青海地區(qū)犬感染棘球絳蟲的調(diào)查

闞威，趙全邦，馬睿麟，沈艷麗，馬占全，胡廣衛(wèi)，李靜，馬世春，蔡金山

(1．青海省動物疫病預防控制中心，青海西寧810000;2．中國動物疫病預防控制中心，北京朝陽100125)

青海地區(qū)犬感染棘球絳蟲的調(diào)查

闞威1，趙全邦1，馬睿麟1，沈艷麗1，馬占全1，胡廣衛(wèi)1，李靜1，馬世春2，蔡金山1

(1．青海省動物疫病預防控制中心，青海西寧810000;2．中國動物疫病預防控制中心，北京朝陽100125)

包蟲病也稱棘球蚴病，是由帶科(Taeniidae)棘球?qū)?Genus Echinococcus)和泡球?qū)?Genus Alveococcus)絳蟲的中絳期(幼蟲)引起的人獸共患寄生蟲病，有棘球蚴病(Echinococcosis)和泡球蚴病(Alveococcosis)兩種［1］。棘球蚴病在以畜牧業(yè)為主的國家和地區(qū)多見，在我國，主要流行于西北、華北、東北，以及西南廣大農(nóng)牧區(qū)，是嚴重危害人畜健康和妨礙畜牧業(yè)生產(chǎn)發(fā)展的地方病［2］。青海省是棘球蚴病的高發(fā)流行區(qū)，其疫病分布之廣，疫情之重，危害之大已成為主要的動物疫病，病原主要有細粒棘球絳蟲(E-chinococcus granulosus)、多房棘球絳蟲(Echinococcus multiloclaris)、少節(jié)棘球絳蟲(Echinococcus oligarthrus)和伏氏棘球絳蟲(Echinococcus vogeli)4個蟲種［3］。主要寄生于狐、犬、貓等食肉動物的小腸中，青海省牧區(qū)內(nèi)有數(shù)量眾多的牧羊藏犬，此外有野犬和其他犬類及狼、狐貍等食肉動物存在［4］。棘球絳蟲的終末宿主(犬)是棘球蚴病的重要傳染源，棘球絳蟲的蟲卵隨牧羊犬糞排出，污染食物、飲水和周圍環(huán)境，所以及時、準確地檢測流行區(qū)終末宿主棘球絳蟲的感染情況和對感染動物進行強制驅(qū)蟲，對控制棘球蚴病的流行、綜合防控措施實施和防治效果等均具有重要的意義［5］。

鑒于青海省是棘球蚴病的主要流行區(qū)，為掌握犬棘球絳蟲病的流行情況，遏制家畜棘球蚴病的流行，中國動物疫病預防控制中心制定了《棘球蚴病綜合防控技術(shù)集成與示范項目》，對包括青海省在內(nèi)的5省(區(qū))進行家畜棘球蚴病流行病學調(diào)查，以建立棘球蚴病綜合防控模式，形成棘球蚴病防控技術(shù)規(guī)范及防控水平評估標準，并加以示范推廣。本文對青海省境內(nèi)的牧羊犬棘球絳蟲(包蟲)病感染情況已進行調(diào)查和研究，旨在從終末宿主著手，制定有效的防控措施，以降低棘球蚴病在人畜之間的流行。

1 材料與方法

1．1 調(diào)查地區(qū)全省40個縣(市)。

1．2 實驗動物2000年至2014年全省40縣(市)牧民定居點牧羊犬或藏犬。

1．3 試驗試劑及藥品氫溴酸檳榔堿、犬糞抗原檢測試劑(天津天之泰有限責任公司)、蔗糖、剖檢手術(shù)器械。

1．4 方法

1．4．1 氫溴酸檳榔堿瀉下法1958年來自新西蘭的蓋摩教授首次提出了氫溴酸檳榔堿瀉下法，從此檳榔堿瀉下就成為犬感染細粒棘球絳蟲重要的檢測方法之一。對全省各縣(市)的牧羊犬或藏犬，按0.5 mL/kg體重的劑量，將1.5%氫溴酸檳榔堿溶液注入口腔，服藥后約40～60 min，會排出黏性液體糞樣，收取其1/3糞樣，用3%福爾馬林溶液輕洗于搪瓷盤中沉淀片刻，棄去上清液，再進行肉眼檢查。

1．4．2 剖檢法犬棘球絳蟲病感染的定性定量調(diào)查依據(jù)最準確的就是剖檢法，同時剖檢法也是檢測棘球絳蟲感染的最準確方法，是WHO規(guī)定的棘球絳蟲感染檢測的金標準。其操作為收集調(diào)查動物，剖檢，取小腸，兩端結(jié)扎，置于已編號的塑料袋或容器中。低溫保存，待檢。如要長距離運送樣品，應該用冷藏車或冰塊運輸。剖檢時。可將小腸分為數(shù)段，置于托盤，用剪刀剪開后浸入溫生理鹽水中。然后，直接取樣或者對樣品進行富集后用肉眼和顯微鏡觀察用肉眼觀察或寄生蟲學常規(guī)方法收集蟲體，統(tǒng)計結(jié)果，并計數(shù)。

1．4．3 糞抗原ELISA檢測法棘球絳蟲寄生于宿主的十二指腸處，其在宿主體內(nèi)所產(chǎn)生的分泌物、代謝物、脫落的節(jié)片等隨著宿主排泄物排出體外，稱為糞抗原，常用的糞抗原檢查法雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)因操作和結(jié)果觀察容易，而被廣泛的使用。通過糞抗原制備特異性的抗體，應用抗原－抗體特異性結(jié)合的原理，檢測糞抗原，對終末宿主的感染情況進行檢測。

1．4．4 飽和糖水漂浮法有時為了進行科學研究或達到準確診斷目的，常將檢出蟲卵作為實驗室確診的依據(jù)之一，利用寄生蟲飽和蔗糖漂浮法，稱取一定量的糞便，用飽和蔗糖溶液溶解，沾取漂浮液上部的溶液，鏡檢是否有蟲卵。其過程是在500 mL水中加入650 g蔗糖溶解后，可到比重1.27的飽和蔗糖液。稱取0.5 g糞便，放人15 mL離心管中，加少量飽和蔗糖液，充分攪拌后，加飽和蔗糖液至略隆起于試管口，靜置30 min，鏡檢計數(shù)。

2 結(jié)果

2．1 氫溴酸檳榔堿瀉下法結(jié)果2000年從德令哈、稱多、甘德、澤庫、貴南5個縣采用氫溴酸檳榔堿瀉下法，共檢測306只牧羊犬，其中有110只藏犬患有細粒棘球絳蟲的感染，感染率為35.95%。2012年在全省40縣(市)基層獸醫(yī)站同樣采用氫溴酸檳榔堿瀉下法，檢測230只牧羊犬，其中22只牧羊犬患有細粒棘球絳蟲的感染，感染率為9.57%。合計:2年采用氫溴酸檳榔堿瀉下法共檢測536只牧羊犬，132只感染有細粒棘球絳蟲，平均感染率為22.76%。

2．2 剖檢法結(jié)果2012年剖檢玉樹、剛察、同德、澤庫、海晏、興海、貴南7個縣的28只犬，剖檢結(jié)果顯示，有18只牧羊犬感染細粒棘球絳蟲，感染率為64.29%。

2014年對共和、剛察、貴南、都蘭、澤庫、互助6個縣的34只牧羊犬進行剖檢檢查，剖檢結(jié)果顯示:6個縣共有20只犬感染細粒棘球絳蟲，感染率為58.82%。合計，2012、2014年共剖檢96只牧羊犬，其中62只感染有細粒棘球絳蟲，平均感染率為64.56%。

2．3 糞抗原ELISA檢測法結(jié)果采用糞抗原ELISA檢測犬糞3 887份，包括2009年剛察636份、2010年剛察644份、2011年全省縣(市)1 017份、2012年全省基層獸醫(yī)站1 590份，檢出感染棘球絳蟲犬糞496份，2009年剛察121份，感染率為33.80%，2010年剛擦196份，感染率30.43%、2011年全省40個縣(市)111份，感染率為10.91%、2012年基層獸醫(yī)站68份，感染率為4.30%，4年檢測結(jié)果顯示，犬棘球絳蟲病的平均感染率為19.86%。

2．4 飽和糖水漂浮法結(jié)果采用飽和糖水漂浮法對2012年從海晏、貴南、同德、澤庫、互助采集的102份犬糞進行檢測，檢測結(jié)果顯示，僅有3份感染棘球絳蟲病，感染率為2.93%。

3 討論與小結(jié)

有史以來，氫溴酸檳郎堿瀉下法是確定犬棘球絳蟲病感染的經(jīng)典方法之一，稱之為“檳榔堿瀉下檢測法”，在牧醫(yī)工作中具有較好的應用價值。此外，應用氫溴酸檳榔堿瀉下法檢測犬棘球絳蟲病的感染，不僅工作難度大，既浪費時間又浪費精力，而且對畜牧獸醫(yī)工作人員具有潛在的感染危險性，并造成對周圍生活環(huán)境的污染，導致棘球蚴病的人畜感染。隨著吡喹酮等高效驅(qū)蟲藥的問世和使用，檳榔堿作為驅(qū)蟲藥的歷史已經(jīng)過去，現(xiàn)僅用于絳蟲感染流行病學基線調(diào)查。本試驗在2000年和2012年采用此方法，共檢測536只藏犬，2年平均感染率為22.76%，其中2000年為35.95%，2012年為9.57%，由此看出通過近幾年牧區(qū)使用吡喹酮給牧羊犬驅(qū)蟲，牧羊犬感染棘球絳蟲比例有所下降。

早在1992年Allan［6］等，首次報道用兔抗細粒棘球絳蟲成蟲體粗提抗原的抗體做夾心ELISA檢測感染犬細粒棘球絳蟲糞抗原，敏感性為87.5%特異性為96.5%，且將保存于5.0%甲醛放置6個月以上的糞便標本檢測效果不會發(fā)生改變。2008年，國內(nèi)學者黃燕［7］等，研究了犬糞便棘球絳蟲蟲體抗原雙抗體ELISA檢測方法，通過與剖檢結(jié)果比較系統(tǒng)的敏感性為92.3%特異性為80%，此方法可用于細粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲感染的診斷，還可檢出不同荷蟲量自然感染狐貍多房棘球絳蟲的糞抗原，最低可檢出50條蟲體感染的糞便樣品，認為糞抗原夾心ELISA檢測具有早期診斷價值和較好的療效考核價值。由此可見，糞抗原檢測法在診斷犬細粒棘球絳蟲感染具有較高的敏感性和特異性，可作為棘球蚴病常規(guī)實驗方法推廣應用。糞抗原夾心ELISA檢測不僅具有早期診斷價值，而且還有較好的療效考核價值，將成為檳榔堿檢測法的替代方法，已逐漸用于各個實驗室。本試驗使用天津天之泰有限責任公司生產(chǎn)的糞抗原ELISA檢測試劑盒，操作簡便省時，試驗結(jié)果可信性強，可以作為實驗室和臨床診斷犬棘球絳蟲病的方法，但是該試劑成本較高，且要求檢測數(shù)量較大，因此僅能在動物疫控中心使用。

剖檢法操作時，應盡快從剖檢犬腹腔中取出小腸，兩端結(jié)扎，置于已編號的塑料袋或容器中。低溫保存，待檢。如要長距離運送樣品，應該用冷藏車或冰塊運輸。剖檢時，可將小腸分為數(shù)段，置于托盤，用剪刀剪開后浸入溫生理鹽水中。然后，直接取樣或者對樣品進行富集后用肉眼和顯微鏡觀察并計數(shù)。此次在全省部分縣市共剖檢96只藏犬，2010年34只，2012年28只，2014年34只，感染棘球絳蟲犬62只，其3年平均感染率為64.57%，平均感染強度可達164 565，感染范圍為0～220萬。從剖檢年份來看，3年感染棘球絳蟲的犬只比列有所下降，同樣說明近幾年牧區(qū)采用吡喹酮給犬驅(qū)蟲，達到一定的效果，對遏制棘球蚴病的流行起到了一定的作用。

對于飽和糖水漂浮法，是當下基層慣用的檢測方法，其操作簡單方便，但是檢出率較低，就從本試驗研究可以看出，在2012年采用飽和糖水漂浮法檢測102份犬糞便，僅檢出3份，比起以上3種方法相差甚遠，因此，獸醫(yī)工作者應綜合考慮選擇合適的檢測方法，以達到對犬棘球絳蟲病調(diào)查的準確性。

此次調(diào)查研究長達14年，綜合分析試驗結(jié)果得知，我們長期以來在牧區(qū)推廣吡喹酮對牧羊犬驅(qū)蟲試驗，得到了一定的效果，連年來牧羊犬棘球絳蟲病的感染率有所下降，這是對我們防控工作的肯定，也緩和了棘球蚴病在家畜與人類之間的傳播。

［1］Eckert J，Gemmell MA，Meslin FX，et al．WHO/0IE Manual on Echinococcosis in Humans and Animals:A Public Health Problem of Global Concern［J］．World Organization yor Animal Health Paris France，2001．

［2］汪明主編．獸醫(yī)寄生蟲學［M］．北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2007: 378-379．

［3］曹宏主編．青海省動物疫病流行病學調(diào)查［M］．西寧:青海人民出版社，2008:345．

［4］李春花，蔡進忠，賈萬忠，等．青海牧區(qū)藏犬寄生蟲病流行病學調(diào)查研究［J］．青海畜牧獸醫(yī)雜志，2014，44(4):1-4．

［5］賈萬忠，閆鴻斌，王玉朝，等．犬科動物棘球絳蟲感染檢測方法研究進展［J］．中國人獸共患病學報，2010，26(2):179-182．

［6］Allan J C，Craig P S，Garcia Noval J，et al．Coproantigen detection for immunodiagnosis of echinococcosis and taeniasis in dogs and humans［J］．Parasitology，1992，104(Pt 2):347-355．

［7］黃燕，Heath D D，Antone J C，等．犬糞便棘球絳蟲抗原的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測法建立與應用［J］．預防醫(yī)學情報雜志，2008，24(6):407-411．

S852．65+5;S852．73+4

B

0529-6005(2017)01-0045-02

2015-12-14

中國動物疫病預防控制中心棘球蚴病綜合防控技術(shù)集成與示范項目

闞威(1986-)，男，獸醫(yī)師，碩士生，主要從事動物防疫工作，E-mail:kanweind@163．com

蔡金山，E-mail:894569380@qq．com