不同廠家豬瘟疫苗免疫效果比對試驗

李安鵬,趙 力,張智鵬,3

(1.漢中市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,陜西漢中 723000; 2.漢中市動物疾病預(yù)防控制中心,陜西漢中 723000; 3.西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院,陜西楊凌 712100)

不同廠家豬瘟疫苗免疫效果比對試驗

李安鵬1,趙 力2,張智鵬2,3

(1.漢中市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,陜西漢中 723000; 2.漢中市動物疾病預(yù)防控制中心,陜西漢中 723000; 3.西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院,陜西楊凌 712100)

為準(zhǔn)確掌握漢中市規(guī)模豬場使用量最大的兩種豬瘟疫苗在實際應(yīng)用中的免疫效果，在規(guī)模豬場選擇4窩體質(zhì)健康、體重接近的仔豬，隨機(jī)分成4組，每組10頭，分別接種豬瘟脾淋苗和細(xì)胞苗，采用IHA 方法檢測免疫接種前后抗體效價。結(jié)果顯示，用標(biāo)準(zhǔn)劑量免疫后，2種疫苗都不能對豬群產(chǎn)生保護(hù)作用，用2頭份劑量在仔豬30日齡首免，首免后28 d加強(qiáng)免疫，2種疫苗都能對豬群產(chǎn)生很好的保護(hù)作用，能滿足預(yù)防豬瘟疫病的需要，同時豬瘟脾淋苗免疫后刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體的速度快，可用于緊急免疫接種。廣大養(yǎng)殖戶可以根據(jù)實際情況，科學(xué)合理選擇使用豬瘟疫苗。

豬瘟；疫苗；免疫效果

豬瘟(Classical swine fever,CSF)是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一種高度接觸性、出血性和致死性傳染病，主要以急性發(fā)病、高稽留熱、細(xì)小血管壁變性、全身性小點(diǎn)狀出血及脾臟邊緣梗死為特征[1]。豬瘟給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，目前仍是養(yǎng)豬生產(chǎn)中首要防控的疫病[2]，世界動物衛(wèi)生組織(Office International des Epizooties，OIE)將其列為必須報告的動物疫病，我國將其列為一類動物疫病[3]。

在實際調(diào)研中發(fā)現(xiàn)，部分養(yǎng)殖戶在政府免費(fèi)發(fā)放的豬瘟疫苗和經(jīng)銷商宣傳的高價疫苗之間不知如何選擇，甚至有部分養(yǎng)殖戶為了追求高的抗體效價，給1頭豬使用4頭份～5頭份疫苗進(jìn)行免疫接種，在一定程度上造成了疫苗的浪費(fèi)和養(yǎng)殖成本的增加。為此，本試驗選取了規(guī)模養(yǎng)殖場使用量較大的豬瘟脾淋苗和豬瘟細(xì)胞苗進(jìn)行疫苗的免疫接種試驗，比較2種疫苗在實際應(yīng)用中的免疫效果，為廣大養(yǎng)殖戶科學(xué)合理地選用豬瘟疫苗提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗用豬 選擇基礎(chǔ)免疫較好的勉縣良種場開展試驗研究，選取40頭保育仔豬，檢測母源抗體合格后于30日齡開始試驗，試驗豬品種均為杜×長×大商品豬。

1.1.2 試驗用疫苗 采用漢中市規(guī)模豬場使用量最大的2種豬瘟疫苗進(jìn)行免疫接種效果對比。分別是政府免費(fèi)發(fā)放的豬瘟脾淋疫苗，由四川某生物制藥有限公司生產(chǎn)(以后簡稱脾淋苗)，每頭份脾淋苗不少于組織毒0.01 g，生產(chǎn)批號：2014006-1；另一種是規(guī)模場自行采購使用的豬瘟細(xì)胞疫苗，由浙江某生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)(以后簡稱細(xì)胞苗)，每頭份豬瘟活病毒含量≥7 500 RID，生產(chǎn)批號：2014005。

1.1.3 試劑 豬瘟正向間接血凝抑制檢測試劑盒，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號2014113005。

1.2 方法

1.2.1 試驗分組 選擇4窩體質(zhì)健康、體重接近的仔豬，隨機(jī)分成4組，每組10頭，具體分組見表1。常規(guī)飼養(yǎng)管理，疫苗免疫的其他程序不變(表1)。

1.2.2 免疫注射 4個試驗組在30日齡進(jìn)行首免，首免后28 d進(jìn)行二免。

1.2.3 樣品采集 試驗過程中共采血6次，第1次采血在首免當(dāng)天，主要是監(jiān)測仔豬的母源抗體情況；后5次采血分別在首免后14、21、28 d和二免后21 d、45 d進(jìn)行。經(jīng)前腔靜脈逐頭采血，按常規(guī)方法分離保存血清。

1.2.4 結(jié)果判定 采用正向間接血凝試驗(indirect hemagglutination test,IHA)檢測抗體效價，按農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)，正向間接血凝試驗(IHA)抗體效價≥1∶32(即51og2)為免疫合格，群體合格率≥70%為合格。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，抗體效價用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

表1 試驗分組

2 結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果

免疫注射前對各組仔豬的母源抗體水平進(jìn)行了檢測，通過F檢驗發(fā)現(xiàn)，4個試驗組仔豬的母源抗體水平差異不顯著(P>0.05)，說明4個試驗組仔豬的母源抗體水平較一致，對各試驗組豬瘟抗體的產(chǎn)生影響不大(表2)。

對4個試驗組仔豬免疫注射后不同時間的抗體檢測結(jié)果進(jìn)行F檢驗，發(fā)現(xiàn)首免后14、21、28 d，4個組的免疫抗體水平差異不顯著(P>0.05)；在二免后21 d，4個組的免疫抗體水平差異顯著(P<0.05)，其中脾淋苗A組和脾淋苗B組的抗體水平差異顯著(P<0.05)，細(xì)胞苗C組和細(xì)胞苗D組的免疫抗體水平差異不顯著(P>0.05)，脾淋苗B組和細(xì)胞苗D組的免疫抗體水平差異不顯著(P>0.05)；二免后45 d，4個組的免疫抗體水平差異極顯著(P<0.01) ，其中脾淋苗A組和脾淋苗B組的免疫抗體水平差異極顯著(P<0.01)，細(xì)胞苗C組和細(xì)胞苗D組的免疫抗體水平差異極顯著(P<0.01)，脾淋苗B組和細(xì)胞苗D組的免疫抗體水平差異不顯著(P>0.05) (表2)。

表2 各組免疫抗體檢測結(jié)果

注：同列肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)，相同或無肩標(biāo)表示差異不顯著(P>0.05)。

Note:Values with different small letters in same column indicate significant difference(P<0.05),with different capital letters indicate extremely significant difference(P<0.01),and with same letters or no letter indicate no significant difference (P>0.05).

2.2 免疫抗體合格率

2.2.1 同種疫苗對比 免疫抗體檢測結(jié)果見表3。由表3可知，脾淋苗A組和脾淋苗B組比較，在首免后14、21、28 d，加大免疫劑量的脾淋苗B組免疫抗體合格率均稍高于脾淋苗A組，但都未達(dá)到70%的保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)；在二免后21 d和45 d，脾淋苗B組免疫抗體合格率均為100%，而脾淋苗A組免疫抗體合格率為70%和60%。細(xì)胞苗C組和細(xì)胞苗D組相比，在首免后14、21、28 d，兩組的免疫抗體合格率差異不明顯，且均未達(dá)到70%的保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)；在二免后21 d，標(biāo)準(zhǔn)劑量的細(xì)胞苗C組免疫抗體合格率為60%，加倍劑量的細(xì)胞苗D組免疫抗體合格率為80%，相差20個百分點(diǎn)；二免后45 d，標(biāo)準(zhǔn)劑量的細(xì)胞苗C組免疫抗體合格率為50%，加倍劑量的細(xì)胞苗D組免疫抗體合格率為90%，相差40個百分點(diǎn)。

2.2.2 不同種疫苗對比 免疫抗體檢測結(jié)果見表3。脾淋苗A組和細(xì)胞苗C組比較，在首免后14、21、28 d，兩組的免疫抗體合格率均未達(dá)到70%的保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)；在二免后21 d，脾淋苗A組的免疫抗體合格率為70%，細(xì)胞苗C組的免疫抗體合格率為60%；在二免后45 d，脾淋苗A組的免疫抗體合格率已經(jīng)下降到60%，細(xì)胞苗C組的免疫抗體合格率為50%；脾淋苗B組和細(xì)胞苗D組相比，在首免后14、21、28 d，兩組的免疫抗體合格率差異不大，在二免后21 d和二免后45 d，脾淋苗B組的免疫抗體合格率均為100%，細(xì)胞苗D組的免疫抗體合格率分別為80%和90%。

表3 各組免疫抗體合格率統(tǒng)計表

3 討論

在試驗開始前，對免疫注射前仔豬進(jìn)行了母源抗體水平檢測，挑選出母源抗體一致且效價處于在4 log2～6 log2之間的仔豬，消除了母源抗體的干擾因素，又回避了仔豬免疫空白期，對試驗的順利開展是十分必要的。據(jù)文獻(xiàn)報道[4-8]，當(dāng)母源抗體中和效價大于6 log2時再進(jìn)行疫苗接種，會明顯抑制機(jī)體誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫和體液免疫，延長排毒時間。因此，規(guī)?；i場必須對基礎(chǔ)母豬群的免疫狀態(tài)進(jìn)行監(jiān)測，確定母源抗體對新生仔豬的保護(hù)程度，以便制定與實施對仔豬的免疫程序。

免疫試驗結(jié)果表明，2種疫苗標(biāo)準(zhǔn)劑量免疫后，都不能對豬群產(chǎn)生保護(hù)作用。加倍劑量免疫后，在首免后14、21、28 d，免疫抗體合格率均未達(dá)到70%，在二免后21 d和45 d，豬瘟脾淋苗和細(xì)胞苗的免疫抗體合格率在分別為100%、100%和80%、90%，可見2種疫苗都能對豬群產(chǎn)生很好的保護(hù)作用。相關(guān)研究表明[9-12]，仔豬通過吃初乳獲得母源抗體來抵抗CSFV，隨著日齡增加，母源抗體逐步降低，其保護(hù)力也下降。對有母源抗體的仔豬攻毒，能導(dǎo)致CSFV復(fù)制，母源抗體越高，其抑制機(jī)體的主動免疫能力越強(qiáng)，但母源中和抗體高低與保護(hù)率無直接關(guān)系，增大免疫劑量可降低這種抑制作用，或進(jìn)行第2次接種，抗體滴度會升高。所以，為了獲得較好的豬瘟免疫效果，對豬群進(jìn)行加強(qiáng)免疫非常有必要。

從免疫抗體水平和合格率分析來看，在二免后21 d，脾淋苗B組的平均抗體效價為7.5 log2，免疫抗體合格率為100%；細(xì)胞苗D組的平均抗體效價為6.2 log2，免疫抗體合格率達(dá)到80%。在二免后45 d，脾淋苗B組的平均抗體效價為8.4 log2，免疫抗體合格率仍維持在100%；細(xì)胞苗D的平均抗體效價為7.3 log2，合格率上升到90%。結(jié)果表明，豬瘟脾淋苗在刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫抗體的速度明顯優(yōu)于細(xì)胞苗。分析原因，主要是因為豬瘟脾淋苗中含有某些免疫增強(qiáng)因子，所以刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體速度比較快，免疫效果也比較確實。相關(guān)資料表明[13]，豬瘟兔化弱毒脾淋苗免疫豬具有高比例的CD3+和CD4+T淋巴細(xì)胞亞群，高而穩(wěn)定的CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值，高活力的淋巴細(xì)胞和高水平的IFN-γ和IL-3，這些免疫增強(qiáng)因子在抗病毒和抗感染免疫中起著重要作用，這也是豬瘟脾淋苗廣泛用于緊急預(yù)防接種的理論依據(jù)。

豬瘟脾淋苗是用兔化弱毒株接種家兔，收獲感染家兔的脾臟和淋巴結(jié)組織，制成乳劑，冷凍真空干燥而制成，按照每頭份脾淋苗不少于組織毒0.01 g的標(biāo)準(zhǔn)，平均1只家兔僅能制出300頭份～400頭份豬瘟脾淋疫苗，制苗產(chǎn)量小，生產(chǎn)成本高，且含毒量不統(tǒng)一。豬瘟細(xì)胞苗是豬瘟兔化弱毒株接種易感細(xì)胞培養(yǎng)，收獲細(xì)胞培養(yǎng)物而制成，生產(chǎn)成本低，且可以在短時間內(nèi)大批量生產(chǎn)。按照目前國內(nèi)的生豬存欄量來看，選用豬瘟脾淋疫苗來免疫，所需家兔的養(yǎng)殖量巨大。因此，在全民建設(shè)資源節(jié)約型和環(huán)境友好型社會的大背景下，建議廣大養(yǎng)殖戶合理選用疫苗。

綜合分析認(rèn)為，豬瘟脾淋苗和細(xì)胞苗，用標(biāo)準(zhǔn)劑量免疫后，都不能對豬群產(chǎn)生保護(hù)作用。用2頭份劑量在仔豬30日齡首免，首免后28 d加強(qiáng)免疫，2種疫苗都能對豬群產(chǎn)生很好的保護(hù)作用，能滿足預(yù)防豬瘟的需要，同時豬瘟脾淋苗免疫后刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體的速度快，可用于緊急免疫接種。另外規(guī)?；i場必須對基礎(chǔ)母豬群的免疫狀態(tài)進(jìn)行監(jiān)測，確定母源抗體對新生仔豬的保護(hù)程度，以便制定與實施仔豬的免疫程序。

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Comparative Experiments of Immune Effects of Classical Swine Fever Vaccine from Different Manufacturers

LI An-peng1,ZHAO Li2,ZHANG Zhi-peng2,3

(1.HanzhongAnimalHygienieSupervisionInstitute,Hanzhong,Shaanxi,723000,China; 2.HanzhongAnimalDiseasePreventionandControlCenter,Hanzhong,Shaanxi,723000,China; 3.CollegeofAnimalScienceandTechnology,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi,712100,China)

To accurately grasp the immune effects of two kinds of classical swine fever vaccine that were most used in large-scale pig farms in practice,we chose 4 healthy litters of piglets with similar weight.Then,the piglets,divided into 4 groups randomly,10 pigs in each group,were inoculated with the spleen-lymphocyte vaccine and cell vaccine respectively.Before and after immunization,the indirect hemagglutination test (IHA) method was used to detect the antibody titer.The results showed that after immunization,neither vaccine had protective effects on swine with standard dose.However,two vaccines both had good protective effects on swine when the first immunization of each piglet was on 30 day-age with 2 doses and a booster was on 28 d after first immunization,which can satisfy the prevention of classical swine fever.In addition, the spleen vaccine,stimulating organism to produce antibodies quickly,can be used for emergency vaccination.The farmers can choose classical swine fever vaccine scientifically and reasonably according to the actual situation.

Classical swine fever;vaccine; immune effect

2016-10-21

漢中市農(nóng)業(yè)倍增工程項目(201450)

李安鵬(1980-)，男，陜西城固人，高級獸醫(yī)師，主要從事動物疫病防控及動物衛(wèi)生監(jiān)督執(zhí)法工作。

S852.5

B

1007-5038(2017)01-0132-04