腫瘤微環(huán)境相關(guān)因子IL-6、IL-10、CXCR7在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及臨床意義

孫振華，趙志泓，蔣華平，許立生，孫亞軍，龍衛(wèi)國(guó)，王坤

（江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院 1. 甲乳外科 2. 耳鼻喉科 3. 病理科，江蘇 鎮(zhèn)江 212000）

甲狀腺乳頭狀癌是臨床上最為常見(jiàn)的甲狀腺惡性腫瘤，約占甲狀腺癌總數(shù)的80%以上。并且其發(fā)病率近年來(lái)仍呈上升趨勢(shì)[1-3]。研究[4-5]表明，甲狀腺癌腫瘤微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。腫瘤微環(huán)境是腫瘤生長(zhǎng)的“小環(huán)境”，小環(huán)境中巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等與腫瘤細(xì)胞相互作用，腫瘤生長(zhǎng)侵襲得到增強(qiáng)或抑制。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在微環(huán)境中可以發(fā)生表型轉(zhuǎn)變，具備促瘤生長(zhǎng)的能力[6-8]。而IL-6、IL-10和趨化因子受體7（chemokine receptor 7，CXCR7）與腫瘤微環(huán)境密切相關(guān)[9-11]。本研究旨在研究IL-6、IL-10和CXCR7在甲狀腺乳頭狀癌及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中的表達(dá)及差異，并探討其在甲狀腺乳頭狀癌中表達(dá)的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本

收集江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院甲乳外科2014年1月—2016年12月部分甲狀腺乳頭狀癌患者50例，其中男18例，女32例；年齡21歲～62歲，平均年齡41.2歲；＜45歲者19 例，≥45歲者31例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例；患者術(shù)前均未行放療或化療，術(shù)后經(jīng)病理科切片明確診斷為甲狀腺乳頭狀癌。選取同期本院收治的結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者20例作為對(duì)照組，其中男6例，女14例；年齡23歲～68歲，平均年齡43.1歲。

1.2 方法及試劑

應(yīng)用免疫組織化學(xué)Elivision法檢測(cè)IL-6、IL-10、CXCR7蛋白。兔抗人IL-6多克隆抗體，兔抗人IL-10單克隆抗體，兔抗人CXCR7多克隆抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司。使用已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作陰性對(duì)照。即用型非生物素免疫組化Elivison plus試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3 免疫組化結(jié)果判定

每張切片均選取5個(gè)400倍視野，進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞百分比和著色強(qiáng)度的計(jì)分。陽(yáng)性細(xì)胞百分比按視野內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞所占總細(xì)胞數(shù)的比例記分：＜5%、

6%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%分別得0、1、2、3、4分；依照顯色強(qiáng)度：未著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別得0分、1分、2分、3分；將兩項(xiàng)得分相乘得到該視野的最終得分，選取的5個(gè)視野得分的平均值為最后得分。最后該切片按照得分為以下4個(gè)等級(jí)：0～1分為（-），2～4分為（+），5～7分（++），≥8分（+++）。（-）為陰性，（+）、（++）、（+++）為陽(yáng)性[12]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)有差異。

2 結(jié) 果

2.1 IL-6、IL-10、CXCR7蛋白在甲狀腺乳頭狀癌、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中的表達(dá)

IL-6蛋白主要在細(xì)胞漿中表達(dá)，在甲狀腺乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為62.0%、30.0%，兩者陽(yáng)性表達(dá)率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；IL-10蛋白主要在細(xì)胞漿中表達(dá)，在甲狀腺乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為52.0%、20.0%，兩者陽(yáng)性表達(dá)率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；CXCR7蛋白定位于細(xì)胞漿或胞膜，在甲狀腺乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為66.0%、35.0%，兩者陽(yáng)性表達(dá)率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖1）（表1）。

圖1 各因子在甲狀腺乳頭狀癌表達(dá)（×400） A：IL-6；B：IL-10；C：CXCR7Figure 1 Expressions of each factor in papillary thyroid carcinoma (×400) A: IL-6; B: IL-10; C: CXCR7

表1 甲狀腺乳頭狀癌、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫IL-6、IL-10、CXCR7蛋白表達(dá)的比較[n（%）]Table 1 Comparison of expressions of IL-6, IL-10 and CXCR7 between papillary thyroid carcinoma tissue and nodular goiter tissue [n (%)]

2.2 IL-6、IL-10和CXCR7蛋白表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌病理特征的關(guān)系

IL-6、IL-10蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)與患者的性別、年齡、病灶數(shù)目及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（均P＞0.05），而與包膜侵犯有關(guān)（P=0.011）；CXCR7蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)與患者的性別、年齡、病灶數(shù)目及包膜侵犯無(wú)關(guān)（均P＞0.05），而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P=0.022）（圖1）（表2）。

表2 IL-6、IL-10、CXCR7與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征的關(guān)系[n（%）]Table 2 Relations of IL-6, IL-10 and CXCR7 with the clinicopathologic variables of papillary thyroid carcinoma patients [n (%)]

3 討 論

腫瘤微環(huán)境最早由Lord提出，是一個(gè)由腫瘤細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞、微血管、微淋巴管、組織液、眾多細(xì)胞因子及少量浸潤(rùn)細(xì)胞等組成的綜合系統(tǒng)[13-14]。腫瘤細(xì)胞與微環(huán)境相互影響，一方面腫瘤細(xì)胞為了存活，不停地塑造一個(gè)適宜的腫瘤預(yù)轉(zhuǎn)移微環(huán)境，如腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生促瘤功能，為腫瘤細(xì)胞的進(jìn)一步侵襲轉(zhuǎn)移提供基礎(chǔ)；另一方面腫瘤細(xì)胞所處的“小環(huán)境”也反過(guò)來(lái)作用于腫瘤細(xì)胞，決定腫瘤的發(fā)生發(fā)展[15-16]。這種腫瘤細(xì)胞與腫瘤微環(huán)境之間的“相互對(duì)話”，受一些重要的細(xì)胞因子調(diào)節(jié)，這些細(xì)胞因子來(lái)自腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，盡管它們自身并不具備明確的促瘤或抗瘤能力，但卻是腫瘤微環(huán)境與腫瘤細(xì)胞信息交換的橋梁，在腫瘤的演進(jìn)轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮協(xié)同或拮抗效應(yīng)。在眾多細(xì)胞因子中，IL-6、IL-10和CXCR7因子的作用已開(kāi)始受到腫瘤研究學(xué)者們的關(guān)注。

研究證實(shí)，腫瘤微環(huán)境誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2表型分化進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。M2型巨噬細(xì)胞受腫瘤細(xì)胞或間質(zhì)細(xì)胞分泌的趨化因子如IL-6、IL-8、IL-10、VEGF等趨化作用，大量聚集在腫瘤組織的缺氧區(qū)域[17]。本研究檢測(cè)IL-6、IL-10和CXCR7蛋白的表達(dá)，探討其在甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生發(fā)展中的作用。研究表明，IL-6、IL-10和CXCR7蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)率分別為62.0%、52.0%、66.0%，均高于對(duì)照的結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組（均P＜0.05）。IL-6為淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和部分腫瘤細(xì)胞所分泌，是184個(gè)氨基酸所組成的分泌性細(xì)胞因子，在多種腫瘤中可以檢測(cè)到異常表達(dá)的IL-6。腫瘤微環(huán)境中異常表達(dá)的IL-6通過(guò)誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的合成，促進(jìn)血管生成，影響腫瘤細(xì)胞的黏附和侵襲，介導(dǎo)腫瘤發(fā)生發(fā)展的過(guò)程，且與腫瘤的耐藥性有關(guān)[18]。IL-6作為監(jiān)測(cè)癌變的參考指標(biāo)已受學(xué)者重視，Panneer Selvam等[19]報(bào)道了唾液中IL-6水平可早期發(fā)現(xiàn)口腔癌。

而IL-10也是一種重要的腫瘤微環(huán)境影響因子，可由腫瘤細(xì)胞自身分泌，也可來(lái)源于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和輔助性T細(xì)胞，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要的作用。腫瘤細(xì)胞或間質(zhì)細(xì)胞分泌的IL-10能誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化成腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。它可能通過(guò)抑制樹(shù)突狀細(xì)胞成熟、削弱特異性 T細(xì)胞免疫應(yīng)答、促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞生成、抑制巨噬細(xì)胞的抗原提呈功能，抑制NK細(xì)胞活性等機(jī)制，幫助腫瘤逃避機(jī)體的免疫攻擊，影響CTL對(duì)腫瘤抗原的識(shí)別，使腫瘤細(xì)胞逃避CTL的殺傷作用，抑制腫瘤浸潤(rùn)炎癥細(xì)胞在腫瘤組織的浸潤(rùn)、分化、成熟及對(duì)腫瘤的殺傷作用，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)[20]。在本研究中，甲狀腺乳頭狀癌中IL-6、IL-10的高表達(dá)均與癌灶的包膜侵犯有關(guān)，在評(píng)估甲狀腺乳頭狀癌侵襲性時(shí)可作為參考。腫瘤微環(huán)境中的IL-10還能激活STAT3途徑，進(jìn)一步激活細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶ERK，進(jìn)而增強(qiáng)Th2細(xì)胞的分化，減弱Th1細(xì)胞的分化，影響腫瘤患者機(jī)體免疫狀態(tài)[21]。

CXCR7也影響著腫瘤的微環(huán)境。研究表明，CXCR7在腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細(xì)胞中上調(diào)，經(jīng)由ERK1/2磷酸化促進(jìn)腫瘤微環(huán)境中血管形成[22-23]。CXCR7是一個(gè)非典型趨化因子受體家族，其與趨化因子CXCL12形成的生物學(xué)軸在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用[24]。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CXCR7在乳腺癌細(xì)胞系McF-7，宮頸癌細(xì)胞系Hela、膠質(zhì)瘤細(xì)胞系T98G、肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、前列腺癌細(xì)胞系PC3等腫瘤中都有高表達(dá)。CXCR7在腫瘤發(fā)生發(fā)展中作用的發(fā)揮主要是通過(guò)與β抑制蛋白類相互作用，進(jìn)而調(diào)節(jié)CXCL12的生物利用率[25]。在本研究中，CXCR7蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá)，其表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯有關(guān)。這一結(jié)果表明CXCR7有可能在甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演了極其重要的作用。

綜上所述，腫瘤微環(huán)境相關(guān)因子IL-6、IL-10、CXCR7蛋白高表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌存在關(guān)聯(lián)，其表達(dá)水平可作為評(píng)估甲狀腺乳頭狀癌惡性侵襲及轉(zhuǎn)移參考的指標(biāo)。

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