(lái)膠囊中貫葉金絲桃藥材、金絲桃苷進(jìn)行定性鑒別，并采用高效液相色譜法測(cè)定郁福來(lái)膠囊中金絲桃苷的含量。結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品貫葉金絲桃藥材、金絲桃苷相應(yīng)位置上有相同的斑點(diǎn)，且分離效果好；金絲桃苷進(jìn)樣量在 0．173～1．73 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r＝0．999 9(n＝6），平均加樣回收率為99．65%，RSD＝1．00%(n＝6)。結(jié)論該研究中建立的定性和定量分析方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于控制郁福來(lái)膠囊的質(zhì)量。關(guān)鍵詞：郁福來(lái)膠囊；貫葉金絲桃；金絲桃苷；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

郁福來(lái)膠囊為醫(yī)院非標(biāo)準(zhǔn)制劑，是由中藥材貫葉金絲桃經(jīng)現(xiàn)代制劑工藝制備而成，具有清心明目、安神之功效，主要用于輕、中度抑郁癥的治療，已在臨床應(yīng)用10余年，療效確切[1]。貫葉金絲桃，又名貫葉連翹，為藤黃科金絲桃屬植物，廣泛分布于我國(guó)西南與西北地區(qū)，含豐富的金絲桃苷。筆者對(duì)郁福來(lái)膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行過(guò)研究，當(dāng)時(shí)由于2005年版《中國(guó)藥典（一部）》未收載貫葉金絲桃，故參考文獻(xiàn)采用薄層色譜（TLC）法對(duì)郁福來(lái)膠囊中槲皮素及蘆丁進(jìn)行定性分析，采用紫外分光光度（UV）法測(cè)定了郁福來(lái)膠囊的金絲桃素含量，但因槲皮素及蘆丁并不是貫葉金絲桃中代表性物質(zhì)，且金絲桃素對(duì)光和熱不穩(wěn)定，其對(duì)照品無(wú)法從法定單位購(gòu)買，故原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)存在不足。為保證制劑質(zhì)量，參照2010年版《中國(guó)藥典（一部）》[2]再次修訂郁福來(lái)膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，采用TLC法對(duì)其中貫葉金絲桃藥材、金絲桃苷進(jìn)行了薄層鑒別，并采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定郁福來(lái)膠囊中金絲桃苷的含量?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Waters 2487型高效液相色譜儀，Waters CapLC 2487型雙 λ吸光度檢測(cè)器，Empower2數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（美國(guó)Waters公司）；FA1004型電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠）；XS105型電子分析天平（梅特勒－托利多儀器有限公司）；KH2200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；ZF－20D型暗箱式紫外分析儀（鞏義市英峪予華儀器廠）；HHS型恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠）。

1．2 試藥

金絲桃苷對(duì)照品（批號(hào)為111521－201406，供含量測(cè)定用，含量為92．5%），貫葉金絲桃（批號(hào)為121506－200501），均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；郁福來(lái)膠囊（解放軍第102醫(yī)院制劑中心，批號(hào)分別為20150422，20150506，20150617，規(guī)格為每粒0．3 g）；甲醇與乙腈為色譜純，水為純化水，磷酸為分析純。

2 薄層鑒別[2]

2．1 貫葉金絲桃

2．1．1 溶液制備

供試品溶液：取郁福來(lái)膠囊內(nèi)容物0．1 g，加甲醇10mL，超聲處理10min，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

對(duì)照品溶液：取貫葉金絲桃對(duì)照品0．1 g，加甲醇10 mL，超聲處理10 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜? mL，作為對(duì)照品溶液。

陰性對(duì)照品溶液：按處方組成取不含貫葉金絲桃的其他成分，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2．1．2 展開(kāi)及檢視

照TLC法試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液4 μL，供試品溶液2 μL，陰性對(duì)照品溶液2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸（25∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，置紫外燈（365 nm）下檢視。結(jié)果，供試品溶液色譜中，在與貫葉金絲桃藥材色譜相應(yīng)位置上有相同的斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖1。

圖1 貫葉金絲桃薄層色譜圖

2．2 金絲桃苷

2．2．1 溶液制備

對(duì)照品溶液：取金絲桃苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取本品內(nèi)容物0．3 g，加甲醇10 mL，超聲處理10 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。

陰性對(duì)照品溶液：按處方組成取不含貫葉金絲桃的其他成分，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2．2．2 展開(kāi)及檢視

照TLC法試驗(yàn)，吸取金絲桃苷對(duì)照品溶液2 μL，供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各3 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸－水（8∶1∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外燈（365 nm）下檢視。結(jié)果，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液相應(yīng)的位置上有相同的斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖2。

3 含量測(cè)定(HPLC法)

3．1 色譜條件

色譜柱：Lichrospher C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇－0．025 mol／L磷酸（50∶50）；流速：1．0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：20℃。

圖2 金絲桃苷薄層色譜圖

3．2 溶液制備

對(duì)照品貯備液：精密稱取金絲桃苷對(duì)照品10．82 mg，置50 mL容量瓶中，加55%乙醇定容，即得。

對(duì)照品溶液：精密量取對(duì)照品貯備液1 mL，置10 mL容量瓶中，加55%乙醇定容，用有機(jī)濾膜（0．45 μm）濾過(guò)，棄初濾液，即得。

供試品溶液：取郁福來(lái)膠囊10粒，精密稱定，倒出其內(nèi)容物，研細(xì)混勻，精密稱取膠囊內(nèi)容物0．2 g，置50 mL容量瓶中，加55%乙醇30 mL，密塞，超聲處理10 min，取出，放冷，加55%乙醇稀釋至刻度，搖勻，用有機(jī)濾膜（0．45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

陰性對(duì)照品溶液：按處方組成，取除貫葉金絲桃以外的其他成分，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

3．3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果處方中其他成分對(duì)金絲桃苷測(cè)定無(wú)干擾，詳見(jiàn)圖3。

線性關(guān)系考察：分別精密量取對(duì)照品貯備液0．4，0．5，1，2，3，4 mL，置10 mL容量瓶中，加 55%乙醇定容，制成不同濃度的對(duì)照品溶液。按擬訂色譜條件依次進(jìn)樣，以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，以最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得金絲桃苷回歸方程 Y＝2．08×107X－2．62×105，r＝0．9999（n＝6）。結(jié)果表明，金絲桃苷進(jìn)樣量在0．173～1．73 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液，按3．1項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得金絲桃苷峰面積分別為767 729，770 010，751 318，767 139，766 775，結(jié)果的 RSD為0．98%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，3，6，9，12 h時(shí)按擬訂色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，測(cè)得金絲桃苷峰面積分別為 763 336，767 729，781 383，773 173，766 698，結(jié)果的 RSD為0．88%(n＝5)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖3 高效液相色譜圖

表1 金絲桃苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為20150422）樣品，按供試品溶液制備方法平行制備5份，依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果金絲桃苷含量分別為1．38，1．39，1．43，1．42，1．40 mg／粒，RSD為1．48%(n＝5)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：稱取已知含量的供試品（批號(hào)為20150422）6份，每份約0．1 g，精密稱定，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

3．4 樣品含量測(cè)定

取3批（批號(hào)分別為20150422，20150506，20150617）樣品，依法制備供試品溶液，同法進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算金絲桃苷含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

4 討論

4．1 鑒別

原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]中，以槲皮素及蘆丁為參照鑒別郁福來(lái)膠囊中貫葉金絲桃，但這2種物質(zhì)并非貫葉金絲桃中代表性物質(zhì)，特征性不強(qiáng)，故參照2010年版《中國(guó)藥典(一部)》[2]，以貫葉金絲桃藥材及金絲桃苷為參照進(jìn)行鑒別，經(jīng)驗(yàn)證，方法簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

4．2 含量測(cè)定

4．2．1 質(zhì)控指標(biāo)確定

金絲桃苷為黃酮醇苷類化合物，具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛，護(hù)心、腦、肝臟，抗心肌缺氧損傷和保護(hù)腦缺血損傷等作用[3－6]，為貫葉金絲桃的活性成分之一，且其對(duì)照品能從法定單位購(gòu)買；而原質(zhì)控指標(biāo)中的金絲桃素，對(duì)光和熱不穩(wěn)定[7]，且無(wú)法從法定單位購(gòu)買，故選擇金絲桃苷替代金絲桃素作為郁福來(lái)膠囊含量測(cè)定的質(zhì)控指標(biāo)。

4．2．2 提取溶劑選擇

金絲桃苷極性較大，常采用甲醇、乙醇進(jìn)行提取，筆者通過(guò)預(yù)試驗(yàn)比較了甲醇、乙醇作溶劑時(shí)金絲桃苷的提取率，發(fā)現(xiàn)乙醇提取效率高于甲醇，且毒性較低，故選用乙醇作為金絲桃苷的提取溶劑。又通過(guò)正交試驗(yàn)，優(yōu)選用55%的乙醇30 mL超聲提取樣品10 min，金絲桃苷提取結(jié)果滿意。

4．2．3 測(cè)定波長(zhǎng)選擇

對(duì)一定濃度的金絲桃苷對(duì)照品溶液進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果在360 nm波長(zhǎng)處有較大吸收，同時(shí)考慮其他雜質(zhì)干擾最小，故確定在此波長(zhǎng)下進(jìn)行測(cè)定。

4．2．4 流動(dòng)相選擇

本試驗(yàn)中參考2010年版《中國(guó)藥典(二部)》及相關(guān)文獻(xiàn)，比較了不同體系和不同比例的流動(dòng)相，如乙腈－0．1% 磷酸（16∶84）[2]，乙腈－水（其中含0．3%檸檬酸和2%四氫呋喃）（25∶75）[8]，乙腈－0．2% 磷酸（15∶85）[9]，水－乙腈－磷酸（82．5∶17．5∶1）[10]，甲醇－0．5%磷酸（45∶55，V／V，用三乙胺調(diào)pH至3．0）[11]，甲醇－0．1%磷酸水溶液（40∶60，V／V）[12]等，結(jié)果以甲醇－0．025 mol／L磷酸（50∶50）[13]為流動(dòng)相時(shí)保留時(shí)間適宜，峰形好，分離效果好，故以此為流動(dòng)相。

本研究中采用TLC法對(duì)郁福來(lái)膠囊中貫葉金絲桃藥材、金絲桃苷進(jìn)行定性鑒別，采用HPLC法測(cè)定郁福來(lái)膠囊中金絲桃苷含量，并進(jìn)行了方法學(xué)考察，發(fā)現(xiàn)建立的方法具有操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)。經(jīng)檢測(cè)，3批樣品中金絲桃苷含量均穩(wěn)定，故可用于郁福來(lái)膠囊中金絲桃苷的質(zhì)量控制。

[1]瞿發(fā)林，劉桂榮，趙漢清，等．郁福來(lái)膠囊質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)[J]．中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2005，25（1）：395－396．

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[5]陳志武，馬傳庚，趙維忠，等．金絲桃苷對(duì)腦缺血再灌損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]．藥學(xué)學(xué)報(bào)，1998，33（1）：14－17．

[6]李慶林，孟 剛，陳志武，等．金絲桃苷對(duì)心肌缺血損傷的保護(hù)作用[J]．安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，36（1）：15－17．

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Quality Control Standard of Yufulai Capsules

Ni Yujia，Qu Falin
（PLA 102nd Hospital，Changzhou，Jiangsu，China 213003）

Objective To study the quality control standard of Yufulai Capsules．Methods Herba hyperici perforati and hyperoside in Yufulai Capsules were identified by thin－layer chromatogram（TLC）．An HPLC method was used for the determination of hyperoside in Yufulai Capsules．Results Herba hyperici perforati and hyperoside were separated from other components well．The linear ranges of hyperoside was 0．173－1．73 μg，r＝0．999 9(n＝6）．The average recovery of hyperoside was99．65%，RSD＝1．00%(n＝6）．Conclusion The method is simple，sensitive and reliable，which can be applied in the quality control of Yufulai capsules．

Yufulai Capsules；herba hyperici perforati；hyperoside；quality standard

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2017)04－0016－04

2016－10－14)

10．3969／j．issn．1006－4931．2017．04．004

軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題[13ZJZ16－3]。

倪玉佳（1990－），女，江蘇常州人，碩士研究生，藥師，研究方向?yàn)樗幬锓治?，（電子信箱?23869088＠qq．com。

瞿發(fā)林（1965－），男，上海人，碩士研究生，主任藥師，研究方向?yàn)樯帉W(xué)，（電話）0519－83064780。