西雙版納地區(qū)熱帶雨林氣候?qū)γ庖呓M化結(jié)果的影響

顧文亞

【摘要】 目的：分析西雙版納地區(qū)熱帶雨林氣候?qū)γ庖呓M化結(jié)果的影響。方法：研究地點(diǎn)定在西雙版納地區(qū)，了解西雙版納地區(qū)的溫度、海拔、大氣壓、水沸點(diǎn)。研究材料分別為鼻咽鱗狀細(xì)胞癌、甲狀腺乳頭狀癌、胃神經(jīng)內(nèi)分泌癌、淋巴結(jié)反應(yīng)性增生，按照規(guī)范的步驟進(jìn)行操作。結(jié)果：修復(fù)時(shí)間20 min時(shí)（此時(shí)間為Dakota公司在其他地區(qū)用的傳統(tǒng)時(shí)間），組織著色，陽(yáng)性結(jié)果不顯著，背景清晰；修復(fù)時(shí)間19 min時(shí)（比傳統(tǒng)時(shí)間少1 min）組織已經(jīng)著色，陽(yáng)性結(jié)果不肯定，背景清晰；修復(fù)時(shí)間21 min時(shí)（比傳統(tǒng)時(shí)間多1 min），組織著色，陽(yáng)性結(jié)果顯著，背景清晰，而且組織無(wú)脫落，修復(fù)時(shí)間22 min時(shí)（比傳統(tǒng)時(shí)間多2 min），組織著色，陽(yáng)性結(jié)果顯著，背景清晰，但組織已部分脫落。結(jié)論：高溫高壓修復(fù)法是一種比較實(shí)用的抗原修復(fù)方法，特別是對(duì)于標(biāo)本數(shù)不是特別多的基層醫(yī)院。只是要根據(jù)本地區(qū)的海拔不同有所不同，要找到適合時(shí)間才能有好的效果。低海拔地區(qū)西雙版納州景洪市就只為21 min，可以推廣運(yùn)用。

【關(guān)鍵詞】 西雙版納地區(qū)； 熱帶雨林氣候； 免疫組化； 影響

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.2.027 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2017）02-0053-02

病理診斷的金標(biāo)準(zhǔn)發(fā)展至今，其輔助手段也隨之得到了良好的發(fā)展，如免疫組化就是最好的輔助手段，但免疫組化很嬌嫩，對(duì)地域的要求因海拔的不同而有所改變，所以要根據(jù)不同的地域控制時(shí)間的長(zhǎng)短，不斷提高其質(zhì)量，使它更好地為診斷服務(wù)[1]。免疫組織化學(xué)技術(shù)的原理是對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些化學(xué)成分進(jìn)行原位的定性、定位或定量研究的技術(shù)[2]。已有研究表明：修復(fù)液的溫度和作用時(shí)間對(duì)修復(fù)效果有決定性的作用，溫度越高修復(fù)時(shí)間越短，在昆明地區(qū)（海拔為1800 m左右）修復(fù)時(shí)間為30 min，但在低海拔地區(qū)西雙版納州景洪市就只為21 min[3]。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)地氣候

本實(shí)驗(yàn)在海拔550 m、大氣壓為94.29 kPa、水沸點(diǎn)97 ℃～98 ℃、西雙版納景洪市進(jìn)行。西雙版納位于北緯21°10'～22°40'，東經(jīng)99°55'～101°50'，最高海拔2429.7 m，最低海拔477 m，相對(duì)高差1952.7 m。是世界上北回歸線附近保存最為完好、面積最大的熱帶雨林。景洪市屬于低海拔（約500 m），年平均氣溫（18 ℃～21 ℃）高，濕潤(rùn)（年降雨1100～1900 mm）的地區(qū)，筆者率先在西雙版納州成功開(kāi)展了第1例免疫組化，并通過(guò)筆者所在科2013年至今開(kāi)展的200多例免疫組化結(jié)果對(duì)照，并與其他地區(qū)進(jìn)行比較。

1.2 材料

10%中性甲醛固定，酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，組織分別為鼻咽鱗狀細(xì)胞癌、甲狀腺乳頭狀癌、胃神經(jīng)內(nèi)分泌癌、淋巴結(jié)反應(yīng)性增生。各蠟塊分別切片5 μm，按照免疫組化步驟（Elivision法，試劑來(lái)源于Dakota公司）。

1.3 免疫組化操作過(guò)程

（1）石蠟涂片脫蠟和水化后，用PBS（PH714）沖洗3次，每次3 min。（2）根據(jù)每一種抗體的要求，對(duì)組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù)。（3）每張涂片加50 μl 3%過(guò)氧化氫溶液，室溫下孵育10 min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。PBS沖洗3次，每次3 min。（4）每張涂片根據(jù)需要加50 μl的第一抗體（如CD20、CD3、CD45RO、CD45RB、TdT，MPO、CD5、CD56、CD79a、CD43、CD5、CD10），室溫下孵育60 min。（5）除去PBS液，每張涂片加50 μl聚合物（polymer enhancer），室溫下孵育20 min，PBS沖洗3次，每次3 min。（6）除去PBS液，每張涂片加50 μl酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物（polymerized HRP-AntiMs/RbIgG），室溫下孵育30 min PBS沖洗3次，每次3 min。（7）除去PBS液，每張涂片加50 μl新鮮配制的DAB或AEC溶液，顯微鏡下觀察3～10 min。（8）自來(lái)水沖洗，蘇木紫復(fù)染，鹽酸分化，自來(lái)水沖洗，PBS返藍(lán)。（9）涂片經(jīng)過(guò)梯度酒精脫水干燥，用DAE顯色，中性樹膠封固。

2 結(jié)果

修復(fù)時(shí)間20 min時(shí)（此時(shí)間為Dakota公司在其他地區(qū)用的傳統(tǒng)時(shí)間），組織著色，陽(yáng)性結(jié)果不顯著，背景清晰；修復(fù)時(shí)間19 min時(shí)（比傳統(tǒng)時(shí)間少1 min）組織已經(jīng)著色，陽(yáng)性結(jié)果不肯定，背景清晰；修復(fù)時(shí)間21 min時(shí)（比傳統(tǒng)時(shí)間多1 min），組織著色，陽(yáng)性結(jié)果顯著，背景清晰，而且組織無(wú)脫落，修復(fù)時(shí)間22 min時(shí)（比傳統(tǒng)時(shí)間多2 min），組織著色，陽(yáng)性結(jié)果顯著，背景清晰，但組織已部分脫落，具體見(jiàn)表1。鏡下表現(xiàn)如下，

圖1：胃神經(jīng)內(nèi)分泌癌SYN免疫組化染色，pH 9.0，1 mmol/L EDTA中煮沸30 min，胞漿強(qiáng)陽(yáng)性染色，部分區(qū)域組織脫落（×200）。圖2：

淋巴結(jié)反應(yīng)性增生CD20免疫組化染色，pH 6.0，0.01 mmol/L在檸檬酸修復(fù)液中高壓煮沸20 min，胞膜強(qiáng)陽(yáng)性染色，背景清晰（×200），圖3：鼻咽低分化鱗癌HCK免疫組化染色，pH 6.0，0.11 mmol/L檸檬酸修復(fù)液中煮沸20 min，胞漿強(qiáng)陽(yáng)性染色，部分區(qū)域組織脫落（×200），圖4：甲狀腺乳頭狀癌免疫組化染色，pH 6.0，0.01 mmol/L在檸檬酸修復(fù)液中高壓煮沸20 min，胞膜強(qiáng)陽(yáng)性染色，背景清晰（×200）。

3 討論

眾所周知，抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性[4]。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來(lái)，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，制備特異性抗體，再用這種抗體（第一抗體）作為抗原去免疫動(dòng)物制備第二抗體，并用某種酶（常用辣根過(guò)氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，將抗原放大，由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無(wú)色的，因此，還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來(lái)（常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒）[5]。通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，顯示細(xì)胞或組織中的化學(xué)成分，在顯微鏡下可清晰看見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞或組織原位確定某些化學(xué)成分的分布、含量[6]。組織或細(xì)胞中凡是能作抗原或半抗原的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)[7]?？乖男迯?fù)通常有物理修復(fù)及化學(xué)修復(fù)，目前的國(guó)內(nèi)根據(jù)不同的抗體主要的修復(fù)方法有：高溫高壓.胰酶修復(fù)、胃蛋白酶修復(fù)、EDTA修復(fù)，免疫組化技術(shù)都要求在高溫高壓下進(jìn)行的[8]。隨著精準(zhǔn)醫(yī)療的理念，免疫組化也走進(jìn)了大大小小的醫(yī)院，成為診斷的好朋友。目前市場(chǎng)上的試劑很多，選擇適合自己的很重要，也要根據(jù)自己地區(qū)的實(shí)際情況探索最佳方法。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高溫高壓修復(fù)法是一種比較實(shí)用的抗原修復(fù)方法，特別是對(duì)于標(biāo)本數(shù)不是特別多的基層醫(yī)院。只是要根據(jù)本地區(qū)的海拔不同有所不同，要找到適合時(shí)間才能有好的效果。在低海拔地區(qū)西雙版納州景洪市就只為21 min，可以推廣運(yùn)用。

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（收稿日期：2016-09-07）