重復(fù)使用的比色杯對(duì)TSGF測(cè)定的影響研究

雷 鵬

山丹縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 甘肅省山丹縣 734100

重復(fù)使用的比色杯對(duì)TSGF測(cè)定的影響研究

雷 鵬

山丹縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 甘肅省山丹縣 734100

大量生物學(xué)研究證明，細(xì)胞惡變時(shí)通常出現(xiàn)一些特征變化，如a-酸性糖蛋白和芳香族氨基酸在血清中的含量高于正常，腫瘤浸潤(rùn)或轉(zhuǎn)移可引起羥脯氨酸代謝紊亂，導(dǎo)致其在血清中含 量升高。癌變?cè)缙?，雖然任何一種腫瘤標(biāo)志物的變化都比較微小，不易被早期檢測(cè)。但TSGF（苯丙氨酸、酪氨酸、羥脯氨酸、a-酸性糖蛋白聯(lián)合試劑盒）不是針對(duì)某個(gè)單一腫瘤標(biāo)志物，而是聯(lián)合檢測(cè)苯丙氨酸、酪氨酸、羥脯氨酸和a-酸性糖蛋白，使其共同顯色，提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性。但是在實(shí)際工作中，部分醫(yī)院重復(fù)使用比色杯，在檢驗(yàn)過(guò)程中對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果否影響，為了證實(shí)在檢驗(yàn)過(guò)程中的影響，現(xiàn)特對(duì)本院20份標(biāo)本進(jìn)行TSGF測(cè)試，以檢測(cè)和評(píng)估重復(fù)使用的比色杯對(duì)TSGF測(cè)定的影響。

重復(fù)使用的比色杯；TSGF測(cè)定；腫瘤特異生長(zhǎng)因子(TSGF)

1 材料

1.1 試劑

TSGF試劑盒（福建新大陸生物技術(shù)有限公司提供）。

1.2 檢測(cè)對(duì)象

本院20位住院患者，其中所用樣本血清全部為正常標(biāo)準(zhǔn)血清（排除溶血，脂血標(biāo)本）。

1.3 儀器與試劑

722S分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司提供)，TSGF試劑盒（苯丙氨酸、酪氨酸、羥脯氨酸、a-酸性糖蛋白聯(lián)合試劑盒）；未開包裝比色杯；重復(fù)使用的比色杯。

2 方法

2.1 蒸餾水調(diào)節(jié)

分光光度計(jì)波長(zhǎng)至470nm。

2.2 分離血清

每份血清分離兩份，一份用重復(fù)使用過(guò)的比色杯測(cè)定，另一份用新的比色杯測(cè)定。

3 過(guò)程

3.1 加樣

準(zhǔn)確吸取40ul待測(cè)血清及40ul六個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，分別加入盛有1ml試劑的反應(yīng)管中，蓋緊蓋子，充分混勻；

3.2 顯色

將反應(yīng)管插入反應(yīng)架中，置于100℃水浴鍋中加熱15分鐘，迅速取出并置于冷水中冷卻5分鐘以終止反應(yīng)；

3.3 比色

將反應(yīng)液倒入0.5cm光程比色杯中，在470nm波長(zhǎng)處，測(cè)定各管樣本的吸光度值；

3.4 計(jì)算

TSGF標(biāo)準(zhǔn)品共有六個(gè)濃度，分別為0U/ml、20 U/ml、40 U/ml、60 U/ml、80 U/ml、100 U/ml。用標(biāo)準(zhǔn)濃度作橫坐標(biāo)，所對(duì)應(yīng)的吸光度值為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得血清標(biāo)本吸光度值所對(duì)應(yīng)的濃度單位。上清以分光光度法(λ=470nm，光徑0.5cm,空比色杯調(diào)零)測(cè)定A，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線 計(jì)算TSGF含量(μ/ ml)。

4 根據(jù)以上結(jié)論對(duì)以下檢測(cè)對(duì)象進(jìn)行檢測(cè)分析

①癌癥40例。其中肺癌18例，消化系統(tǒng)癌6例，惡性淋巴瘤8例，白血病(A LL)5例，前列腺癌3例。②非癌疾病30例。其中急性炎5例，慢性炎5例，結(jié)核病6例，非炎癥 14例。兩組患者血清按雙盲法檢驗(yàn)。

5 TSGF測(cè)定

取血清40μl與反應(yīng)管中試劑混勻，沸水浴內(nèi)反應(yīng)15min，自來(lái)水冷卻后30 00rpm離心。上清以分光光度法(λ=470nm，光徑0.5cm,空比色杯調(diào)零)測(cè)定A，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線 計(jì)算TSGF含量(μ/ml)。以TSGF>64u/ml為該項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性。

6 癌癥組

40例中TSGF含量71.7±15.7μ/ml；陽(yáng)性31例(77.4%)。以肝癌、肺癌 、惡性淋巴瘤等陽(yáng)性率高。

7 非癌組

30例TSGF含量59.1±12.2μ/ml，顯著低于癌癥組；陽(yáng)性率25.0%(9/36 )亦顯著低于癌癥組(P<0.001)；陽(yáng)性者主要來(lái)自急性炎癥、結(jié)核病及慢性炎癥。

7.1 對(duì)照

如表1所示。

表1：癌癥組與非癌組血清TSGF含量（U/ml）和陽(yáng)性率（%）

8 討論

在酸性環(huán)境中，標(biāo)本中的TSGF與試劑中顯色劑反應(yīng)，形成470nm處有一特征吸收峰的黃褐色物質(zhì)。從檢驗(yàn)結(jié)果可看出，癌癥組絕大部分病人TSGF水平≥64U/ ml，結(jié)果表明腫瘤TSGF陽(yáng)性率顯著高于非癌組。廠家試劑盒推薦正常人TSGF濃度范圍為（47±17）U/ml；<64 U/ml為陰性；可疑陽(yáng)性為64～70 U/ml；陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為≥71 U/ml。我們以TSGF>64u/ml為該項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性。在測(cè)定中所得結(jié)果做以比較，重復(fù)使用過(guò)的比色杯所得結(jié)果80%處于可疑陽(yáng)性區(qū)間，而使用新的比色杯所得結(jié)果則在批間（VC%）≤80%之內(nèi)。 綜上所述，血清TSGF是一種新的、敏感性和特異性較高的廣譜腫瘤標(biāo)志物，檢測(cè)方法簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果穩(wěn)定。對(duì)惡性腫瘤的初篩、早期輔助診斷、療效評(píng)價(jià)和預(yù)示腫瘤復(fù)發(fā)具有重要臨床意義和應(yīng)用價(jià)值。在檢測(cè)過(guò)程中一定要謹(jǐn)慎處理，拿取比色杯時(shí)，只能用手指接觸兩側(cè)的毛玻璃，避免接觸光學(xué)面。同時(shí)注意輕拿輕放，防止外力對(duì)比色杯的影響，產(chǎn)生應(yīng)力后破損。 不能將比色杯放在火焰或電爐上進(jìn)行加熱或干燥箱內(nèi)烘烤。當(dāng)發(fā)現(xiàn)比色杯里面被污染后，應(yīng)用乙醚和無(wú)水乙醇的混合液（各50%）清洗，及時(shí)擦拭干凈。不得將比色杯的透光面與硬物或臟物接觸。盛裝溶液時(shí)，高度為比色杯的2/3處即可，光學(xué)面如有殘液可先用濾紙輕輕吸附，然后再用鏡頭紙或絲綢拭。若太臟可用洗液清洗，但時(shí)間要短（幾秒鐘)，再用清水清洗干凈，切忌不能用洗潔精之類的清潔劑，以免影響測(cè)量。建議檢測(cè)時(shí)使用新開包裝比色杯。

[1]齊心亮，權(quán)蘭秋，張華欣，趙勇，董菊子.惡性腫瘤特異生長(zhǎng)因子(TSGF)檢測(cè)的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志,2005(10).

[2]李新海等主編.腫瘤標(biāo)志物的檢驗(yàn)與臨床[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,1996.

[3]楊進(jìn)等.肺癌患者與正常人血、尿中氨基酸譜的對(duì)比研究[J].臨川肺科雜志,2007,12(05):429-430.

[4]張友會(huì)主編.現(xiàn)代腫瘤學(xué)[M].北京:北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1993.

[5]夏玉宇.化驗(yàn)員使用手冊(cè)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,1999.