兩種糞便隱血檢測方法的臨床應用探討

史懷娣

摘要：目的 探討鄰聯(lián)甲苯胺法（化學法）與單克隆膠體金檢測法（免疫法）檢測糞便隱血的臨床應用價值。方法 選取本院2015年4月～2016年3月糞便標本100例，分別采用鄰聯(lián)甲苯胺法與單克隆膠體金檢測法進行糞便隱血檢測。2種方法均參考試劑說明書并按照全國標準操作規(guī)程操作。結(jié)果 100例糞便標本中鄰聯(lián)甲苯胺法檢出陽性結(jié)果86例（86%），單克隆膠體金檢測法檢出陽性結(jié)果68例（68%），二者一致性符合率為76%，有24% 的不符合率。結(jié)論 鄰聯(lián)甲苯胺法（化學法）特異性差，敏感性高，容易出現(xiàn)假陽性，而單克隆膠體金檢測法（免疫法）雖然特異性高，但對上消化道出血的標本容易出現(xiàn)假陰性，兩種檢測方法各有優(yōu)缺點，在臨床工作中單獨使用鄰聯(lián)甲苯胺法或單克隆膠體金檢測法都可能因其方法學的限制而產(chǎn)生一定的假陰性（漏檢）或假陽性（誤診），如果一份標本同時使用這兩種方法檢測，能有效避免假陰性和假陽性，提高準確性，避免誤診和漏診，更具有臨床應用價值。

關(guān)鍵詞：糞便潛血；鄰聯(lián)甲苯胺；單克隆膠體金

糞便隱血試驗主要用于消化道慢性出血、消化道腫瘤的篩檢。目前，消化道腫瘤的發(fā)病率呈上升趨勢，危害著人類的健康，而臨床上仍缺乏有效的早期診斷手段[1]。目前，臨床上應用的糞便隱血檢測的方法主要有化學法和免疫法，化學法種類較多，如鄰聯(lián)甲苯胺法、愈創(chuàng)木酯法等?；瘜W法特異性 差[1]，且受飲食和藥物的影響，極易出現(xiàn)假陽性，干擾臨床的診斷。免疫法目前應用最多的為單克隆膠體金檢測法，但在某些情況下也會出現(xiàn)假陰性。故筆者通過實驗探討2種糞便隱血檢測方法的臨床應用，為進一步說明在臨床工作中如果2種方法同時使用，取長補短，才能得出更準確的試驗結(jié)果，提高消化道腫瘤的早期檢出率及對治療效果提供更有意義的臨床價值。

1 資料與方法

1.1糞便標本來源 選取本院2015年4月～2016年3月100例無重復門診和住院患者的新鮮糞便（糞便從采集到檢測時間不超過1 h），患者年齡在12～91歲，平均年齡（45±12）歲，其中女59例（非月經(jīng)期），男41例。

1.2試劑

1.2.1單克隆膠體金檢測法 采用艾博生物醫(yī)藥（杭州）有限公司生產(chǎn)的膠體金檢測試紙，規(guī)格為50人份/盒。

1.2.2鄰聯(lián)甲苯胺法 10g/L鄰聯(lián)甲苯胺冰醋酸溶液和3%過氧化氫。10 g/L鄰聯(lián)甲苯胺冰醋酸溶液[2]：取鄰聯(lián)甲苯胺1 g，溶于冰乙酸及無水乙醇各50 ml的混合液中，置棕色瓶內(nèi)，保存于4℃冰箱，可用2～12 w，若有變色，應重新配置。

1.3方法

1.3.1單克隆膠體金檢測法操作方法參見試劑說明書 將樣品杯標記后放于水平操作臺面上，加入約0.5 ml的蒸餾水（或去離子水），用采樣棒挑取糞便10～50 mg（相當于綠豆粒大小）放入杯內(nèi)，并混勻待用（與蒸餾水混勻的糞便樣本應在1 h內(nèi)盡快檢測）。然后從原包裝鋁箔袋中取出試劑，將試劑箭頭所指的一端浸入樣本溶液中，注意：樣本液面不能超過試劑條的“MAX”標記線。等待紫紅色條帶出現(xiàn)，檢測結(jié)果應在5 min時判讀，10 min后判讀結(jié)果無效。

1.3.2鄰聯(lián)甲苯胺法操作方法[3] 用小木棍挑取少量糞便，涂在消毒棉簽或白瓷板上，滴加10 g/L鄰聯(lián)甲苯胺冰醋酸溶液2～3滴與糞便上，再滴加3%過氧化氫2～3滴，立即觀察結(jié)果，在2 min內(nèi)顯藍色為陽性。

1.4檢測原理

1.4.1單克隆膠體金檢測法的原理 單克隆膠體金采用雙抗夾心法，試劑含有被事先固定于膜上檢測區(qū)（T）的抗人血紅蛋白抗體和質(zhì)控區(qū)（C）的相應抗體，以及固定于標記墊上的抗人血紅蛋白抗體。

1.4.2鄰聯(lián)甲苯胺法的原理 血紅蛋白中的亞鐵血紅素有類似過氧化物酶活性，能催化過氧化氫作為電子受體使色原（如鄰聯(lián)甲苯胺）氧化而顯色（如鄰聯(lián)甲苯胺氧化成鄰甲偶氮苯顯色藍色）。

2 結(jié)果

選取的100例新鮮糞便標本采用鄰聯(lián)甲苯胺法與單克隆膠體檢測法同時進行檢測，鄰聯(lián)甲苯胺法檢出陽性結(jié)果86例（86%），單克隆膠體金檢測法檢出陽性結(jié)果68例（68%），如果以單克隆膠體金檢測法為標準，則鄰聯(lián)甲苯胺法假陽性率為18%[（86-68）/100]。二者一致性符合率為76%，有24%的不符合率。統(tǒng)計兩種檢測方法符合率的情況，見表1。

3 討論

通過上面結(jié)果可以看出鄰聯(lián)甲苯胺法（化學法）的陽性率明顯高于單克隆膠體金檢測法（免疫法），如果以單克隆膠體金檢測法為標準，則鄰聯(lián)甲苯胺法假陽性率為18%[（86-68）/100]。

鄰聯(lián)甲苯胺法（化學法）根據(jù)其原理可以看出，如果糞便中含有一定量的除人血紅蛋白外的其他具有類似過氧化物酶活性的物質(zhì)（如動物血、魚、肝臟、富含氧化酶的葉綠蔬菜等或服用鐵劑、氧化性藥物等），或糞便標本被具有氧化性物質(zhì)污染時，糞便隱血試驗即可出現(xiàn)假陽性，如果糞便中含有大量的還原物質(zhì)（如大量維生素C），抵消了人血紅蛋白的類過氧化物酶活性作用，糞便隱血即可出現(xiàn)假陰性。故，使用鄰聯(lián)甲苯胺法（化學法）檢測糞便隱血試驗需對患者飲食有一定限制，才能盡可能避免假陽性，避免誤診。但是，鄰聯(lián)甲苯胺法（化學法）結(jié)果判讀不但能定性還能半定量報告結(jié)果，更有助于臨床療效觀察。

單克隆膠體金檢測法（免疫法）根據(jù)其原理可以看出，①特異性高，其檢測只針對人血紅蛋白，結(jié)果不受動物血紅蛋白和辣根過氧化物酶等具有氧化性的物質(zhì)、大量維生素C等還原類物質(zhì)干擾，故檢測前患者不必限制飲食。②靈敏度[1]高血紅蛋白達到200 mg/L或0.03 mg/g糞便時即可呈陽性。但在某些情況下，單克隆膠體金檢測法（免疫法）會出現(xiàn)假陰性的結(jié)果，如消化道大量出血，糞便血紅蛋白濃度過高，即抗原過剩（后帶現(xiàn)象）、上消化道出血，血紅蛋白被消化道的某些酶降解變性，喪失原有的免疫原性、糞便留取時間較長，血紅蛋白被細菌分解、試劑上的單克隆抗體與糞便中的血紅蛋白抗原不匹配。當使用單克隆膠體金檢測法（免疫法）時，對糞便標本稀釋后在測定，可大大降低“后帶現(xiàn)象”引起的假陰性。單克隆膠體金檢測法（免疫法）結(jié)果判讀只能定性不能半定量。

一般情況下，上消化道出血時鄰聯(lián)甲苯胺法（化學法）比單克隆膠體金檢測法（免疫法）陽性檢出率高，下消化道出血時單克隆膠體金檢測法（免疫法）比鄰聯(lián)甲苯胺法（化學法）靈敏度高[3]。

糞便隱血檢測對消化道出血的診斷具有重要的價值，現(xiàn)常作為消化道腫瘤早期篩檢的一個重要指標，如果常規(guī)體檢中加入糞便隱血試驗，一些結(jié)腸癌和直腸癌在早期就可以被檢出，從而可以提高這些癌癥的治愈率[4]，消化道潰瘍病性出血糞便隱血試驗為間斷性陽性，而消化道惡性腫瘤性出血糞便隱血試驗為持續(xù)性陽性，以此可作為良性、惡性出血的鑒別診斷。

綜上所述：既然糞便隱血試驗如此重要，我們更應該努力保證結(jié)果的快速、準確、可靠，筆者經(jīng)過本次數(shù)據(jù)分析和探討，總結(jié)出鄰聯(lián)甲苯胺法（化學法）和單克隆膠體金檢測法（免疫法）聯(lián)合應用，取長補短，能夠避免一些假陽性和假陰性，大大提高了消化道出血的檢出率和準確性，避免了漏診或誤診，且聯(lián)合應用后報告結(jié)果既能定性又能半定量，更有助于臨床療效觀察。

參考文獻：

[1]劉成玉，羅春麗，吳曉蔓，等.臨床檢驗基礎(chǔ)[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2012：196-199.

[2]吳曉蔓，粟軍，王忠英，等.臨床檢驗基礎(chǔ)實驗指導[M].4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：129-131.

[3]尚紅，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2014：176-177.

[4] 張文迎，吳娟，蔡小華.大便潛血試驗免疫法測定血紅蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白的臨床應用[J].醫(yī)藥前沿，2013，21（32）：132-133.

編輯/張燕