金銀忍冬腋芽離體培養(yǎng)技術(shù)研究

張健+建德鋒

摘要：以金銀忍冬腋芽作為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)技術(shù)研究，得出：把消毒后的腋芽切割成0.3毫米轉(zhuǎn)入MS+KT 0.5 毫克/升+NAA 0.2 毫克/升培養(yǎng)基，分化率達(dá)到100%；然后將分化后的不定芽切割成1厘米小段轉(zhuǎn)入MS+KT 0.5毫克/升+IBA 0.04毫克/升培養(yǎng)基，增殖效果最好；將增殖的大量莖段切割成2 厘米小段轉(zhuǎn)入1/2 MS+IBA 0.8 毫克/升生根培養(yǎng)基中，生根效果最佳。

關(guān)鍵詞：培養(yǎng)基配方；金銀忍冬；腋芽

基金項目：吉林省高等學(xué)校大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項目（2015004）

中圖分類號： S567.7 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A DOI編號： 10.14025/j.cnki.jlny.2017.01.017

金銀忍冬（Lonicera maackii（Rupr.） Maxim.）又叫金銀木，為落葉灌木，其多個器官均可入藥，根可解毒截瘧，莖葉祛風(fēng)解毒，活血祛瘀，花淡、平，可祛風(fēng)解表，消腫解毒，完全可代替金銀花入藥。目前，金銀忍冬常用繁殖方法為播種和扦插。播種繁殖過程復(fù)雜且萌發(fā)率不高，扦插繁殖季節(jié)限制嚴(yán)格，管理方面要求較高，這些都影響到金銀忍冬苗木的快速、大量、優(yōu)質(zhì)繁殖。隨著器官離體培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展，利用其快速、高效、去毒的優(yōu)點(diǎn)，本試驗嘗試采用離體培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行金銀忍冬繁殖。

1材料與方法

1.1試驗材料

2016年6月20日于吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院校園挑選生長良好、無病蟲害的金銀忍冬植株，采集帶腋芽的枝條若干，帶回組培室實驗室消毒接種。

1.2 試驗方法

1.2.1材料處理 將采集回來的枝條切成小段，每段帶一腋芽，在自來水下用流水沖洗20分鐘，然后用0.5%的84消毒液浸泡15分鐘，用無菌水沖洗3～4次，再放入0.05%次氯酸鈉（NaClO3）溶液中浸泡8分鐘，無菌水沖洗后放入超凈臺備用。

1.2.2培養(yǎng)基配方 初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基：A1：MS+KT 1.0 毫克/升+NAA 0.1 毫克/升；A2：MS+KT 1.0毫克/升+NAA 0.2毫克/升；A3：MS+KT 0.5毫克/升+NAA 0.1 毫克/升；A4：MS+KT 0.5毫克/升+NAA 0.2毫克/升。增殖培養(yǎng)基：B1：MS+KT 0.5毫克/升；B2：MS+KT 0.5 毫克/升+IAA 0.02毫克/升；B3：MS+KT 0.5毫克/升+IAA 0.04 毫克/升；B4：MS+KT 0.5毫克/升+IAA 0.06毫克/升；B5：MS+KT 0.5毫克/升+NAA 0.02毫克/升；B6：MS+KT 0.5 毫克/升+IBA 0.04毫克/升； B7：MS+KT 0.5毫克/升+NAA 0.06毫克/升。生根培養(yǎng)基：C1：1/2MS+IBA 0.5 毫克/升；C2：1/2MS+IBA 0.8毫克/升；C3：1/2MS+IBA 1.0 毫克/升L。以上培養(yǎng)基均添加瓊脂6克/升，蔗糖30克/升，pH值均調(diào)整為5.6。

1.2.3培養(yǎng)條件 培養(yǎng)室濕度保持在80%，初代誘導(dǎo)階段溫度20℃，光照強(qiáng)度1600 Lx，光照時間12小時；繼代增殖階段溫度25℃，光照強(qiáng)度2000 Lx，光照時間14小時；生根階段溫度25℃，光照強(qiáng)度3000 Lx，光照時間14小時。

2結(jié)果與分析

2.1 不同初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)不定芽情況

腋芽莖尖接種后均有不同程度的分化。20天左右莖尖開始分化出愈傷組織，進(jìn)而愈傷組織出現(xiàn)突起，后來突起分化出不定芽，接種后55天開始統(tǒng)計不定芽誘導(dǎo)生長情況，具體結(jié)果見表1。由表1可以看出，從A1～A4，分化率、平均芽數(shù)及芽高各不相同，比較得出A4（MS+KT 0.5毫克/升+NAA 0.2 毫克/升）分化瓶數(shù)最多、分化率最高、平均芽數(shù)最多，平均芽高最高，為最佳的培養(yǎng)基。

2.2不同增殖培養(yǎng)基上增殖情況

不定芽切段轉(zhuǎn)接到各繼代增殖培養(yǎng)基配方，各小段開始生長，轉(zhuǎn)瓶28天統(tǒng)計各瓶中苗木的增殖狀況，具體結(jié)果見表2。由表2可以看出，B5增殖倍數(shù)最大，其次為B6和B7，說明添加NAA有利于增殖，綜合比較，B6（MS+KT 0.5毫克/升+IBA 0.04毫克/升）增殖效果最好。

2.3不同生根培養(yǎng)基上生根情況

將繼代增殖的苗切段轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，25天統(tǒng)計各配方中苗木的生根狀況，具體結(jié)果見表3。由表3可以看出，C1、C2、C3配方生根率均較高，說明1/2 MS配方中添加IBA有利于生根；比較C1、C2、C3配方，生根率均為100%，但C2平均根數(shù)最多，另產(chǎn)生的根系粗壯，所以，C2（1/2 MS+IBA 0.8毫克/升）最適合作為生根培養(yǎng)基。

3結(jié)論與討論

通過4個培養(yǎng)基配比對金銀忍冬腋芽進(jìn)行誘導(dǎo)，得出誘導(dǎo)最佳配方為MS+KT 0.5毫克/升+NAA 0.2毫克/升，誘導(dǎo)率達(dá)到100%，產(chǎn)生的不定芽數(shù)較多，平均達(dá)到8個以上，且不定芽生長健壯；通過比較7個配比對苗木的增殖狀況，得出MS+KT 0.5毫克/升+IBA 0.04毫克/升配方最有利于苗木增殖；通過比較3個配比對苗木的生根狀況，得出1/2 MS+IBA 0.8毫克/升配方有利于生根，生根率達(dá)到100%。腋芽是植物的常見器官，另接種腋芽莖尖能達(dá)到脫毒的效果，所以本試驗利用腋芽莖尖進(jìn)行了離體誘導(dǎo)培養(yǎng)，另得出了誘導(dǎo)、增殖、生根三個階段的最佳培養(yǎng)方式，試驗僅針對培養(yǎng)室培養(yǎng)階段進(jìn)行比較，對于金銀忍冬組培瓶苗的出瓶方式、基質(zhì)選擇、出瓶后管理栽培等方面還有待于進(jìn)一步研究探討。

參考文獻(xiàn)

[1] 潭文澄，戴策剛.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].北京：中國林業(yè)出版社，1996：54.

[2] 胡瑩，楊柳青.山茶科植物組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（02）：6-8.

作者簡介：張健，2013級中藥學(xué)專業(yè)學(xué)生，研究方向：植物栽培。

通訊作者：建德鋒，碩士，副教授，研究方向：植物栽培。