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    不同培養(yǎng)條件對(duì)瞿麥誘導(dǎo)愈傷組織的影響

    2017-02-23 20:17:12李興桃任佼佼
    南方農(nóng)業(yè)·下旬 2016年8期
    關(guān)鍵詞:瞿麥組織培養(yǎng)光照

    李興桃+任佼佼

    (山西農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院,山西太谷 030801)

    摘 要 試驗(yàn)以瞿麥葉片為材料,通過對(duì)其進(jìn)行不同消毒時(shí)間,不同激素配比濃度和不同光照條件處理,探究瞿麥組織培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)條件。試驗(yàn)結(jié)果表明:酒精浸泡30s、NaClO浸泡15min的處理可以極大降低外植體的污染率和褐化率;MS+1.0mg/L6·BA+0.4 mg/L NAA的培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率最高,為90%;接種后先暗培養(yǎng)25d,然后在光照下進(jìn)行培養(yǎng)的外植體,其愈傷組織比接種后直接在光照條件下培養(yǎng)的外植體要出現(xiàn)的快且生長狀況較好。

    關(guān)鍵詞 瞿麥;組織培養(yǎng);消毒時(shí)間;激素配比濃度;光照

    中圖分類號(hào):S567.239 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B DOI:10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.24.068

    瞿麥(Dianthus superbus L)為石竹科石竹屬多年生草本植物,近年來,由于其花觀賞價(jià)值高,抗性強(qiáng),開始應(yīng)用在園林綠化上。瞿麥的繁殖方式多樣,但傳統(tǒng)繁殖技術(shù)很難在較短的時(shí)間內(nèi)獲得大量性狀整齊的優(yōu)質(zhì)種苗[1]。本試驗(yàn)通過對(duì)瞿麥組培材料進(jìn)行不同的滅菌時(shí)間,激素配比,光照條件的處理,選擇出最佳的培養(yǎng)條件,促進(jìn)優(yōu)良變異品種的開發(fā)利用。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    試驗(yàn)材料為太谷縣窯子頭的野生瞿麥,2014年引種到山西農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)田。

    1.2 方法

    在組織培養(yǎng)過程中,外植體的消毒、培養(yǎng)基激素的配比和接種后的培養(yǎng)條件對(duì)組培成功都有很大的影響[2-3]。這些因素會(huì)導(dǎo)致外植體生理生化狀態(tài)和愈傷組織的改變[4]。

    1.2.1 消毒處理

    取幼嫩的瞿麥葉片作為外植體,用75%的酒精浸泡30s后,再用濃度為0.5%的NaClO分別浸泡12、15、18min,接種后進(jìn)行培養(yǎng)并統(tǒng)計(jì)外植體的污染率、褐化率。

    污染率=(污染的葉片數(shù)/接種的葉片數(shù))×100%

    褐化率=(褐化的葉片數(shù)/接種的葉片數(shù))×100%[5-6]。

    1.2.2 激素處理

    選用MS(4、74g/L)為愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基,在愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行激素NAA和6-BA組合的雙因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)(見表1)。觀察愈傷組織的誘導(dǎo)情況并記錄愈傷組織生長狀況。

    愈傷組織誘導(dǎo)率=(出愈苗數(shù)/接種數(shù))×100%[7-9]

    1.2.3 光照處理

    分別對(duì)培養(yǎng)基(MS+1.0mg/L 6·BA+0.4mg/LNAA)進(jìn)行光照處理和黑暗處理:Ⅰ、接種后直接進(jìn)行光照;Ⅱ、接種后進(jìn)行黑暗處理,25d后給予光照。

    表1 培養(yǎng)基激素濃度配比

    處理組 激素 濃度/(mg/L) 激素 濃度/(mg/L)

    1 6-BA 0 NAA 0

    2 6-BA 0 NAA 0.2

    ③ 6-BA 0 NAA 0.4

    ④ 6-BA 0 NAA 0.6

    ⑤ 6-BA 0.5 NAA 0

    ⑥ 6-BA 0.5 NAA 0.2

    ⑦ 6-BA 0.5 NAA 0.4

    ⑧ 6-BA 0.5 NAA 0.6

    ⑨ 6-BA 1.0 NAA 0

    ⑩ 6-BA 1.0 NAA 0.2

    ? 6-BA 1.0 NAA 0.4

    ? 6-BA 1.0 NAA 0.6

    ? 6-BA 1.5 NAA 0

    ? 6-BA 1.5 NAA 0.2

    ? 6-BA 1.5 NAA 0.4

    ? 6-BA 1.5 NAA 0.6

    2 結(jié)果與分析

    2.1 消毒時(shí)間對(duì)瞿麥葉片污染率和褐化率的影響

    由表2可知,適當(dāng)?shù)难娱L消毒時(shí)間可以在一定程度上降低外植體的污染率,外植體消毒15min比12min污染率下降了16.67%。褐化率和消毒時(shí)間是呈正相關(guān)的,消毒18min比消毒15min褐化率增長了32.22%。由此可見,用0.5%的NaClO浸泡瞿麥葉片15min消毒效果最好。

    表2 不同消毒時(shí)間對(duì)瞿麥葉片污染率和褐化率的影響

    時(shí)間/min 污染率/% 褐化率/%

    12 36.67 17.78

    15 20.00 21.11

    18 16.67 53.33

    2.2 不同激素配比對(duì)瞿麥葉片愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

    愈傷組織體積大,結(jié)構(gòu)疏松且顏色淺的為生長良好;體積小,結(jié)構(gòu)緊密且顏色深的為生長差[7]。本試驗(yàn)中,誘導(dǎo)5d后開始產(chǎn)生愈傷組織,10d后愈傷組織明顯。由表3知,6-BA和NAA對(duì)愈傷組織的生長都起著促進(jìn)作用,1.0mg/L6-BA和0.4mg/L NAA處理下,誘導(dǎo)率最高,愈傷組織的生長狀況最佳。當(dāng)NAA濃度為0.4mg/L,葉片愈傷組織誘導(dǎo)率較其他處理高,由此可見,NAA對(duì)瞿麥葉片愈傷組織的誘導(dǎo)起主要作用。

    表3 不同激素配比對(duì)瞿麥葉片愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

    處理組 誘導(dǎo)率/% 愈傷組織生長情況

    16.67 差

    30.00 差

    ③ 73.33 差

    ④ 60.00 差

    ⑤ 63.33 差

    ⑥ 53.33 良好

    ⑦ 86.67 好

    ⑧ 56.67 良好

    ⑨ 43.33 差

    ⑩ 76.67 良好

    ? 90.00 好

    ? 70.00 好

    ? 50.00 差

    ? 46.67 良好

    ? 80.00 好

    ? 83.33 好

    2.3 不同光照處理對(duì)瞿麥葉片愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

    光照對(duì)植物的細(xì)胞、組織、器官的生長和分化有著至關(guān)重要的作用,光照下愈傷組織極易分化形成維管組織而不能形成大量的愈傷組織,避光培養(yǎng)條件下有利于愈傷組織的積累[10-11]。由表4可知,處理Ⅱ的愈傷組織出現(xiàn)時(shí)間、生長狀況均優(yōu)于處理Ⅰ,且愈傷組織誘導(dǎo)率明顯高于處理Ⅰ。

    表4 不同光照條件對(duì)瞿麥葉片愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

    光照處理 誘導(dǎo)率/% 愈傷生長狀況

    Ⅰ 72 愈傷出現(xiàn)慢,生長狀況較差

    Ⅱ 87 愈傷出現(xiàn)快,生長狀況好

    3 討論

    外植體消毒時(shí)間長短,直接影響到外植體的成活率[12]。本試驗(yàn)中,采用75%酒精消毒30 s,0.5%的NaClO消毒

    15 min,可以達(dá)到較好的消毒效果;當(dāng)0.5%的NaClO處理時(shí)間延長,會(huì)降低外植體的活性,導(dǎo)致死亡率升高。激素的配比對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)有著明顯的影響[13]。本試驗(yàn)中,0.4mg/LNAA和1.0mg/L6-BA條件下,愈傷組織的誘導(dǎo)率最高。由此可見,NAA和6-BA的濃度不宜過高或過低。

    黑暗條件對(duì)愈傷組織的產(chǎn)生有明顯促進(jìn)作用[10],本試驗(yàn)中,外植體先在黑暗條件下培養(yǎng)25d后再給予光照,愈傷組織的誘導(dǎo)率和生長狀況都優(yōu)于直接在光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)。

    參考文獻(xiàn)

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    [3]譚文澄,戴策剛.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].北京:中國林業(yè)出版社,1991.

    [4]曹孜義,劉國民.試用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程[M].蘭州:甘肅科學(xué)技術(shù)出版社,1996.

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    [10]倪德祥.光在植物培養(yǎng)中的調(diào)控作用[J].自然雜志,1986,9(3):35-40.

    [11]文濤,梁莉,曾楊,等.不同光照強(qiáng)度對(duì)虎杖愈傷組織的影響[J].中國中藥雜志,2007,32(13):1277-1280.

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    [13]韓得元.植物生長調(diào)節(jié)劑原理及應(yīng)用[M].北京:科學(xué)技術(shù)出版社,1997.

    (責(zé)任編輯:劉昀)

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