萆薢總皂苷對(duì)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎NALP3炎性體信號(hào)通路的影響

王 璐，那 莎，陳光亮

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)院, 安徽 合肥 230038)

萆薢總皂苷對(duì)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎NALP3炎性體信號(hào)通路的影響

王 璐，那 莎，陳光亮

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)院, 安徽 合肥 230038)

目的 研究萆薢總皂苷對(duì)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的防治作用及機(jī)制。方法 Wistar大鼠，♂，72只，隨機(jī)分組后，各用藥組大鼠預(yù)先灌胃給予不同劑量萆薢總皂苷，隨后右側(cè)踝關(guān)節(jié)腔注射尿酸鈉誘導(dǎo)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。觀察大鼠步態(tài)，測(cè)定關(guān)節(jié)腫脹度，HE染色進(jìn)行病理學(xué)分析。ELISA法檢測(cè)血清TNF-α、IL-1β、IL-18表達(dá)。Western blot法檢測(cè)滑膜組織中pro-IL-1β、NALP3炎性體相關(guān)蛋白變化。結(jié)果 萆薢總皂苷各濃度和秋水仙堿均可改善大鼠步態(tài)。TSD高、中劑量組與秋水仙堿類似，可降低大鼠關(guān)節(jié)腫脹度，病理學(xué)檢查踝關(guān)節(jié)病變好轉(zhuǎn)，血清TNF-α、IL-1β、IL-18明顯減少，滑膜組織pro-IL-1β、NALP3、ASC、caspase-1前體和活性形式蛋白表達(dá)降低。結(jié)論 萆薢總皂苷對(duì)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎具有防治作用，機(jī)制可能是抑制NALP3炎性體裝配和激活，以及抑制炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。

萆薢總皂苷；急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；尿酸鈉；NALP3；炎性體；炎性因子

急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(acute gouty arthritis，AGA)，是體內(nèi)嘌呤代謝紊亂血尿酸升高，導(dǎo)致尿酸鈉鹽(monosodium urate，MSU)晶體在關(guān)節(jié)及周圍組織沉積所引起的炎癥反應(yīng)。目前是危害人類健康的嚴(yán)重代謝性疾病，隨著生活水平的提高，發(fā)病率逐年升高[1-2]。萆薢(Dioscorea hypoglauca)來源于薯蕷科植物粉萆薢(Dioscorea hypoglauca polibin)的干燥根莖，具有利濕濁、祛風(fēng)濕之功效，主治膏淋、風(fēng)濕痹痛、濕疹，含甾體皂苷1.1%-2.6%[3]，是臨床上治療痛風(fēng)和高尿酸血癥的代表藥物。課題組前期研究顯示，萆薢總皂苷(total saponin of Dioscorea，TSD)可通過調(diào)節(jié)腎臟尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1 (uric acid transporter 1，URAT1)表達(dá)，促進(jìn)尿酸排泄，防治高尿酸血癥[4]。最新研究發(fā)現(xiàn)[5-7]，固有免疫直接參與痛風(fēng)的發(fā)展，多種固有免疫細(xì)胞參與識(shí)別并吞噬MSU晶體，激活胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)等的產(chǎn)生和成熟，其中NALP3( nod-like receptor protein 3，NALP3) 炎性體(NALP3 inflammasome)的形成是重要的信號(hào)活化產(chǎn)物。本實(shí)驗(yàn)以MSU誘導(dǎo)大鼠AGA模型，從與AGA急性發(fā)作相關(guān)的細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-18入手，進(jìn)一步研究TSD對(duì)大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織NALP3炎性體相關(guān)蛋白的影響，闡明TSD防治AGA的可能作用機(jī)制，為TSD的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 萆薢總皂苷(本課題組提供[8]，批號(hào)201501)。尿酸(Sigma公司, 10010995)；秋水仙堿片(西雙版納藥業(yè)有限責(zé)任公司，H53021369)；腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、IL-1β、IL-18酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)檢測(cè)試劑盒(武漢博士德科技有限公司，EK0393、EK0592、EK0526)；NALP3一抗(武漢博士德生物公司，BA3677)，ASC一抗(美國(guó)ImmunoWay公司，YT0365)，pro-caspase-1一抗(美國(guó)Abcam公司，ab108362)，cleaved caspase-1一抗(美國(guó)Santa Cruz公司，sc-1597)，β-actin一抗(美國(guó)CST公司，8H10D10)；二抗(HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG、山羊抗小鼠IgG)、ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒(碧云天生物技術(shù)公司A0208、A0239、P0018)等。

1.2 動(dòng)物 Wistar大鼠，♂，72只，體質(zhì)量(200±20)g，SPF級(jí)，由安徽省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證編號(hào)：SCXK(皖)2015-001。

1.3 儀器 YP202N電子天平(上海精密儀器有限公司)，TB-718生物組織包埋機(jī)(湖北泰維電子有限公司)，NOVA超薄切片機(jī)(LKB公司)，CKX41-F32FL 型倒置顯微鏡(美國(guó)Olympus 公司)，UV-754分光光度計(jì)(上海精密儀器有限公司)，酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo公司)Eppendorf 5430R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，DYY-7C電泳儀(北京六一儀器)，GE凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)GE公司)等。

1.4 方法

1.4.1 尿酸鈉溶液的制備 按照文獻(xiàn)方法[9]，取2g尿酸加入400 mL的沸水中，用1mol·L-1NaOH溶液調(diào)pH至7.4，再加熱至95℃，室溫冷卻并輕輕攪拌，4℃放置過夜，析出絮狀沉淀，過濾，得微晶型尿酸鈉，80℃高溫滅菌。用前稱取1g尿酸鈉，充分研磨，加無(wú)菌生理鹽水20 mL配成50 g·L-1的混懸液。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)分組與給藥 大鼠隨機(jī)均分為6組(n=12)：正常組，模型組，TSD低、中、高劑量組(30、100、300 mg·kg-1)和陽(yáng)性對(duì)照組(秋水仙堿0.3 mg·kg-1)，正常組和模型組蒸餾水灌胃，TSD和秋水仙堿組灌胃給藥，每日9點(diǎn)給藥1次，連續(xù)7 d，d 5給藥后1 h，正常組大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)背側(cè)注射無(wú)菌生理鹽水0.2 mL，其它各組在大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)背側(cè)注射0.2 mL MSU混懸液，誘導(dǎo)AGA模型。

1.4.3 關(guān)節(jié)腫脹度測(cè)定 關(guān)節(jié)腫脹度測(cè)定分別于造模前，造模后6、12、24、48 h測(cè)定大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)的容積，以(造模后關(guān)節(jié)容積-造模前關(guān)節(jié)容積)的差值作為關(guān)節(jié)腫脹度。

1.4.4 大鼠步態(tài)分級(jí) 造模24 h后，按Coderre[10]的方法觀察大鼠步態(tài)。0級(jí)：正常行走；1級(jí)：輕微跋行，受試下肢略有彎曲；2級(jí)：中度跋行，受試下肢剛觸及地面；3級(jí)：重度跋行，受試下肢離開地面，三足著地行走。

1.4.5 大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理學(xué)觀察 造模48 h后，各組取其中6只大鼠，處死后以受試踝關(guān)節(jié)為中心的上下0.5cm部位，經(jīng)4%多聚甲醛固定1周，常規(guī)石蠟包埋，5μm縱向切片，脫蠟水化后蘇木精、伊紅染色，逐級(jí)脫水封片。200×光學(xué)顯微鏡下觀察HE染色后踝關(guān)節(jié)滑膜組織、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等情況。

1.4.6 血清炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-18的測(cè)定 造模48h后，各組大鼠用10%水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈取血，靜置20min后，以3 500 r·min-1離心15 min，收集血清。實(shí)驗(yàn)時(shí)按ELISA試劑盒步驟操作，測(cè)定大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-18表達(dá)。

1.4.7 大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜組織IL-1β前體蛋白、NALP3炎性體相關(guān)蛋白表達(dá) 造模48 h后，按照文獻(xiàn)方法[11],各組取6只大鼠，處死后快速分離出踝關(guān)節(jié)滑膜組織置于研磨器中，于冰上加入含1 mmol·L-1PMSF的RIPA裂解液，并充分研磨，勻漿，于12 000 r·min-1，4 ℃離心5 min，收集上清液。Western blot檢測(cè)pro-IL-1β，NALP3炎性體組成蛋白NALP3、ASC、pro-caspase-1和caspase-1活性形式的表達(dá)。

2 結(jié)果

2.1 萆薢總皂苷對(duì)MSU誘導(dǎo)的急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)腫脹度影響 與正常組相比，模型組在造模后6、12、24、48 h關(guān)節(jié)腫脹度均明顯增加(P<0.01)。與模型組相比，秋水仙堿組在造模后6、12、24、48 h關(guān)節(jié)腫脹度降低，TSD高、中劑量組大鼠(300、100 mg·kg-1)在造模后6、12、24、48 h關(guān)節(jié)腫脹度降低，差異具有顯著性。TSD低劑量組(30 mg·kg-1)大鼠關(guān)節(jié)腫脹程度與模型組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見Fig 1。

Fig 1 Effect of TSD on articular swelling

One-way ANOVA analysis:▲▲P<0.01vsnormal;*P<0.05,**P<0.01vsmodel

2.2 萆薢總皂苷對(duì)MSU致急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠步態(tài)的影響 模型組大鼠在注射MSU造模 24h后，活動(dòng)減少，后肢彎曲，輕觸或抬離地面，呈三足步態(tài)，且關(guān)節(jié)局部紅腫程度嚴(yán)重。TSD 30、100、300 mg·kg-1組及秋水仙堿組大鼠與模型組相比步態(tài)評(píng)分差異均有顯著性，步態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，見Tab 1。

2.3 萆薢總皂苷對(duì)大鼠踝關(guān)節(jié)及周圍組織病理學(xué)的影響 正常組大鼠滑膜組織無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，未見毛細(xì)血管充血、水腫，滑膜層細(xì)胞均勻分布；模型組大鼠滑膜組織可見明顯滑膜增生、充血水腫、大量中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。TSD 30 mg·kg-1周圍軟組織充血水腫明顯有較多的炎細(xì)胞浸潤(rùn)，較模型組略有改善。TSD 100 mg·kg-1組可見部分充血水腫，滑膜層細(xì)胞有增生，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較模型組改善明顯。TSD 300 mg·kg-1組與秋水仙堿組相似，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)少，滑膜層細(xì)胞基本正常，僅有輕微充血水腫，與模型組相比有明顯改善。見Fig 2。

GroupDose/mg·kg-1Gaitlevel0123SignificanceNormal-12000Model-001110.000▲▲TSD3000840.004**10003630.001**30025320.000**Colchicine0.334320.000**

Mann-Whitney U analysis：▲▲P<0.01vsnormal；**P<0.01vsmodel

Fig 2 Effect of TSD on histological pathology of ankle joint in AGA rats(200×)

A:Normal;B:Model;C:TSD 30 mg·kg-1;D: TSD 100 mg·kg-1;E: TSD 300 mg·kg-1;F:Colchicine

2.4 萆薢總皂昔對(duì)大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-18水平的影響 與正常組相比，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-18水平明顯增加。與模型組大鼠相比，秋水仙堿組和TSD高、中劑量組大鼠(300、100 mg·kg-1)TNF-α、IL-1β、IL-18水平降低,差異有顯著性(P<0.05)。TSD低濃度組(30mg·kg-1)各炎性因子水平與模型組相比均未見明顯差異。見Fig 3。

Fig 3 Effect of TSD on TNF-α,IL-1β,

1:Normal;2:Model;3:TSD 30 mg·kg-1;4: TSD 100 mg·kg-1;5: TSD 300 mg·kg-1;6:Colchicine. One-way ANOVA analysis.▲▲P<0.01vsnormal;*P<0.05,**P<0.01vsmodel

2.5 萆薢總皂苷對(duì)大鼠滑膜組織IL-1β前體、NALP3炎性體相關(guān)蛋白的影響 Western blot和半定量統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，模型組大鼠pro-IL-1β表達(dá)較正常對(duì)照組明顯上調(diào)，而TSD 300、100 mg·kg-1、秋水仙堿組與模型組相比明顯降低。NALP3、ASC、pro-caspase-1和cleaved caspase-1蛋白在正常組大鼠中僅有微量表達(dá)，而在模型組大鼠中明顯升高。與模型組相比，秋水仙堿組、TSD 300、100 mg·kg-1組可見NALP3、ASC、pro-caspase-1和cleaved caspase-1蛋白表達(dá)明顯降低，呈劑量依賴性；而TSD 30 mg·kg-1組與模型組相比有降低趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見Fig 4。

3 討論

急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是MSU晶體沉積在關(guān)節(jié)組織引起的，發(fā)作時(shí)以四肢遠(yuǎn)端關(guān)節(jié)非對(duì)稱的急性劇痛、紅腫、發(fā)熱為主要特征，起病急劇，是痛風(fēng)首發(fā)癥狀。緩解關(guān)節(jié)癥狀，抑制炎癥反應(yīng)對(duì)防治痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎具有重要意義?，F(xiàn)有大量研究顯示NALP3炎性體信號(hào)通路在痛風(fēng)炎癥與免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[12-14]。NALP3是NLRs受體家族中的重要亞族之一，主要由B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等產(chǎn)生。NALP3作為胞內(nèi)模式識(shí)別受體，識(shí)別病原相關(guān)分子模式和危險(xiǎn)相關(guān)分子模式。如MSU 、SiO2、CPPD、胞外ATP等危險(xiǎn)信號(hào)分子，可作為配體被NALP3識(shí)別，使NALP3發(fā)生蛋白寡聚化，并招募銜接蛋白凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(apoptosis associated speck-like protein containing，ASC)和具有半胱天冬酶活化募集結(jié)構(gòu)域(caspase activiting and recruitment domain，CARD)的半胱天冬酶-1(caspase-1)，組裝成NALP3炎性體，最終活化效應(yīng)蛋白caspase-1。IL-1β是痛風(fēng)急性發(fā)作的關(guān)鍵細(xì)胞因子[15]，IL-18、IL-6、TNF-α等都被報(bào)道參與痛風(fēng)的發(fā)展。近期研究發(fā)現(xiàn)[16-17]，IL-1β的成熟受到兩個(gè)信號(hào)調(diào)控，一是細(xì)胞外模式識(shí)別受體Toll樣受體，調(diào)控pro-IL-1β的產(chǎn)生；另一個(gè)關(guān)鍵信號(hào)是經(jīng)NALP3炎性體效應(yīng)蛋白caspase-1剪切，使IL-1β的前體成有活性的形式?；罨腎L-1β、IL-18等炎性因子分泌到細(xì)胞外產(chǎn)生痛風(fēng)的炎癥級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)。NALP3、ASC、caspase-1是炎性體激活的關(guān)鍵，IL-1等炎性因子是炎性體激活后致炎的終產(chǎn)物，是目前防治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎新的研究要點(diǎn)。最新研究發(fā)現(xiàn)[18]：TRAIL 與Neuropilin-2兩種細(xì)胞因子在急性痛風(fēng)發(fā)作時(shí)明顯上調(diào)，亦可作為日后診斷、治療的新指標(biāo)?！端幤坊x》中記載，萆薢“性味淡薄，長(zhǎng)于滲濕，主治風(fēng)寒麻痹”，含甾體皂苷1.1%～2.6%，主要為粉背皂苷A(hypoglaucine A)、原粉背皂苷A(protohypoglaucine A)、纖細(xì)薯蕷皂苷(gracillin)、原纖細(xì)薯蕷皂苷(progracillin)[3]。甾體皂苷元(主要是薯蕷皂苷元)是半合成甾體激素的主要原料，最早法國(guó)專利報(bào)道薯蕷皂苷元(diosgenin)及其總皂苷有抗關(guān)節(jié)炎作用。美國(guó)Pfizer制藥公司用替告皂苷元(tigogenin)和海柯皂苷元(hecogenin)為甾體母核所合成的纖維雙糖苷有很強(qiáng)的降血脂作用。不同文獻(xiàn)對(duì)痛風(fēng)用藥規(guī)律系統(tǒng)分析顯示，在常用處方中萆薢使用頻率排在前10位[19-22]。本實(shí)驗(yàn)以下游炎性因子和NALP3炎性體為出發(fā)點(diǎn)，探討萆薢總皂苷防治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制。

1:Normal;2:Model;3:TSD 30 mg·kg-1;4: TSD 100 mg·kg-1;5: TSD 300 mg·kg-1;6:Colchicine. One-Way ANOVA analysis:▲▲P<0.01vsnormal;*P<0.05,**P<0.01vsmodel

本實(shí)驗(yàn)采用大鼠踝關(guān)節(jié)注射MSU晶體復(fù)制AGA模型，造模后大鼠關(guān)節(jié)腫脹程度明顯增加，后肢彎曲抬離地面，呈三足步態(tài)；病理切片結(jié)果顯示，滑膜組織可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，充血水腫明顯，模型復(fù)制成功。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：TSD組與模型組比較，TSD各濃度均可改善大鼠步態(tài)，300、100 mg·kg-1的TSD能明顯改善大鼠關(guān)節(jié)腫脹程度，使炎細(xì)胞的浸潤(rùn)減少，緩解組織充血水腫。以上結(jié)果表明，TSD可明顯改善急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠病變，效果與秋水仙堿類似。

模型組大鼠血清中IL-1β、IL-18、TNF-α表達(dá)明顯升高，提示IL-1β、IL-18、TNF-α等炎性因子在痛風(fēng)急性發(fā)作中起到重要作用。與秋水仙堿類似，TSD高、中劑量均可抑制炎性因子的表達(dá)。Martinon等[7]研究發(fā)現(xiàn)用MSU誘導(dǎo)小鼠腹膜炎，NALP3-/-、ASC-/-以及caspase-1-/-小鼠腹膜炎癥反應(yīng)比野生型小鼠明顯減輕，IL-1β的成熟和釋放受到明顯抑制。提示MSU介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)需要NALP3炎性體的參與，而IL-1β的成熟也是受到NALP3炎性體的直接調(diào)控。因而探討TSD發(fā)揮作用是否與抑制NALP3炎性體的活化相關(guān)具有重要的研究意義。本實(shí)驗(yàn)中模型組大鼠滑膜組織NALP3、ASC、caspase-1的前體和活性形式表達(dá)均明顯上調(diào)，說明NALP3炎性體參與AGA炎癥的發(fā)展。與模型組相比，300、100mg·kg-1的TSD可明顯降低NALP3、ASC、caspase-1前體和活性形式的表達(dá)，說明TSD抗AGA作用的發(fā)揮可能是通過抑制NALP3炎性體的裝配以及活化，與秋水仙堿類似。因而實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TSD可通過抑制NALP3炎性體的裝配以及激活的caspase-1，調(diào)節(jié)下游炎性因子表達(dá)，緩解痛風(fēng)急性發(fā)作的癥狀，防治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。因其對(duì)IL-1β前體也具有抑制作用，TSD是否參與另一細(xì)胞膜上的固有免疫識(shí)別受體Toll樣受體調(diào)節(jié)的通路還需要以后進(jìn)一步研究。TSD發(fā)揮作用具有多靶點(diǎn)性，為臨床實(shí)踐提供有力的依據(jù)，并為NALP3炎性體通路相關(guān)的疾病防治提供參考。

(致謝：本研究在安徽中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)院藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室完成，衷心感謝本課題組所有老師和同學(xué)的指導(dǎo)和幫助。)

[1] Lu X,Li X,Zhao Y,et al. Contemporary epidemiology of gout and hyperuricemia in community elderly in Beijing[J].IntJRheumDis, 2014,17(4):400-7.

[2] Kuo C F,Grainge M J,Zhang W,et al. Global epidemiology of gout: prevalence, incidence and risk factors[J].NatRevRheumatol, 2015,11(11):649-62.

[3] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).《中華本草(精選本)》[M].上海:上?？萍汲霭嫔?1998: 2107-11.

[3] Editorial board of Chinese Materia Medica of State Administration of Traditional Chinese Medicine. Chinese Mateteria Medica[M]. Shanghai: Shanghai Scientific and Technical Publishers, 1998: 2107-11.

[4] 陳光亮,朱立然,那 莎,等. 萆薢總皂苷對(duì)大鼠慢性高尿酸血癥和腎小管尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體1表達(dá)的影響[J]. 中國(guó)中藥雜志, 2013,38(14):2348-53.

[4] Chen G L,Zhu L R,Na S,et al. Effect of total saponin of Disoscorea on chronic hyperuricemia and expression of URAT1 in rats[J].ChinJChinMaterMed, 2013,38(14):2348-53.

[5] Qing Y F,Zhang Q B,Zhou J G. Innate immunity functional gene polymorphisms and gout susceptibility[J].Gene, 2013,524(2):412-4.

[6] 王 璐,李 璐,陳光亮. NALP3炎性體在痛風(fēng)中的作用與藥物治療研究進(jìn)展[J]. 生命科學(xué), 2016,28(3):405-8.

[6] Wang L,Li L,Chen G L. Role of NALP3 inflammasome in the pathogenesis of gout and advances in drug treatment[J].ChinBullLifeSci, 2016,28(3):405-8.

[7] Martinon F,Pétrilli V,Mayor A,et al. Gout-associated uric acid crystals activate the NALP3 inflammasome[J].Nature, 2006, 440(7081):237-41.

[8] 陳光亮. 萆薢牛膝總皂苷防治痛風(fēng)及其機(jī)制研究[D]. 合肥:安徽醫(yī)科大學(xué), 2005:34-6.

[8] Chen G L. Effcts and mechanisms of total saponin of Dioscorea and Achyranthes on gout[D]. Hefei:Anhui Medical University, 2005:34-6.

[9] Huang H G,Sun Y F,Ming H U, et al. Characteristics of monosodium urate monohydrate crystal-induced acute arthritis in rats that mimicked human gouty arthritis[J].BullAcadMil, 2005,29: 538-42.

[10] Coderre T J,Wall P D. Ankle joint urate arthritis in rats provides a useful tool for the evaluation of analgesic and anti-arthritic agents[J].PharmacolBiochemBehav, 1988,29(3):461-6.

[11] 胡雨峰,俞晶華,奚飛飛. 桂枝芍藥知母湯對(duì) CIA 大鼠關(guān)節(jié)炎的作用及其機(jī)制研究[J]. 江蘇中醫(yī)藥, 2015,47(11):76-82.

[11] Hu Y F,Yu J H,Xi F F. Influence and mechanism research of Guizhishaoyaozhimu decoction of CIA rats[J].JiangsuJTraditChinMed, 2015,47(11):76-82.

[12] Church L D,Cook G P,McDermott M F. Primer: inflammasomes and interleukin-1 beta in inflammatory disorders[J].NatClinPractRheumatol, 2008,4(1): 34-42.

[13] Tao J H,Zhang Y,Li X P. P2X7R: a potential key regulator of acute gouty arthritis[J].SeminArthritisRheum, 2013, 43(3):376-80.

[14] Steiger S,Harper J L.Mechanisms of spontaneous resolution of acute gouty inflammation[J].CurrRheumatolRep, 2014,16(1):392.

[15] Kingsbury S R,Conaghan P G,McDermott M F. The role of the NLRP3 inflammasome in gout[J].JInflammRes, 2011,4:39-49.

[16] McCormack W J,Parker A E,O'Neill L A. Toll-like receptors and NOD-like receptors in rheumatic diseases[J].ArthritisResTher, 2009,11(5):243.

[17] Motta V,Soares F,Sun T, et al. NOD-like receptors: versatile cytosolic sentinels[J].PhysiologicalReviews, 2015,95(1):149-78.

[18] 姚 麗,霍 紅,韓 月,等.痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的生物標(biāo)志物[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2012,28(10):1432-5.

[18] Yao L,Huo H,Liu J,et al. The biomarkers of gouty arthritis[J].ChinPharmacolBull, 2012,28(10):1432-5.

[19] 徐 熠,徐玲玲,劉 靜,等.中藥治療慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的規(guī)律及其Logistic回歸分析[J]. 世界臨床藥物, 2013,34(8):469-71.

[19] Xu Y,Xu L L,Liu J, et al. Treatment regularity with traditional Chinese medicine for chronic gouty arthritis and its Logistic regression analysis[J].WorldClinicalDrugs, 2013,34(8):469-71.

[20] 佟金秋,馬寶東,陳巖松.痛風(fēng)內(nèi)治法用藥規(guī)律系統(tǒng)綜述[J]. 實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志, 2013,27(10):1-2.

[20] Tong J Q, Ma B D, Chen Y S. The systematic review in external treatment medication rule of gout[J].JPracticalTraditChinIntMed, 2013,27(10):1-2.

[21] 孫 益,賈萬(wàn)貴,李象鈞,等.基于數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)的中醫(yī)藥治療痛風(fēng)臨床用藥分析研究[J]. 中國(guó)中醫(yī)急癥, 2014,23(1):58-9.

[21] Sun Y, Jia W G, Li X J, et al. Analysis research of TCM treatment experience in gout based on date mining technology[J].JEmergTraditChinMed, 2014,23(1):58-9.

[22] 潘碧琦, 潘建科, 劉 軍, 等.基于關(guān)聯(lián)規(guī)則和復(fù)雜系統(tǒng)熵聚類的痛風(fēng)用藥規(guī)律研究[J]. 中華中醫(yī)藥雜志, 2014,29(6):2040-3.

[22] Pan B Q, Pan J K, Liu J, et al. Analysis on medication rule in herbal prescriptions for gout based on apriori and clustering algorithm[J].ChinJTraditChinMedPharmacy, 2014,29(6):2040-3.

Effect of total saponin of Dioscorea on NALP3 inflammasome signaling pathway with acute gouty in rats

WANG Lu, NA Sha, CHEN Guang-liang

(ClinicalCollegeofIntegrativeMedicine,AnhuiUniversityofChineseMedicine,Hefei230038,China)

Aim To investigate the effects of total saponin of Dioscorea (TSD) on rats with monosodium urate crystal-induced acute gouty arthritis (AGA) and mechanisms. Methods Totally 72 Wistar rats were randomly devided into six groups, Each group was given corresponding drug before, then rat acute gouty arthritis model was made by injection of monosodium urate in the ankle joint cavity. The gait, articular swelling degree and physiological changes of rats were observed. The concentration of TNF-α,IL-1β,IL-18 in serum were detected by ELISA. The levels of pro-IL-1β, NALP3, ASC, pro-caspase-1, and cleaved caspase-1 were detected by Western blot. Results All TSD groups and colchicine significantly changed the gait of rats and TSD high and middle groups significantly reduced joint swelling and diminished the pathological changes. The levels of TNF-α,IL-1β,IL-18 in serum were significantly decreased, and the levels of pro-IL-1β, NALP3, ASC, pro-caspase-1 and cleaved caspase-1 were apparently reduced in TSD high and middle groups. Conclusion TSD possesses anti-gout function and the mechanism may be related to suppressing the NALP3 inflammasome activation and inhibiting the cytokine production.

total saponin of Dioscorea; acute gouty arthritis; MSU; NALP3; inflammasome; inflammatory cytokines

時(shí)間：2017-3-4 11:50

http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170304.1150.026.html

2016-10-13，

2016-12-18

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81573670)

王 璐(1992-)，女，碩士生，研究方向：藥物防治代謝性疾病，E-mail:wlulu0302@163.com； 陳光亮(1964-)，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：藥物防治代謝性疾病，通訊作者，E-mail:chguangl@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.03.013

A

1001-1978(2017)03-0354-07

R-332；R284.1；R364.5；R392.12；R589.7；R684.3