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    2011~2014年廣州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者核酸檢測(cè)結(jié)果分析

    2017-02-05 20:53:06梁浩堅(jiān)汪傳喜許結(jié)儀鄭優(yōu)榮李仲平
    中國(guó)醫(yī)藥科學(xué) 2016年10期

    梁浩堅(jiān)+汪傳喜+許結(jié)儀+鄭優(yōu)榮+李仲平+藍(lán)嵐茵+林詩(shī)雅

    [摘要]目的評(píng)估核酸檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于廣州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者血液篩查的功效。方法采用Grifols公司(原諾華診斷公司)PROCLEIX TIGRIS全自動(dòng)核酸檢測(cè)分析系統(tǒng)和PROCLEIX ULTRIO HIV-1/HCV/HBVAssay核酸檢測(cè)試劑,對(duì)2011年1月~2014年12月的1 146 740例無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行HIV/HCV/HBV三項(xiàng)單人份核酸檢測(cè),同時(shí)采用血清學(xué)試劑進(jìn)行HBsAg,HCVAb,HIVAb/Ag檢測(cè)。對(duì)核酸檢測(cè)單獨(dú)反應(yīng)性標(biāo)本(血清學(xué)陰性,核酸檢測(cè)反應(yīng)性)進(jìn)行鑒別試驗(yàn)以確定感染病毒種類。結(jié)果1146740例獻(xiàn)血者血液標(biāo)本,核酸檢測(cè)的反應(yīng)性比率為0.97%(10 645/1146 740),低于血清學(xué)HBsAg,HCVAb,HIVAbAg三項(xiàng)總的檢測(cè)陽(yáng)性率1.66%(19024/1146740)。在1114428例經(jīng)血清學(xué)全項(xiàng)檢測(cè)合格的標(biāo)本中,單人份核酸檢測(cè)共檢出2457例核酸反應(yīng)性樣本,核酸單獨(dú)反應(yīng)性比率為0.22%;在2457例核酸單獨(dú)反應(yīng)性標(biāo)本中,鑒別試驗(yàn)反應(yīng)性的樣本為718例,其中,HBV-DNA 711例,HCV-RNA4例,HIV-RNA 3例。核酸鑒別試驗(yàn)陽(yáng)性率為29.22%(718/2457)。結(jié)論目前在廣州地區(qū)輸血傳播疾病的殘余風(fēng)險(xiǎn)主要還是輸血感染HBV。核酸檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于血液篩查,將有助于縮短病原體檢測(cè)的窗口期,降低輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn),血清學(xué)和核酸檢測(cè)兩種方法互為補(bǔ)充,應(yīng)同時(shí)使用以保障血液安全。

    [關(guān)鍵詞]核酸檢測(cè);血液篩查;輸血風(fēng)險(xiǎn);血液安全;轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增技術(shù)

    輸血相關(guān)傳染病的預(yù)防和控制是全社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn)之一。2010年,國(guó)家衛(wèi)生與計(jì)劃生育委員會(huì)(原衛(wèi)生部)確定在全國(guó)15家采供血機(jī)構(gòu)開展核酸檢測(cè)(NAT)試點(diǎn)工作,以進(jìn)一步保證血液檢測(cè)質(zhì)量,提升我國(guó)無(wú)償獻(xiàn)血者血液檢測(cè)水平。到目前NAT技術(shù)已經(jīng)廣泛運(yùn)用于全國(guó)各地血站的血液篩檢。該技術(shù)的檢測(cè)靈敏度較ELISA檢測(cè)方法高,能顯著縮短病原體檢測(cè)的窗口期,從而降低輸血傳播病毒的殘余風(fēng)險(xiǎn)50%以上。但NAT技術(shù)從理論上并不能完全消除“窗口期”,國(guó)外已有經(jīng)核酸檢測(cè)后仍發(fā)生輸血后感染的病例報(bào)道,包括HIV和HBV。本中心2010年11月正式將NAT技術(shù)應(yīng)用于血液篩查項(xiàng)目中,對(duì)全部無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA核酸檢測(cè)。本研究通過(guò)對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本的常規(guī)血清學(xué)及核酸檢測(cè)結(jié)果的分析,以評(píng)估核酸檢測(cè)的檢測(cè)功效,以及本地獻(xiàn)血者人群的感染狀況?,F(xiàn)將檢測(cè)結(jié)果報(bào)道如下。

    1資料與方法

    1.1一般資料

    2011年1月~2014年12月,廣州血液中心采集的無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本1146740例。所有無(wú)償獻(xiàn)血者均符合現(xiàn)行的衛(wèi)生部《獻(xiàn)血者健康檢查要求》(GB18467-2011)。血液采集后同時(shí)留取核酸檢測(cè)標(biāo)本和酶免檢測(cè)標(biāo)本管各一支。核酸檢測(cè)標(biāo)本采集、保存和處理等均嚴(yán)格按照衛(wèi)生部核酸檢測(cè)試點(diǎn)技術(shù)要求操作。

    1.2主要儀器與試劑

    核酸檢測(cè)儀器:Grifols公司(原諾華診斷公司)PROCLEIX TIGRIS全自動(dòng)核酸檢測(cè)分析系統(tǒng),試劑配置恒溫箱(RPI)。試劑為PROCLEIXULTRIO Assay核酸聯(lián)檢試劑盒和核酸鑒別試劑盒(Discriminatory Assay)。核酸檢測(cè)試劑批號(hào):(593226,614952,624775,116153等)。血清學(xué)檢測(cè)儀器:STAR全自動(dòng)加樣儀和全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀(FAME24/30)。ELISA檢測(cè)主要試劑包括乙肝表面抗原試劑盒(法國(guó)梅里埃,批號(hào)B11FA,20110704;上??迫A:批號(hào)201101031,201201011,201302011)、丙型肝炎抗體試劑盒(美國(guó)強(qiáng)生ORTHO:批號(hào)EXE187,EXE208;上??迫A:批號(hào)201103011,201202031,201303011)及人類免疫缺陷病毒(HIVl/2)抗原抗體檢測(cè)試劑盒(法國(guó)伯樂(lè),批號(hào)1F0189,280213,3F0259;北京萬(wàn)泰,批號(hào)1201 10204,120121 120,12013 1022)。

    1.3檢測(cè)策略

    血液標(biāo)本采用血清學(xué)和NAT并行檢測(cè)操作策略;對(duì)核酸檢測(cè)單獨(dú)反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)行分項(xiàng)鑒別試驗(yàn)。

    1.4檢測(cè)方法

    采用PROCLEIX TIGRIS 全自動(dòng)核酸檢測(cè)分析系統(tǒng)(TMA方法)對(duì)血液核酸標(biāo)本進(jìn)行單人份聯(lián)合檢測(cè)(HIV-1/HCV/HBV);對(duì)核酸檢測(cè)單獨(dú)反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)行分項(xiàng)鑒別試驗(yàn);核酸檢測(cè)結(jié)果反應(yīng)性結(jié)果由檢測(cè)系統(tǒng)軟件自動(dòng)判定,其判定標(biāo)準(zhǔn)為樣本的S/CO值≥1。采用兩種不同廠家的ELISA試劑對(duì)獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行血清學(xué)HBsAg、HCVAb、HIVAgAb檢測(cè),嚴(yán)格執(zhí)行說(shuō)明書進(jìn)行相關(guān)操作,通過(guò)陰陽(yáng)性對(duì)照及室內(nèi)質(zhì)控品來(lái)控制試劑盒的質(zhì)量和檢測(cè)的有效性;血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性的判定:樣本OD≥cut off值。

    1.5檢測(cè)原理

    Grifols核酸檢測(cè)試劑是以轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增(transcription-mediated amplification,TMA)技術(shù)原理來(lái)檢測(cè)病毒核酸的方法。其檢測(cè)基本原理是:利用特異性的目標(biāo)捕獲試劑和磁微珠分離純化被檢測(cè)病毒核酸分子,再通過(guò)TMA技術(shù)來(lái)擴(kuò)增HBVDNA、HCV RNA和HIV-1 RNA(1型)的核酸片斷,最后通過(guò)雜交保護(hù)(HPA)方法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。試劑中含有內(nèi)標(biāo)分子,用以監(jiān)測(cè)整個(gè)反應(yīng)過(guò)程,避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

    1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理和分析,對(duì)計(jì)數(shù)資料進(jìn)行x2檢驗(yàn),P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1血清學(xué)與核酸檢測(cè)結(jié)果的比較

    對(duì)1 146 740例獻(xiàn)血者血液標(biāo)本,核酸檢測(cè)的陽(yáng)性檢出率為0.97%,低于血清學(xué)(HBsAg,HCVAb,H1VAbAg三項(xiàng)之和)的檢測(cè)陽(yáng)性率1.66%,二者之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=2128.4,P<0.05),見表1。

    2.2核酸檢測(cè)

    4年中Grifols單人份核酸檢測(cè)系統(tǒng)的總陽(yáng)性率為0.97%,并且陽(yáng)性率呈現(xiàn)逐年緩慢增加的趨勢(shì)。在對(duì)每年的檢測(cè)陽(yáng)性率進(jìn)行比較時(shí),各年度間檢測(cè)陽(yáng)性率未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=2.442,P<0.05),見表2。

    2.3血清學(xué)合格標(biāo)本中核酸檢測(cè)情況

    在1114428例血清學(xué)檢測(cè)合格標(biāo)本中,單人份核酸檢測(cè)共檢出2457例核酸反應(yīng)性樣本,核酸單獨(dú)反應(yīng)性比率為0.22%;在對(duì)每年檢測(cè)陽(yáng)性率進(jìn)行比較時(shí),各年度間血清學(xué)檢測(cè)合格標(biāo)本其NAT檢測(cè)陽(yáng)性率之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=16.506,P<0.05),見表3。

    2.4核酸鑒別結(jié)果

    在2457例核酸單獨(dú)反應(yīng)性標(biāo)本中,鑒別試驗(yàn)反應(yīng)性的樣本為718例,其中,HBV-DNA 711例,HCV-RNA 4例,HIV-RNA 3例,獻(xiàn)血者中核酸單獨(dú)陽(yáng)性的樣本大多屬于HBV感染,HBV DNA鑒別陽(yáng)性率與另外兩者間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=2091.464,P<0.05)。核酸鑒別試驗(yàn)總陽(yáng)性率為29.22%(718/2457)。見表4。

    3討論

    目前,國(guó)內(nèi)外應(yīng)用于血液篩查的核酸檢測(cè)技術(shù)主要有TMA及PCR兩種。我中心使用的是Grills公司基于TMA技術(shù)的核酸檢測(cè)試劑,對(duì)全部獻(xiàn)血者樣本進(jìn)行單人份核酸檢測(cè)。這種檢測(cè)方法的靈敏度高,反應(yīng)條件簡(jiǎn)單,擴(kuò)增效率高,可以防止低拷貝的病毒陽(yáng)性血液的漏檢。其分析靈敏度為:HBVDNA 10.4IU/mL,HCV RNA 3.0IU/mL和HIV RNA45.0IU/mL。并且該方法的整個(gè)反應(yīng)過(guò)程在1個(gè)試管中進(jìn)行,因此也減少了污染發(fā)生的可能。本研究顯示,廣州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本的核酸陽(yáng)性檢出率明顯低于酶免檢測(cè)項(xiàng)目陽(yáng)性檢出率(P<0.05)。在所有因輸血傳播病毒項(xiàng)目檢測(cè)不合格而淘汰的21481份標(biāo)本中,血清學(xué)和NAT一致陽(yáng)性的僅有8616份(占40.1%),而血清學(xué)單獨(dú)陽(yáng)性的有10408份(占48.5%),NAT單獨(dú)陽(yáng)性的有2457份(占11.4%)。對(duì)于這部分檢測(cè)結(jié)果不一致的情況,一方面是由于血清學(xué)和核酸檢測(cè)都存在檢測(cè)的假陽(yáng)性的可能,另一方面也說(shuō)明了血清學(xué)和核酸檢測(cè)二者具有的互補(bǔ)作用。因此在目前的技術(shù)條件下,血清學(xué)和核酸檢測(cè)對(duì)獻(xiàn)血者的篩查是缺一不可的。

    在獻(xiàn)血者血液篩查中引入核酸檢測(cè)技術(shù),其主要目的是檢測(cè)出原有血清學(xué)檢測(cè)可能漏掉的具有感染性的獻(xiàn)血者樣本。在本研究中的1114428份血清學(xué)檢測(cè)合格標(biāo)本中,單人份核酸檢測(cè)共檢測(cè)出反應(yīng)性樣本2475例,陽(yáng)性檢出率為0.22%(2457/1114428),結(jié)果明顯高于大連和沈陽(yáng)地區(qū)0.07%,這可能與各地區(qū)病毒流行率差異、檢測(cè)樣本數(shù)量、使用試劑差異,以及檢測(cè)模式(單人份與多人份混樣檢測(cè))不同有關(guān)。在對(duì)這些核酸單獨(dú)陽(yáng)性樣本的鑒別檢測(cè)中,共檢出718例陽(yáng)性結(jié)果,鑒別陽(yáng)性檢出率為29.22%。這個(gè)鑒別率與汪德海等報(bào)道的一致,而低于大連,杭州等地的數(shù)據(jù)。而出現(xiàn)核酸檢測(cè)聯(lián)檢反應(yīng)性,而鑒別試驗(yàn)全部為非反應(yīng)性的原因可能有:(1)聯(lián)檢結(jié)果假陽(yáng)性。這可能是由于酶免及核酸檢測(cè)平行進(jìn)行,檢測(cè)人員若操作不規(guī)范,導(dǎo)致陽(yáng)性標(biāo)本的小范圍污染,增加聯(lián)檢結(jié)果假陽(yáng)性的可能;或由于檢測(cè)試劑本身的非特異性反應(yīng)。(2)鑒別試驗(yàn)的假陰性。如病毒濃度處于極低的濃度水平,由于病毒顆粒在血漿中的泊松分布,導(dǎo)致取樣時(shí)未能吸取到帶有病毒的樣本;或可能是因不合適的儲(chǔ)存條件,不良的運(yùn)送,干擾物質(zhì)的存在,導(dǎo)致樣本中病毒的降解,也會(huì)造成鑒別試驗(yàn)假陰性的結(jié)果。由于我國(guó)乙肝的流行率相對(duì)較高,因此獻(xiàn)血者中核酸單獨(dú)陽(yáng)性的樣本大多屬于HBV感染。而HBV感染,特別是隱匿性乙肝感染(OBI)的病毒濃度通常很低,因此出現(xiàn)上述低濃度樣本的可能性很大。已有文章報(bào)道,對(duì)于不可鑒別的樣本,采用其他核酸檢測(cè)方法,或乙肝感染標(biāo)志物(如乙肝核心抗體)進(jìn)行檢測(cè)時(shí),部分樣本仍然呈現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。提示這些不可鑒別的樣本中存在一定比例的真陽(yáng)性。

    從結(jié)果中可以看出目前廣州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者的HBV感染率較高,輸血傳播HBV殘余風(fēng)險(xiǎn)明顯高于HCV和HIV,從核酸鑒別試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析,在718例鑒別陽(yáng)性結(jié)果中,HBV DNA陽(yáng)性711例,占99.03%。文獻(xiàn)報(bào)道,HBV輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)主要來(lái)自于血清轉(zhuǎn)換前的窗口期、變異病毒株和隱匿性HBV感染3個(gè)方面。其中獻(xiàn)血者中的HBV DNA單獨(dú)陽(yáng)性者大部分屬于隱匿性HBV感染,表明輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)主要來(lái)自于隱匿性HBV感染。本文檢出HCV RNA 4例和HIV RNA 3例,其中HCV RNA及HIV RNA各一例送衛(wèi)生部臨檢中心驗(yàn)證為陰性。另外2例HIV RNA因獻(xiàn)血者聯(lián)系電話注銷,無(wú)法進(jìn)行隨訪追蹤,3例HCV RNA中2例經(jīng)確證為陽(yáng)性。在2015年鑒別試驗(yàn)中,又發(fā)現(xiàn)HIV RNA陽(yáng)性2例,送惠州市中心血站作定量檢測(cè)后確證為HIV陽(yáng)性。經(jīng)隨訪追蹤獻(xiàn)血者,一周后再進(jìn)行檢測(cè),血清學(xué)及核酸檢測(cè)均為陽(yáng)性,因此確定該2例標(biāo)本為HIV“窗口期”感染。

    血清學(xué)檢測(cè)的是抗原或抗體,NAT檢測(cè)的是病毒核酸,核酸檢測(cè)能從血清學(xué)檢測(cè)陰性的標(biāo)本中檢出漏檢的病毒感染者,是血清學(xué)檢測(cè)的有力補(bǔ)充,我國(guó)許多城市自引入核酸檢測(cè)后也多有這方面報(bào)道。在本研究中的1114428份血清學(xué)檢測(cè)合格標(biāo)本中,單人份核酸檢測(cè)共檢測(cè)出反應(yīng)性樣本2475例(0.22%),證實(shí)核酸檢測(cè)的必要性。將NAT技術(shù)應(yīng)用于血液篩查,可以顯著降低因血清學(xué)漏檢而導(dǎo)致的輸血傳播疾病的殘余風(fēng)險(xiǎn),進(jìn)一步提高血液安全,以保障臨床用血安全。

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