十全育真湯對(duì)衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響

朱云超 詹光杰 袁德培 楊付明 黃 瓊

(湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北 恩施 445000)

十全育真湯對(duì)衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響

朱云超 詹光杰1袁德培 楊付明 黃 瓊

(湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北 恩施 445000)

目的 探討十全育真湯對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響。方法 昆明小鼠60只，隨機(jī)分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、模型組及對(duì)照組，每組12只。對(duì)照組按500 mg·kg-1·d-1腹腔注射生理鹽水，其他各組注射等量D-半乳糖。高劑量組、中劑量組、低劑量組注射D-半乳糖的同時(shí)按15、10、5 g·kg-1·d-1十全育真湯灌胃，模型組、對(duì)照組等量蒸餾水灌胃。各組自由飲食，連續(xù)飼養(yǎng)50 d。給藥40 d后行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)；50 d后檢測(cè)各組小鼠皮膚羥脯氨酸、心腦組織丙二醛(MDA)、脂褐質(zhì)(LP)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)含量，采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)小鼠血清中白細(xì)胞介素(IL)-2及IL-6含量。結(jié)果 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，十全育真湯各組潛伏期比模型組較明顯減少(P<0.05)，模型組小鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)比其他各組小鼠少(P<0.05)。對(duì)照組及十全育真湯各組MDA與LP含量低于模型組(P<0.05)，SOD與GSH-Px的活性明顯高于模型組(P<0.05)；十全育真湯組小鼠皮膚羥脯氨酸含量都明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，高于模型組(P<0.05)；十全育真湯組小鼠血清中IL-2、IL-6含量顯著高于對(duì)照組和模型組(P<0.05)，模型組IL-2、IL-6比對(duì)照組要低(P<0.05)。結(jié)論 十全育真湯在改善學(xué)習(xí)記憶功能，清除體內(nèi)自由基抗氧化，增強(qiáng)機(jī)體免疫能力等方面都有較好的作用。

十全育真湯；D-半乳糖；衰老

十全育真湯出自《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》治陰虛勞熱方篇，為清代名醫(yī)張錫純所創(chuàng)〔1〕。作為中西醫(yī)匯通學(xué)派的代表醫(yī)家，張錫純?cè)谌梭w病理生理的中西理論匯通及藥物的運(yùn)用、功效等方面積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)〔2〕。在許多疾病的病因證治張氏既有理論創(chuàng)新又有臨證實(shí)踐，認(rèn)為虛勞之因在于氣血遲滯，治虛勞必先治血痹，據(jù)此擬定了十全育真湯〔3〕。十全育真湯由野臺(tái)參、生黃芪、生山藥、知母、玄參、生龍骨、生牡蠣、丹參、三棱及莪術(shù)組成，具有益氣養(yǎng)陰，活血化瘀之功，對(duì)肌膚甲錯(cuò)，形體羸瘦，飲食不壯筋力，或自汗，或咳逆，或喘促，或寒熱不時(shí)，或多夢(mèng)紛紜，精氣不固等均有較好療效〔4〕。筆者也常用此方治療多種慢性病、虛損病，每獲良效。本實(shí)驗(yàn)采用注射D-半乳糖建立亞急性衰老小鼠模型，服用十全育真湯，觀察對(duì)衰老小鼠在益智、抗氧化及增強(qiáng)免疫力等方面的影響，探討其延緩衰老機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)昆明種小鼠(雌雄各半)，購(gòu)自湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心〔生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(鄂)2008-0005〕。4～6周齡，體重(20.6±2.5)g，常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2 藥品與儀器 十全育真湯由野臺(tái)參12 g、生黃芪12 g、生山藥12 g、知母12 g、玄參12 g、生龍骨12 g(搗細(xì))、生牡蠣12 g(搗細(xì))、丹參6 g、三棱4.5 g及莪術(shù)4.5 g組成，煎液由湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院藥劑科提供，相當(dāng)于生藥30%(2 g/ml)的液體,瓶裝密封消毒貯存于4 ℃?zhèn)溆?。D-半乳糖(晶美公司)，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、脂褐質(zhì)(LP)及羥脯氨酸檢測(cè)試劑盒(南京建成)，白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-6 ELISA試劑盒(美國(guó)Sigma公司)，其他化學(xué)試劑為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?湖北恩施樂之塬科技公司)。DMS-2 Morris水迷宮系統(tǒng)(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所)，全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo公司)，F(xiàn)A1640電子天平(上海天平儀器廠)，紫外分光光度儀(美國(guó)Beckman公司)，電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)(寧波新芝科技股份有限公司)。

1.3 動(dòng)物分組、造模及給藥 小鼠60只，隨機(jī)分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、模型組及對(duì)照組，每組12只。對(duì)照組按500 mg·kg-1·d-1腹腔注射生理鹽水，其他各組注射等量D-半乳糖〔5〕。高劑量組、中劑量組、低劑量組在注射D-半乳糖的同時(shí)按15、10、5 g·kg-1·d-1十全育真湯煎液灌胃，模型組、對(duì)照組等量蒸餾水灌胃。各組自由飲食，連續(xù)飼養(yǎng)50 d。

1.4 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 給藥40 d后，參考文獻(xiàn)〔6，7〕進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),整個(gè)水迷宮訓(xùn)練歷時(shí)10 d，上下午各1 次。水迷宮直徑185 cm、高55 cm，內(nèi)壁黑色，水深35 cm，水溫控制在23℃左右。訓(xùn)練前將水迷宮水池分為A、B、C、D四個(gè)相等區(qū)域，將高度為33 cm，直徑8 cm 的平臺(tái)置于C處，沒入水下2 cm。訓(xùn)練時(shí)小鼠面對(duì)池壁，依次從A、B、C、D入水點(diǎn)放入水中，記錄找到平臺(tái)的時(shí)間(逃避潛伏期)，超過2 min還未找到平臺(tái)的小鼠，則引至平臺(tái)(時(shí)間記為2 min)，訓(xùn)練9 d后撤除平臺(tái)。第10天小鼠放入水，記錄2 min內(nèi)跨越原平臺(tái)相應(yīng)位置的次數(shù)。

1.5 腦組織GSH-Px、SOD、MDA、LP及皮膚羥脯氨酸檢測(cè) 50 d后眼眶取血，處死小鼠，小心取出腦組織放入冰凍生理鹽水(0.9%)沖洗拭干，迅速用精密分析天平稱取重量后剪碎，制備成10%勻漿，離心后取上清低溫保存?zhèn)溆谩２⒓皶r(shí)取小鼠背部皮膚約1 cm2，去毛去脂，切碎晾干，精密稱取30 mg備用。按照試劑盒說明書進(jìn)行GSH-Px、SOD、MDA、LP及羥脯氨酸測(cè)定。

1.6 ELISA法檢測(cè)衰老小鼠血清IL-2、IL-6 將收集的小鼠血清及時(shí)處理或低溫貯存?zhèn)溆茫瑓⒖荚噭┖姓f明書檢測(cè)IL-2、IL-6。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 十全育真湯對(duì)小鼠空間探索、定位航行能力的影響 模型組平均潛伏期較對(duì)照組顯著增加(P<0.05)，十全育真湯各組平均潛伏期要比模型組顯著減少(P<0.05)。在空間探索能力的測(cè)試中，模型組穿越平臺(tái)的平均次數(shù)要比其他各組少(P<0.05)。見表1。

2.2 十全育真湯對(duì)腦組織氧化指標(biāo)的影響 模型組MDA、LP含量顯著高于其他各組(P<0.05)，SOD、GSH-Px活性明顯低于其他各組(P<0.05)。高劑量組、中劑量組MDA、LP少于低劑量組， SOD、GSH-Px活性則高于低劑量組(P<0.05)。見表2。

表1 十全育真湯對(duì)小鼠空間探索、 定位航行的影響

與模型組比較:1)P<0.05；與對(duì)照組比較:2)P<0.05；表3同

表2 十全育真湯對(duì)腦組織抗氧化性的影響±s,n=12)

與模型組比較:1)P<0.05；與低劑量組比較:2)P<0.05

2.3 十全育真湯對(duì)皮膚羥脯氨酸含量及血清IL-2、IL-6含量的影響 皮膚羥脯氨酸含量對(duì)照組明顯高于其他各組(P<0.05)，然而十全育真湯各組小鼠明顯高于模型組(P<0.05)。十全育真湯組小鼠血清中IL-2、IL-6含量顯著高于對(duì)照組和模型組(P<0.05)，模型組小鼠血清中的IL-2、IL-6比對(duì)照組要低(P<0.05)。見表3。

表3 十全育真湯對(duì)皮膚羥脯氨酸，血清中IL-2、 IL-6含量的影響

3 討 論

衰老又稱老化，是機(jī)體隨年齡的增長(zhǎng)，自身功能減退，體內(nèi)各種生理功能退行性退變。中醫(yī)學(xué)對(duì)衰老的認(rèn)識(shí)早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就有記載，認(rèn)為衰老是由脾氣虛、腎氣虛、脾腎兩虛、精氣神虛衰、精血津液虧虛及陰陽失調(diào)等所致〔8〕。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)則認(rèn)為衰老是代謝所產(chǎn)生過多的氧自由基造成細(xì)胞膜的破壞，使蛋白質(zhì)(酶)變性，并會(huì)導(dǎo)致一系列神經(jīng)功能損傷，造成認(rèn)知障礙，加速衰老〔9〕。明代虞摶《醫(yī)學(xué)正傳》認(rèn)為“腎氣盛則壽延，腎氣衰則壽夭”，腎虛為衰老之根本原因，而腎主骨生髓，髓通腦，所以衰老早期體現(xiàn)在學(xué)習(xí)記憶能力的下降。本實(shí)驗(yàn)表明衰老小鼠在空間定位、空間記憶等認(rèn)知方面是較差的。服用十全育真湯的小鼠平均潛伏期明顯縮短，撤去平臺(tái)后穿越原平臺(tái)次數(shù)也增加，說明十全育真湯衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力有比較好的恢復(fù)。中醫(yī)認(rèn)為脾胃為后天之本，氣血生化之源，為延年益壽之本〔8〕，健脾可調(diào)節(jié)機(jī)體代謝，改善免疫功能，減輕體內(nèi)自由基的損傷。本實(shí)驗(yàn)表明十全育真湯的抗衰老作用存在一定的量效關(guān)系。在羥脯氨酸含量檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，十全育真湯還可有效地恢復(fù)衰老小鼠皮膚中的羥脯氨酸的含量。衰老的另一顯著特征是免疫能力下降，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)十全育真湯能顯著增加小鼠體內(nèi)的IL-2和IL-6的含量，表明其可增強(qiáng)衰老小鼠的免疫功能，有助于促進(jìn)細(xì)胞的分裂增殖。

1 張錫純,著.王云凱,李彬之,韓 煜,重校.醫(yī)學(xué)衷中參西錄〔M〕.石家莊:河北科學(xué)技術(shù)出版社,2002:23-6.

2 楊付明.張錫純配伍運(yùn)用活血化瘀法據(jù)探析〔J〕.湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2003;20(3):49-51.

3 郝麗莉.論張錫純學(xué)術(shù)思想與十全育真湯的衍用〔J〕.中醫(yī)藥學(xué)報(bào),1998;5(1):9.

4 吳 曦.張錫純十全育真湯治驗(yàn)3則〔J〕.江蘇中醫(yī)藥,2008;40(10):71-2.

5 姜國(guó)良,于 曉,徐 愷，等.腹腔和皮下注射D-半乳糖衰老大鼠模型分析〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志,2013;33(5):1101-3.

6 王緒平,咼登俊,陳 宇,等.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)血管性癡呆大鼠模型的學(xué)習(xí)記憶能力〔J〕.中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2013;31(1):99-100.

7 劉金鳳,聶 坤,栗振杰,等.Morris水迷宮測(cè)評(píng)方法的改進(jìn)及對(duì)快速老化癡呆小鼠SAMP8認(rèn)知功能的再評(píng)價(jià)〔J〕.中國(guó)中醫(yī)急癥,2013;22(1):5-7.

8 冀小偉,張連城.中醫(yī)對(duì)衰老的認(rèn)識(shí)〔J〕.中醫(yī)雜志,2013;54(17):1527-9.

9 李 燕.銀耳多糖的抗衰老作用及其機(jī)制研究〔D〕.上海:第二軍醫(yī)大學(xué),2004.

〔2015-09-28修回〕

(編輯 曹夢(mèng)園)

國(guó)家中醫(yī)藥管理局公共衛(wèi)生專項(xiàng)資金項(xiàng)目(財(cái)社〔2010〕91號(hào))；湖北民族學(xué)院博士科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目(MY2010B004)

朱云超(1971-)，男，碩士，講師，主要從事延緩衰老及防治老年病的應(yīng)用研究。

R285.5

A

1005-9202(2017)05-1054-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.05.006

1 湖北民族學(xué)院科技學(xué)院