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    抗感敗毒口服液解熱鎮(zhèn)痛抗炎試驗

    2017-03-28 03:04:31胡超群王湘妍段夢迪李欣楊嬌劉升呂鳳霞馮文麗劉聯(lián)盟舒剛
    中國獸醫(yī)雜志 2017年1期
    關(guān)鍵詞:二硝基苯熱板醋酸

    胡超群,王湘妍,段夢迪,李欣,楊嬌,劉升,呂鳳霞,馮文麗,劉聯(lián)盟,舒剛

    (1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,四川成都611130;2.河南應(yīng)用技術(shù)職業(yè)學(xué)院,河南開封475000;3.河南牧翔動物藥業(yè)有限公司,河南鄭州450000)

    抗感敗毒口服液解熱鎮(zhèn)痛抗炎試驗

    胡超群1,王湘妍2,段夢迪1,李欣1,楊嬌1,劉升3,呂鳳霞3,馮文麗3,劉聯(lián)盟3,舒剛1

    (1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,四川成都611130;2.河南應(yīng)用技術(shù)職業(yè)學(xué)院,河南開封475000;3.河南牧翔動物藥業(yè)有限公司,河南鄭州450000)

    試驗旨在觀察抗感敗毒口服液的解熱、鎮(zhèn)痛及抗炎效果。采用2,4-二硝基苯酚發(fā)熱模型,觀察抗感敗毒口服液解熱作用;通過小鼠扭體法和熱板法,觀察其鎮(zhèn)痛作用;通過小鼠耳腫脹及對腹腔毛細血管通透性的影響觀察其抗炎作用。結(jié)果表明,抗感敗毒口服液能減輕2,4-二硝基苯酚所致大鼠發(fā)熱反應(yīng);明顯提高熱板痛閾和抑制醋酸所致扭體反應(yīng);抑制腹腔毛細血管通透性的增高及二甲苯所致小鼠耳廓腫脹。綜上,抗感敗毒口服液具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎的藥理作用。

    抗感敗毒口服液;解熱;鎮(zhèn)痛;抗炎

    本試驗所用抗感敗毒口服液結(jié)合中獸醫(yī)傳統(tǒng)理論,運用現(xiàn)代中藥藥理技術(shù),選用黃芩、連翹、梔子、板藍根、野菊花、貫眾配制加工而成。該方劑中許多單味藥都具有清熱解毒,抗菌消炎的功能。為了將該口服液用于獸醫(yī)臨床,本試驗主要考察抗感敗毒口服液在解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎方面的藥理作用。

    1 材料

    1.1 實驗動物昆明系小鼠,體重(20±2)g,雌雄各半;SD大鼠,體重(200±10)g,雄性(購自成都達碩實驗動物有限公司,許可證號:SCXK(川)2014-028);清潔環(huán)境飼養(yǎng),自由攝食、飲水。試驗前臨床觀察7 d,以選取健康正常的實驗動物。

    1.2 試驗藥物抗感敗毒口服液,由河南牧翔動物藥業(yè)有限公司提供(批號:20150601,規(guī)格:每1 mL相當(dāng)于原生藥材為1.49 g);阿司匹林腸溶片,購自石家莊康力藥業(yè)有限公司(規(guī)格:0.25 mg/片,批號:150203)。

    1.3 主要儀器及試劑電子體溫計,熱板儀,以及其他實驗室常規(guī)儀器設(shè)備。2,4-二硝基苯酚,二甲苯,醋酸,伊文思藍(生化試劑)等,均購自成都科飛試劑公司。

    1.4 數(shù)據(jù)分析用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理,試驗結(jié)果均以X±S表示,各組間的顯著性差異用單因素方差分析,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 試驗方法

    2.1 解熱試驗采用2,4-二硝基苯酚制熱法。選取基礎(chǔ)體溫變化不超過0.3℃、健康、營養(yǎng)狀況良好的大鼠48只,隨機分為6組,每組8只,即抗感敗毒口服液高、中、低劑量組,陽性藥物阿司匹林對照組,模型對照組和空白對照組。根據(jù)預(yù)試驗,抗感敗毒口服液高、中、低劑量組分別按2 mL/kg體重、1 mL/kg體重、0.5 mL/kg體重灌胃給藥抗感敗毒口服液,陽性藥物阿司匹林對照組按100 mg/kg體重灌胃給藥阿司匹林,模型對照組和空白對照組按2 mL/kg體重灌胃生理鹽水,每天一次,連續(xù)給藥3 d,最后1次給藥之前的半小時測定大鼠的基礎(chǔ)肛溫;最后1次給藥之后的半小時在大鼠背部皮下注射15 mg/kg體重的2,4-二硝基苯酚溶液,成功制造出大鼠發(fā)熱模型。然后,在注射2,4-二硝基苯酚后的0.5 h、1 h、1.5 h,分別測量大鼠的肛溫,對各組大鼠的肛溫變化情況進行比較和分析。

    2.2 鎮(zhèn)痛試驗

    2.2.1 對小鼠熱板舔足反應(yīng)潛伏期的影響試驗

    雌性小鼠50只,隨機分為5組,每組10只,即抗感敗毒口服液高、中、低劑量組,陽性藥物阿司匹林對照組和模型對照組。給藥劑量同2.1,每天1次灌胃給藥,連續(xù)給藥7 d。將小鼠置于55℃±0.5℃恒溫器的熱板上,觀察并記錄小鼠自足底接觸熱板至出現(xiàn)舔后足的時間,即熱板反應(yīng)潛伏期作為痛閾指標。正式試驗前需先剔除反應(yīng)潛伏期>30 s或<5 s的反應(yīng)遲鈍或過敏的小鼠。

    2.2.2 小鼠扭體法鎮(zhèn)痛試驗小鼠50只,隨機分為5組,每組10只,雌雄各半。分組及給藥劑量同

    2.2.1,每天1次,連續(xù)給藥7 d。于末次給藥1 h后,各組小鼠腹腔注射0.7%冰醋酸0.1 mL/10 g。觀察小鼠的扭體反應(yīng)(伸展后肢,腹部收縮內(nèi)凹,臀部抬高),記錄出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏時間及15 min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù),計算扭體抑制率和潛伏時間延長率。

    2.3 抗炎試驗

    2.3.1 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響小鼠50只,隨機分為5組,每組10只,雌雄各半。分組及給藥劑量同2.2.1。每天1次,連續(xù)給藥3 d。于末次給藥1 h后,每組小鼠左耳廓前后二面涂抹二甲苯50 μL/只,20 min后脫臼處死,剪下左右兩耳,用直徑6 mm打孔器沿左右耳同一部位打下左右耳片,立即用萬分之一電子分析天平稱重。計算耳廓腫脹度、腫脹率和腫脹抑制率。

    2.3.2 對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性的影響小鼠50只,隨機分為5組,每組10只,雌雄各半,分組及給藥劑量同2.2.1,每天1次,連續(xù)給藥7 d。于末次給藥30 min后,尾靜脈注射0.5%伊文思藍0.1 mL/只,隨即腹腔注射0.6%醋酸生理鹽水溶液0.2 mL/只。20 min后脫臼處死,6 mL生理鹽水分多次沖洗腹腔,收集全部洗液于刻度試管中,并定容至8 mL。將沖洗液離心后,在Backman分光光度儀掃描,繪出其紫外吸收光譜,測其吸收度。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 解熱試驗結(jié)果由表1可知,注射2,4-二硝基苯酚溶液后,模型對照組體溫持續(xù)升高,在注射后0.5 h、1 h、1.5 h體溫均顯著高于空白對照組(P<0.05),說明造模成功。注射后0.5 h,抗感敗毒口服液低、中、高劑量組與模型對照組無顯著性差異(P>0.05);注射后1 h,抗感敗毒口服液低、高劑量組體溫均顯著低于模型對照組(P<0.05),中劑量組體溫與模型性對照組無顯著差異(P>0.05);注射后1.5 h,抗感敗毒口服液低、中、高劑量組體溫均顯著低于模型對照組(P<0.05)。以上說明抗感敗毒口服液低、中、高劑量組均對2-4-二硝基苯酚致引起的大鼠發(fā)熱有一定的降溫作用,且高劑量組的解熱效果最好。

    表1 抗感敗毒口服液解熱效果(℃)

    3.2 鎮(zhèn)痛試驗

    3.2.1 對小鼠熱板舔足反應(yīng)潛伏期的影響由表2可知,給藥前各組痛閾值無顯著性差異(P>0.05);給藥后,與模型對照組相比,抗感敗毒口服液低、中、高劑量組的藥后痛閾延長時間和痛閾率均顯著增加(P<0.05)。以上說明抗感敗毒口服液低、中、高劑量組均能顯著抑制熱板引起的小鼠疼痛反應(yīng),且高劑量組的鎮(zhèn)痛效果最好。

    表2 抗感敗毒口服液鎮(zhèn)痛效果

    3.2.2 小鼠扭體法鎮(zhèn)痛試驗由表3可知,與模型對照組相比,抗感敗毒口服液低、中、高劑量組和阿司匹林藥物對照組均能顯著抑制醋酸引起的小鼠疼痛反應(yīng)(P<0.05)。以上表明,高、中、低劑量組均能抑制醋酸引起的小鼠疼痛反應(yīng),并且呈劑量依賴性,以高劑量的抗感敗毒口服液對抑制醋酸引起的小鼠疼痛反應(yīng)的效果最好,優(yōu)阿司匹林。

    表3 抗感敗毒口服液扭體效果

    3.3 抗炎試驗

    3.3.1 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響由表4可知,與模型對照組相比,抗感敗毒口服液低、中、高劑量組均能顯著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹(P<0.05),且抗感敗毒口服液低、中、高劑量組的抑制耳廓腫脹效果呈現(xiàn)劑量依賴性;這表明不同劑量的抗感敗毒口服液均能抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹,高劑量組的作用較好。

    表4 抗感敗毒口服液對小鼠耳廓腫脹的影響

    3.3.2 對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性的影響由表5可知,與模型對照組相比,抗感敗毒口服液高劑量組可顯著抑制醋酸引起的毛細血管通透性增加(P<0.05);抗感敗毒口服液低、中劑量組對醋酸引起的毛細血管通透性的增加有抑制作用,但差異不顯著(P>0.05)。以上表明高劑量的抗感敗毒口服液抑制醋酸誘導(dǎo)的小鼠毛細血管通透性增加效果更好。

    表5 抗感敗毒口服液對醋酸致毛細血管透性增加的影響

    4 討論

    當(dāng)動物注入某些化學(xué)物質(zhì)時,由于其體溫調(diào)節(jié)過程發(fā)生障礙而引起發(fā)熱。2,4-二硝基苯酚是一種代謝刺激劑,注入小鼠體內(nèi)可引起產(chǎn)熱增加,造成機體發(fā)熱。本試驗選用給小鼠注射2,4-二硝基苯酚造模。結(jié)果表明,在注射2,4-二硝基苯酚溶液后1.5 h,抗感敗毒口服液低、中、高劑量組和藥物對照組體溫均顯著低于模型對照組(P<0.05),提示抗感敗毒口服液在1.5 h后開始明顯發(fā)揮解熱作用。

    疼痛是機體受到不良刺激或損傷后產(chǎn)生的信號和反應(yīng)。鎮(zhèn)痛的研究常采用動物模型對試驗動物施加傷害性刺激引起疼痛反應(yīng),通過監(jiān)測藥物對痛反應(yīng)的影響以評價藥效。本試驗選用化學(xué)方法醋酸扭體試驗及物理方法小鼠熱板舔足反應(yīng)評價抗感敗毒口服液的鎮(zhèn)痛效果。通過對上述模型的觀察,抗感敗毒口服液呈劑量依賴性抑制醋酸引起的疼痛反應(yīng),減少小鼠的扭體次數(shù),且各劑量組均能延長小鼠熱板舔足反應(yīng)潛伏期,并隨著時間的延長,增加痛閾值的提高率。結(jié)果表明,抗感敗毒口服液對物理、化學(xué)刺激造成的疼痛均有明顯的改善,提示抗感敗毒口服液具有良好的鎮(zhèn)痛作用。

    炎癥是具有血管系統(tǒng)的生物機體對損傷因子所發(fā)生的復(fù)雜的防御機制。本試驗用二甲苯、醋酸作為致炎致痛因子,觀察了抗感敗毒口服液對炎癥早期試驗性滲出、腫脹、疼痛的影響。結(jié)果提示,抗感敗毒口服液高、中、低組均能對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有顯著抑制作用,對急性炎癥有效;高劑量的抗感敗毒口服液能顯著抑制醋酸誘導(dǎo)的小鼠毛細血管通透性增加。

    本試驗藥物抗感敗毒口服液由黃芩、連翹、梔子、板藍根、野菊花、貫眾配制加工而成。已有研究表明,黃芩的有效成分黃芩素和黃芩苷可以通過干擾花生四烯酸的代謝通路而發(fā)揮解熱鎮(zhèn)痛抗炎的作用[1],黃芩素和黃芩苷及連翹揮發(fā)油對多種中、早期急性炎癥模型和晚期炎癥模型均有明顯的抗炎作用[1,2],梔子中的生藥活性成分環(huán)烯醚萜類化合物及板藍根具有解熱鎮(zhèn)痛、抗菌消炎的藥理作用[3-4],野菊花及貫眾具有抗炎鎮(zhèn)痛作用[5-6]。本試驗結(jié)果與組方功能分解相一致,綜上所述,抗感敗毒口服液具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎作用,為臨床用藥提供了試驗依據(jù)。

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    A

    0529-6005(2017)01-0106-03

    2016-05-18

    四川省科技廳項目苗子工程(035Z1143);四川農(nóng)業(yè)大學(xué)課外科研興趣項目(04051434)

    胡超群(1994—),女,本科生,就讀于中藥藥理學(xué)專業(yè),E-mail:992785691@qq.com

    舒剛,E-mail:dyysg2005@sicau.edu.cn

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