老年肝硬化患者血清一氧化氮、腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-1的水平變化及意義

欒 梅 欒 博 趙麗娟 寧華漢

(錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院，遼寧 錦州 121000)

老年肝硬化患者血清一氧化氮、腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-1的水平變化及意義

欒 梅 欒 博 趙麗娟 寧華漢1

(錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院，遼寧 錦州 121000)

目的 觀察老年肝硬化患者血清一氧化氮(NO)、腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細(xì)胞介素(IL)-1的水平及意義。方法 采用硝酸還原酶、放射免疫法、酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法分別測(cè)定58例老年肝硬化患者和30例同期在院進(jìn)行健康體檢的人群(正常組)血清NO、TNF-α、IL-1水平檢測(cè)。結(jié)果 肝硬化組血清NO、TNF-α、IL-1水平均明顯高于正常組(P<0.05)，肝硬化組隨著病變加重血清NO、TNF-α、IL-1水平呈顯著增高。結(jié)論 血清NO、TNF-α、IL-1水平可作為判斷老年肝硬化肝功能損害的血清學(xué)指標(biāo)之一，NO水平的增高可能與肝硬化腹水形成密切相關(guān)。

肝硬化；一氧化氮；腫瘤壞死因子-α；白細(xì)胞介素-1

肝硬化是臨床常見(jiàn)的慢性進(jìn)行性肝病，由一種或多種病因長(zhǎng)期或反復(fù)作用形成的彌漫性、纖維性病變，是我國(guó)老年人的常見(jiàn)疾病和主要死亡病因之一〔1〕。本研究中通過(guò)測(cè)定及分析老年肝硬化患者血清一氧化氮(NO)、腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細(xì)胞介素(IL)-1濃度水平變化，了解NO、TNF-α、IL-1水平的增高與肝硬化腹水形成的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月至2013年11月遼寧醫(yī)學(xué)院附屬三醫(yī)院住院患者及同期在我院進(jìn)行健康體檢的人群。肝硬化患者均符合2000年9月西安中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)肝病分會(huì)聯(lián)合修訂的標(biāo)準(zhǔn)〔2〕。其中58例肝硬化患者中男33例，女25例，平均年齡(65.25±3.13)歲。上述所有入選對(duì)象均無(wú)心臟、腎臟、內(nèi)分泌、血液、風(fēng)濕病、呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)與營(yíng)養(yǎng)不良等疾病。采用Child-Pugh分級(jí)：A級(jí)25例，B級(jí)20例，C級(jí)13例，另以隨機(jī)選擇30例健康體檢的人群設(shè)為正常組，男15例，女15例，平均年齡(46.17±3.43)歲。均無(wú)肝病史，肝功能檢測(cè)正常，乙肝及丙肝病毒標(biāo)志物檢測(cè)均為陰性且無(wú)上述排除標(biāo)準(zhǔn)所列疾病。各組人員年齡、性別比較均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 受試者均于早晨7時(shí)空腹抽取肘靜脈血4 ml，置于試管中離心(3 000 r/min，15 min)，分離血清，用凍存管置于-20℃冰箱中保存。

1.2.2 試劑 NO含量測(cè)定采用硝酸還原酶法。試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，TNF-α水平測(cè)定采用放射免疫法，IL-1水平測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法，試劑盒由上海森雄公司提供。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 不同Child-Pugh分級(jí)患者血清NO、TNF-α、IL-1水平比較C級(jí)患者血清NO、TNF-α、IL-1水平高于A級(jí)及B級(jí)患者，B級(jí)患者高于A級(jí)患者(均P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同Child-Pugh分級(jí)患者血清NO、TNF-α、 IL-1水平比較

與正常組比較：1)P<0.05；與A級(jí)組比較：2)P<0.05；與B級(jí)組比較：3)P<0.05

2.2 肝硬化伴腹水組與無(wú)腹水組患者血清NO、TNF-α、IL-1水平比較 肝硬化伴腹水組患者血清NO、TNF-α、IL-1水平明顯高于無(wú)腹水組(均P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 肝硬化伴腹水組與肝硬化無(wú)腹水組患者血清中NO、 TNF-α、IL-1濃度比較

與無(wú)腹水組比較：1)P<0.05；與少量腹水組比較：2)P<0.05

3 討 論

內(nèi)生性NO由NO合酶(NOS)催化左旋-精氨酸(L-Arg)與氧分子經(jīng)多步氧化還原反應(yīng)產(chǎn)生的〔3〕。NO是一種活性很強(qiáng)的無(wú)機(jī)自由基氣體，帶有不成對(duì)電子，其化學(xué)性質(zhì)極不穩(wěn)定，體內(nèi)T1/2僅3～5 s，難以直接測(cè)定〔2〕，NO呈脂溶性，容易通過(guò)生物膜，具有氧化還原性，NO一方面具有血管舒張作用改善肝臟微循環(huán)，抵抗血小板聚集，殺滅細(xì)菌、病毒等病原微生物等作用保護(hù)肝細(xì)胞；另一方面，NO的大量產(chǎn)生，可通過(guò)其細(xì)胞毒作用損傷正常的肝組織，通過(guò)免疫抑制作用，導(dǎo)致肝硬化，甚至發(fā)生肝細(xì)胞惡變。肝細(xì)胞的狀態(tài)，NO濃度及其所處環(huán)境是決定NO產(chǎn)生有利或有害作用關(guān)鍵。

TNF-α主要由活化的T淋巴細(xì)胞及自然殺傷(NK)細(xì)胞產(chǎn)生，是細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中一種具有多種生物效應(yīng)的重要生理炎性介質(zhì)，在肝臟的壞死性炎癥、纖維形成、發(fā)展為肝硬化門(mén)脈高壓的過(guò)程中都有著重要的作用〔4〕。IL-1是一種重要的免疫調(diào)節(jié)因子，它參與神經(jīng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、機(jī)體炎癥反應(yīng)以及抗腫瘤生理過(guò)程，主要在細(xì)胞免疫激活中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。

本研究結(jié)果顯示肝硬化患者Child分級(jí)增加血清NO水平明顯高于正常組，其機(jī)制可能是：NO主要維持一些正常的生理功能如血管的舒長(zhǎng)和神經(jīng)信息的傳遞等，機(jī)體受炎癥或腫瘤刺激時(shí)，內(nèi)毒素、病毒及多種細(xì)胞因子，如TNF-α、IL-1、干擾素(INF)等可誘導(dǎo)合成分泌大量的NO〔5，6〕，可見(jiàn)肝硬化NO含量的測(cè)定對(duì)肝硬化的診斷、治療及預(yù)后的評(píng)價(jià)具有一定的參考價(jià)值。本文顯示TNF-α水平明顯高于正常組，可能與肝硬化患者腸黏膜滲透性增高、肝臟清除劑滅活內(nèi)毒素功能降低、門(mén)脈分流等原因?qū)е卵獫{內(nèi)毒素升高，內(nèi)毒素血癥能促進(jìn)炎性因子的合成，是誘導(dǎo)TNF-α產(chǎn)生的最有效物質(zhì)〔6〕。此外，可能與肝纖維化的損傷和修復(fù)過(guò)程中，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞參與炎性反應(yīng)，產(chǎn)生大量TNF-α有關(guān)。肝硬化患者體內(nèi)NO增多與TNF-α誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞NO合成有關(guān)，TNF-α可使NF-κB活化以傳遞各種信息進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，誘導(dǎo)NOS合成，NO合成增加，從而降低全身血管阻力，引起周?chē)軘U(kuò)張，引起肝硬化鈉水潴留，腹水形成。TNF-α在肝臟內(nèi)可增加肝內(nèi)皮細(xì)胞NOS的抑制物而增加肝內(nèi)血管阻力，產(chǎn)生門(mén)脈高壓〔4〕。TNF-α升高與受損的肝臟對(duì)細(xì)胞因子的清除減少有關(guān)。IL-1隨著肝硬化病情的加重血中含量增加，提示IL-1隨著肝損害程度加重，炎癥過(guò)程不斷積累，炎癥因子逐漸升高。其機(jī)制可能與NO合成增多，加重缺氧、缺血、細(xì)胞變性壞死，并誘發(fā)炎癥過(guò)程的啟動(dòng)、進(jìn)展有關(guān)。本研究表明肝硬化患者血清NO的增多與TNF-α 、IL-1的含量呈正上升趨勢(shì)〔7～9〕。

本研究結(jié)果提示肝硬化時(shí)，患者體內(nèi)NO等血管活性物質(zhì)增加，誘發(fā)內(nèi)臟血管擴(kuò)張，動(dòng)脈充盈不足，不僅直接擴(kuò)張內(nèi)臟血管，且引起周?chē)鷦?dòng)脈擴(kuò)張，并抵抗內(nèi)源性和外源性縮血管物質(zhì)作用，進(jìn)一步降低血管平滑肌的緊張性，由于內(nèi)臟血流增加和外周血管擴(kuò)張，使體循環(huán)有效容量不足，排出減少，導(dǎo)致高動(dòng)力循環(huán)狀態(tài)，門(mén)脈高壓，鈉水潴留，進(jìn)一步加重腹水和并發(fā)癥的發(fā)生。有研究表明，NO促進(jìn)肝硬化患者門(mén)脈血流動(dòng)力學(xué)紊亂〔5〕，致使胃腸淤血，腸源性?xún)?nèi)毒素吸收增加，從而導(dǎo)致炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1等產(chǎn)生增多，刺激誘導(dǎo)型NOS(iNOS)生成增多，合成大量的NO〔10〕。這樣形成惡性循環(huán)，導(dǎo)致一系列病理效應(yīng)。如抑制蛋白質(zhì)合成，促進(jìn)側(cè)支循環(huán)建立和腹水形成，逐漸加重肝臟的損害。

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3 譚璐東，劉亞輝，王英超.己酮可可堿對(duì)肝硬化大鼠體內(nèi)一氧化氮含量的影響〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2012；32(6)：1222-3.

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10 Afzelius P，Bazeghi N，Bie P，etal.Circulating nitric oxide products do not solely reflect nitric oxide release in cirrhosis and portal hypertension〔J〕.Liver Int，2011；31(9)：1381-7.

〔2015-09-02修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢(mèng)園)

遼寧省科技廳自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.201602336)

趙麗娟(1965-)，女，碩士，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事脂肪性肝病診治研究。

欒 梅(1979-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事肝臟疾病臨床與基礎(chǔ)研究。

R575.2

A

1005-9202(2017)03-0656-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.03.059

1 大連醫(yī)科大學(xué)