豬弓形蟲自然感染病例病理組織學(xué)觀察

馬文才，郭抗抗，張為民

(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西楊陵 712100)

豬弓形蟲自然感染病例病理組織學(xué)觀察

馬文才，郭抗抗，張為民*

(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西楊陵 712100)

為探究豬弓形蟲感染對(duì)豬器官組織學(xué)結(jié)構(gòu)的影響，對(duì)信陽(yáng)某豬場(chǎng)自然發(fā)病豬進(jìn)行病理學(xué)診斷。處死病豬后采取肝臟組織用福爾馬林固定，姬姆薩染色法進(jìn)行染色。采集肺、肝、腎、淋巴結(jié)和心等組織，石蠟包埋，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。在用姬姆薩染色的肝臟切片上能夠觀察到弓形蟲的速殖子，分別在肺、肝、腎、脾臟、淋巴結(jié)和心臟等組織器官切片中發(fā)現(xiàn)弓形蟲滋養(yǎng)體或假囊，表明該場(chǎng)疾病是由豬弓形蟲引起的，各組織器官出現(xiàn)出血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞增多等病理變化。

豬；弓形蟲；診斷；病理組織學(xué)

豬弓形蟲病(Porcine toxoplasmosis)是許多動(dòng)物都能夠感染的一種人畜共患病，其中人和豬的感染率都很高，有報(bào)道顯示人類在全球范圍內(nèi)弓形蟲血清陽(yáng)性率在0～90%之間[1]。在豬群中呈流行性暴發(fā)，臨床癥狀以全身淋巴結(jié)病變?yōu)樘卣?。懷孕母豬極易感染弓形蟲，常常表現(xiàn)為流產(chǎn)或死胎，并且該病的病死率很高。楊曉偉等[2]對(duì)重慶地區(qū)6個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)不同飼養(yǎng)階段的豬分別采樣分析顯示，6個(gè)豬場(chǎng)中有4個(gè)豬場(chǎng)的母豬均變現(xiàn)出較高的弓形蟲血清陽(yáng)性率。隨著規(guī)?；B(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，全國(guó)性暴發(fā)性的豬弓形蟲病已經(jīng)不多見，但地方性暴發(fā)流行還時(shí)常發(fā)生[3]。我們對(duì)信陽(yáng)某豬場(chǎng)自然感染病例進(jìn)行臨床檢查和實(shí)驗(yàn)室診斷，確診為豬弓形蟲病?，F(xiàn)就基本情況總結(jié)如下，以期為臨床診斷該病提供資料。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例 2014年8月中旬，信陽(yáng)某豬場(chǎng)一棟豬舍共260頭母豬開始發(fā)病，體溫達(dá)到40.5℃～41.5℃，不采食，糞便呈粒狀，外附黏液，尿呈橘黃色。數(shù)日后病豬在前肢外側(cè)處出現(xiàn)出血斑。有的病豬在耳尖發(fā)生干性壞死，耳殼上形成痂皮。有的病豬在發(fā)病后期出現(xiàn)后肢麻痹等神經(jīng)癥狀。死亡時(shí)呼吸極度困難和體溫急劇下降。部分懷孕母豬發(fā)生流產(chǎn)和死胎。

1.1.2 病理組織學(xué)試劑與儀器設(shè)備 HE染色和姬姆薩染色相關(guān)試劑和切片制作相關(guān)儀器，由西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院臨床獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 方法

1.2.1 病理剖檢和采樣 對(duì)病豬進(jìn)行病理剖檢，觀察并記錄病變，同時(shí)采取肺、肝、腎、淋巴結(jié)和心等組織器官固定在100 mL/L福爾馬林中，制作石蠟切片，HE染色和姬姆薩染色。

1.2.2 姬姆薩染色 按照姬姆薩染色液說明書進(jìn)行染色，顯微鏡觀察。

1.2.3 石蠟切片制作 常規(guī)方法制作石蠟切片[4]，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。

2 結(jié)果

2.1 病理剖檢變化

發(fā)現(xiàn)腹股溝淋巴結(jié)有出血點(diǎn)，腫大；肺心葉與膈葉前下緣出現(xiàn)肺炎灶，肺水腫、小葉間質(zhì)增寬及小葉性肺炎；心臟有心包炎；脾臟腫大，切面脾髓易刮脫，粥狀；肝臟腫大、邊緣鈍圓、表面有灰白色壞死灶；腎臟腫大、呈土黃色、表面有出血點(diǎn)和灰白色壞死灶；腸道可見到扁豆大小的壞死灶。

2.2 姬姆薩染色結(jié)果

用姬姆薩染液染色后的肝臟在顯微鏡能夠觀察到弓形蟲的滋養(yǎng)體(圖1)。

圖1 肝細(xì)胞胞漿可見滋養(yǎng)體(姬姆薩染色，400×)

2.3 組織學(xué)觀察

肺臟可見肺出血，肺泡腔增大、腔內(nèi)塵細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞增多；肺泡壁肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞增生；部分肺泡壁上皮細(xì)胞變性、壞死和脫落，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)(圖2)。肝細(xì)胞顆粒變性，肝細(xì)胞索和肝血竇消失，紅細(xì)胞變形且紅細(xì)胞內(nèi)有蟲體存在，在肝細(xì)胞漿內(nèi)見弓形蟲滋養(yǎng)體或假囊，肝臟部分細(xì)胞壞死，形成壞死灶，壞死灶內(nèi)有枯否氏細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，在壞死灶周圍有出血現(xiàn)象；肝小葉間質(zhì)可見大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，且間質(zhì)結(jié)締組織增生；肝門管區(qū)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和嗜酸性粒細(xì)胞增多，結(jié)締組織增生(圖3a和圖3b)。腎臟腎小球出血，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和嗜酸性粒細(xì)胞增多，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，胞漿有大量微細(xì)顆粒，部分腎小管上皮細(xì)胞壞死，壞死的上皮細(xì)胞碎片脫落掉入管腔；有的腎小管結(jié)構(gòu)不完整，在腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)內(nèi)皮細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞漿中可見弓形蟲滋養(yǎng)體(圖4)。淋巴結(jié)出血，淋巴小結(jié)消失，淋巴細(xì)胞數(shù)量減少和淋巴竇內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞增多，網(wǎng)狀細(xì)胞水泡變性；淋巴結(jié)壞死，形成壞死灶，在巨噬細(xì)胞漿內(nèi)可見弓形蟲滋養(yǎng)體(圖5)。脾臟淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，巨噬細(xì)胞數(shù)量增多，出血；脾臟白髓生發(fā)中心和帽區(qū)消失；脾臟含鐵血黃素增多，嗜酸粒細(xì)胞數(shù)量增多和可見弓形蟲滋養(yǎng)體；紅髓嗜酸粒細(xì)胞數(shù)量增多，網(wǎng)狀細(xì)胞壞死，巨噬細(xì)胞胞漿內(nèi)可見弓形蟲滋養(yǎng)體，紅細(xì)胞變形(圖6)。心臟出血，心肌纖維腫脹，心肌纖維胞漿可見大量微細(xì)蛋白質(zhì)顆粒，部分心肌纖維壞死，核溶解消失，心臟組織間隙嗜酸性粒細(xì)胞增多(圖7)。

圖2 肺出血(HE染色，400×)

3 討論

弓形蟲是一種人畜共患病，幾乎能感染所有的溫血?jiǎng)游?，其中豬的感染率是最高的[5]。近幾年來，關(guān)于豬弓形蟲病暴發(fā)的報(bào)道越來越多，在河南、新疆、青海和重慶等地豬弓形蟲病的血清陽(yáng)性率都很高[6-9]，對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。弓形蟲有5種不同形態(tài)的生活史，其中速殖子和卵囊是其感染形態(tài)，速殖子可以經(jīng)過胎盤從母體傳播到胎兒身上，使胎兒獲得先天性感染，同時(shí)速殖子也可以在貓?bào)w內(nèi)配子生殖形成卵囊，卵囊隨糞便排出，經(jīng)消化道或皮膚創(chuàng)口進(jìn)行感染[10-11]。

在肝臟的姬姆薩染色切片和病理切片中都觀察到了弓形蟲的速殖子或滋養(yǎng)體，紅細(xì)胞由于蟲體的存在而變形，再根據(jù)該豬場(chǎng)的發(fā)病情況和病理剖檢可以確診為豬弓形蟲感染。因此，發(fā)病豬臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、前肢外側(cè)有出血斑、耳尖壞死、有的呈犬坐姿勢(shì)和母豬流產(chǎn)或死胎。

圖3 肝細(xì)胞變性、壞死，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞胞漿可見滋養(yǎng)體( HE染色，400×)

圖4 腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死(HE染色，400×)

圖5 淋巴結(jié)出血、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)(HE染色，400×)

圖6 脾臟組織間隙巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量增多(HE染色，400×)

圖7 心肌纖維變性、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)(HE染色，400×)

在肝臟、腎臟和脾臟等病理切片中觀察到中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增多，可能是由于在弓形蟲感染過程中趨化因子信號(hào)通道被激活[12]，增加機(jī)體的抗病能力。弓形蟲進(jìn)入宿主的各臟器或組織細(xì)胞內(nèi)寄生、發(fā)育、增殖和破壞細(xì)胞，蟲體從形成的假囊逸出后又可以侵犯鄰近的細(xì)胞，如此反復(fù)破壞，因而導(dǎo)致局部組織炎癥、水腫和彌漫性壞死，擴(kuò)散到周圍組織引起病變，進(jìn)而引起全身性感染，出現(xiàn)典型的間質(zhì)性和小葉性肺炎、壞死性肝炎和出血性淋巴結(jié)炎等。因此，在病理剖檢中見到肝臟、腎臟和脾臟等組織器官表面有出血、壞死灶、水腫和間質(zhì)增生等病理變化。病死豬出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎、小葉性肺炎和心包炎，死亡時(shí)呼吸困難，說明是死于心力衰竭和窒息，這和王金玲等觀察的結(jié)果是一致的[13]。

我們?cè)谛抨?yáng)某豬場(chǎng)自然發(fā)病豬進(jìn)行病理學(xué)診斷時(shí)發(fā)現(xiàn)在姬姆薩染色的肝臟切片上能夠觀察到弓形蟲的速殖子，分別在肺、肝、腎、脾臟、淋巴結(jié)和心臟等組織器官HE染色的切片中發(fā)現(xiàn)弓形蟲滋養(yǎng)體或假囊，表明該場(chǎng)疾病是由豬弓形蟲引起的，引起各組織器官出現(xiàn)出血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞增多等病理變化。

[1] Tolba M M,EI-Taweel H A,Khalil S S,et al.Genotype analysis ofT.gondiistrains associated with human infection in Egypt[J].Parasitol Res,2014,113:1563-1569.

[2] 楊曉偉,趙光偉.重慶地區(qū)不同飼養(yǎng)階段豬弓形蟲感染情況的調(diào)查與分析[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2015,51(2):44-45.

[3] 馮喬婷,王海燕.豬弓形蟲病的病理報(bào)告及其綜合防治[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2011(3):98-99.

[4] 陳耀星.獸醫(yī)組織學(xué)彩色圖譜[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2007:1-3.

[5] 沈 博.我國(guó)部分地區(qū)雞群弓形蟲感染情況調(diào)查[D].江蘇南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.

[6] 溫青娜,郭延華,楊菊鳳,等.河南省豬弓形蟲感染血清學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2015,51(4):44-45.

[7] 陸桂麗,王 文,陳衛(wèi)東,等.新疆部分地區(qū)豬弓形蟲抗體檢測(cè)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，35(7)：125-127.

[8] 金安才仁.青海省稱多縣豬弓形蟲感染血清學(xué)流行病調(diào)查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2015，8:110-111.

[9] 徐 斌,張夏蘭,董春霞,等.重慶地區(qū)豬弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查研究[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2013,34(3):37-40.

[10] 劉 俠,闞松鶴,林 青.弓形蟲病研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2015，36(1):101-105.

[11] Wang L,Chen H,Liu D H,et al.Genotypes and mouse virulence ofToxoplasmagondiiisolates from animals and humans in China[J].PLoS One,2013,8(1):e53483.

[12] He Jun Jun,Ma Jun,Song Hui Qun,et al.Transcriptomic analysis of global changes in cytokine expression in mouse spleens following acuteToxoplasmagondillinfection[J].Parasitol Res,2016,115:703-712.

[13] 王金玲,丁玉林,王鳳龍,等.一起豬弓形蟲病自然病例的病理學(xué)觀察[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2012,33(1):1-5.

Histopathologic Observation in Pigs Natually Infected withToxoplasma

MA Wen-cai,GUO Kang-kang,ZHANG Wei-min

(CollegeofVeterinaryMedicine,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi,712100,China)

In order to explore the effect of porcine toxoplasmosis on histological structures of organs,the histopathologic diagnosis was made in naturally infected pigs in a pig farm of Xinyang.The liver tissue was collected,and fixed with formalin,and dyed by Giemsa staining.Paraffin imbedding and HE staining were used to these collected tissues, like lungs,liver,kidney,lymph nodes and heart,and then were observed under optical microscope.It can be diagnosed that the disease was caused byToxoplasma, and the tachyzoites were observed in liver section dyed with Giemsa staining, and the tachyzoites or pseudocysts were found in organ tissue slices of lungs,liver,kidney,spleen,lymph nodes.The pathologic lesions like hemorrhage,inflammatory cell infiltration and the increase of eosinophilic granulocytes and neutrophilic granulocytes in tissues and organs were also observed.

pig；Toxoplasmagondii；diagnosis;histopathology

2016-06-13

陜西省重點(diǎn)農(nóng)業(yè)科技示范推廣項(xiàng)目(ZDKJ-2014-33)

馬文才(1991-)，男，河南淮陽(yáng)人，碩士研究生，主要從事獸醫(yī)臨床工作。*通訊作者

S852.723;S852.31

B

1007-5038(2017)01-0128-04