養(yǎng)殖大黃魚越冬前后消化道及肝臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化

王友發(fā)，張丹丹，沈偉良，吳雄飛，竺俊全*

(1. 寧波大學(xué) 教育部應(yīng)用海洋生物技術(shù)重點實驗室，浙江 寧波 315211；2. 寧波市海洋與漁業(yè)研究院，浙江 寧波 315012)

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養(yǎng)殖大黃魚越冬前后消化道及肝臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化

王友發(fā)1，張丹丹1，沈偉良2，吳雄飛2，竺俊全*1

(1. 寧波大學(xué) 教育部應(yīng)用海洋生物技術(shù)重點實驗室，浙江 寧波 315211；2. 寧波市海洋與漁業(yè)研究院，浙江 寧波 315012)

為了解越冬期饑餓對大黃魚消化系統(tǒng)的影響，采用解剖及組織學(xué)顯微與亞顯微技術(shù)觀察研究了象山港網(wǎng)箱養(yǎng)殖的大黃魚越冬前后消化道及肝臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。大黃魚越冬后肝臟重比越冬前顯著下降(P<0.05)，肝指數(shù)(HSI)比越冬前極顯著降低(P<0.01)。顯微觀察顯示，越冬后食道皺襞高度顯著增高(P<0.05)，黏膜下層厚度極顯著減小(P<0.01)。胃黏膜下層厚度在越冬后極顯著增加(P<0.01)，肌層厚度在越冬后顯著減小(P<0.05)；胃腺細(xì)胞越冬后收縮，間隙變大。越冬前，前腸絨毛間隙小，越冬后，前腸絨毛間隙變大，上皮細(xì)胞層高度極顯著降低(P<0.01)，前腸杯狀細(xì)胞長徑在越冬后極顯著變小(P<0.01)；中腸的皺襞高度和管腔直徑在越冬后顯著減小(P<0.05)，皺襞寬度在越冬后極顯著減小(P<0.01)，漿膜厚度在越冬后極顯著增大(P<0.01)；后腸杯狀細(xì)胞長徑和短徑在越冬后極顯著減小(P<0.01)，漿膜厚度在越冬后顯著增大(P<0.05)。越冬前，肝臟內(nèi)肝小葉分界不明顯，肝細(xì)胞內(nèi)脂滴較多；越冬后，肝臟內(nèi)肝小葉分界明顯，肝細(xì)胞內(nèi)脂滴減少。透射電鏡觀察顯示，越冬前肝細(xì)胞內(nèi)脂滴小而數(shù)量多，細(xì)胞核周圍粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá)；而越冬后脂滴變大、數(shù)量明顯減少，細(xì)胞核周圍粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)亦減少。研究表明，養(yǎng)殖大黃魚幼魚越冬后消化道及肝組織結(jié)構(gòu)發(fā)生了一定變化，肝臟中脂質(zhì)被消耗，肝細(xì)胞蛋白合成作用減弱。建議在越冬后加強對大黃魚的投飼管理，促進消化道及肝臟結(jié)構(gòu)和功能恢復(fù)正常。

大黃魚；越冬；消化道；肝臟

0 引言

饑餓作為一種脅迫狀態(tài)普遍存在于多數(shù)魚類生命活動中。近年來有關(guān)饑餓對魚類影響的研究主要涉及生長[1-3]、血液生理生化[4-5]、消化酶活力[6]、消化道組織結(jié)構(gòu)[7-8]等。饑餓導(dǎo)致魚類消化系統(tǒng)組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)變化主要表現(xiàn)為食道黏膜細(xì)胞萎縮[9]、胃黏膜與腺層分離[10]、胃腺細(xì)胞收縮[11-12]、腸絨毛變低[10]和上皮細(xì)胞層高度下降[13]、肝組織變疏松和肝細(xì)胞界限模糊[14]等。魚類越冬過程中的饑餓脅迫狀態(tài)亦廣泛存在，而迄今為止有關(guān)越冬對魚類消化系統(tǒng)影響的研究較少。

大黃魚Larimichthyscrocea隸屬鱸形目Perciformes、石首魚科Sciaenidae、黃魚屬Larimichthys，為我國重要的海產(chǎn)經(jīng)濟魚類及增養(yǎng)殖種[15]。其主要養(yǎng)殖方式為近海網(wǎng)箱養(yǎng)殖，越冬存在低溫耐受不穩(wěn)定問題[16]。大黃魚越冬期間不攝食而處于饑餓脅迫狀態(tài)，雖然新陳代謝水平很低，但仍需緩慢消耗自身儲存的能源物質(zhì)。由于大黃魚在浙江沿海網(wǎng)箱養(yǎng)殖越冬時間較長，長時間越冬饑餓會導(dǎo)致組織器官結(jié)構(gòu)變化甚至損傷。本研究擬以象山港網(wǎng)箱養(yǎng)殖的大黃魚幼魚為研究對象，用解剖及組織學(xué)顯微與亞顯微技術(shù)觀察研究其越冬前后消化道及肝臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，旨在揭示越冬期饑餓對大黃魚消化系統(tǒng)結(jié)構(gòu)的影響，為將來深入研究大黃魚消化系統(tǒng)生理學(xué)積累基礎(chǔ)數(shù)據(jù)；在生產(chǎn)上，可為大黃魚越冬后的投餌管理提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

實驗用魚取自于象山港網(wǎng)箱(網(wǎng)箱規(guī)格為3 m×3 m×3 m)養(yǎng)殖的大黃魚(魚體規(guī)格大小基本一致)，分別于越冬開始日(2014年12月22日)及結(jié)束日(2015年3月14日)在同一網(wǎng)箱內(nèi)隨機取10尾大黃魚用于實驗。

1.2 方法

先測量魚體長，然后解剖取肝臟稱重并去內(nèi)臟團測凈體重。取食道、胃、腸及肝臟組織，切成小段或小塊，用Bouin氏液固定24 h后，酒精梯度濃度脫水、二甲苯透明、浸蠟后，組織包埋機包埋，輪轉(zhuǎn)式切片機連續(xù)切片(厚度為7 μm)，常規(guī)H.E染色，中性樹膠封片，于Olympus-BX51顯微鏡下觀察與拍照，用Image-Pro Plus 6.0軟件顯微測量消化道組織學(xué)形態(tài)參數(shù)[7, 17]，每個樣品隨機選擇3個視野，每個視野下測定5個平行數(shù)據(jù)，每個參數(shù)做60個重復(fù)。另取部分肝臟組織，切成1 mm3小塊，于2.5%戊二醛4 ℃下固定2 d，磷酸緩沖液沖洗后，再經(jīng)1%鋨酸固定2 h，酒精梯度濃度脫水，環(huán)氧樹脂Epon 812滲透并包埋，LKB-Ⅲ型切片機超薄切片，醋酸鈾及檸檬酸鉛染色，日立H-7650型透射電子顯微鏡觀察及拍照。

利用SPSS 13.0軟件處理實驗數(shù)據(jù)，用單因素方差分析(One-Way ANOVA)檢驗各組數(shù)據(jù)差異顯著性，統(tǒng)計結(jié)果以平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差(Mean ± SD)表示，當(dāng)P<0.05時差異顯著，P<0.01時差異極顯著。肝指數(shù)HSI%=(肝臟重/凈體重)╳100%。

2 結(jié)果

2.1 越冬前后體重、肝臟重及肝指數(shù)的變化

越冬前大黃魚凈體重為148.0±19.9 g，體長為21.58±0.77 cm；越冬后大黃魚凈體重為144.2±18.7 g，體長為21.20±0.91 cm；越冬后凈體重比越冬前減小，但差異不顯著(P>0.05)。越冬后肝臟重為2.15±0.75 g，較越冬前的3.03±0.75 g顯著下降(P<0.05)。越冬后肝指數(shù)為(1.47±0.38)%，較越冬前的(2.03±0.32)%極顯著降低(P<0.01)。

2.2 越冬前后消化道形態(tài)結(jié)構(gòu)變化

大黃魚消化道主要由食道、胃及腸構(gòu)成，從內(nèi)到外均由黏膜層、黏膜下層、肌層及漿膜構(gòu)成，且內(nèi)表面具突起的皺襞。

2.2.1 越冬前后食道形態(tài)結(jié)構(gòu)變化

對大黃魚越冬前后食道組織學(xué)形態(tài)參數(shù)統(tǒng)計分析顯示(表1)，皺襞高度在越冬后增高，與越冬前相比差異顯著(P<0.05)；食道黏膜下層厚度在越冬后明顯減小，與越冬前相比差異極顯著(P<0.01)；越冬前后皺襞寬度、肌層厚度及漿膜厚度與越冬前相比差異不顯著(P>0.05)。食道的其它組織結(jié)構(gòu)未見明顯變化。

表1 大黃魚越冬前后食道組織學(xué)形態(tài)參數(shù)比較

注：*表示組間差異顯著(P<0.05)，**表示組間差異極顯著(P<0.01)

2.2.2 越冬前后胃形態(tài)結(jié)構(gòu)變化

對大黃魚越冬前后胃組織學(xué)形態(tài)參數(shù)統(tǒng)計分析顯示(表2)，皺襞高度和皺襞寬度在越冬后減小，與越冬前相比差異不顯著(P>0.05)；黏膜下層厚度在越冬后增加，與越冬前相比差異極顯著(P<0.01)；肌層厚度在越冬后減小，與越冬前相比差異顯著(P<0.05)；漿膜厚度在越冬前后差異不顯著(P>0.05)。

表2 大黃魚越冬前后胃組織學(xué)形態(tài)參數(shù)比較

注：*表示組間差異顯著(P<0.05)，**表示組間差異極顯著(P<0.01)

大黃魚胃壁上皮細(xì)胞層下具有發(fā)達(dá)的胃腺。越冬前，胃腺近圓形，胃腺細(xì)胞形態(tài)正常，間隙小而不明顯(圖1a)；越冬后，胃腺變橢圓形，胃腺細(xì)胞收縮，間隙變大而明顯(圖1b)。

圖1 越冬前后大黃魚胃及前腸形態(tài)結(jié)構(gòu)變化Fig.1 Morphological changes of stomach and foregut of L. crocea before and after over-winteringa—越冬前大黃魚胃，示胃腺(×1 000)；b—越冬后大黃魚胃，示胃腺 (×1 000)；c—越冬前大黃魚前腸(×40)；d—越冬后大黃魚前腸(×40)；e—越冬前大黃魚前腸，示腸絨毛(×1 000)；f—越冬后大黃魚前腸，示腸絨毛(×1 000)BB—紋狀緣，BC—血細(xì)胞，C—胃腺腔，GC—杯狀細(xì)胞，GG—胃腺，GGC—胃腺細(xì)胞，GI—前腸絨毛間隙，GS—胃腺細(xì)胞間隙，L—前腸上皮層高度，LP—固有膜，SCE—單層柱狀上皮a—stomach of L. crocea before over-wintering, gastric gland (×1 000); b—stomach of L. crocea after over-wintering, gastric gland (×1 000); c—foregut of L. crocea before over-wintering (×40); d—foregut of L. crocea after over-wintering (×40); e—foregut of L. crocea before over-wintering, villus (×1 000); f—foregut of L. crocea after over-wintering, villus (×1 000)BB—striated border，BC—blood cell，C—gastric cavity，GC—goblet cell，GG—gastric glan，GGC—gastric glan cell，GI—gaps of villus in foregut，GS—gaps of gastric glan cell，L—height of epithelial cell in foregut，LP—lamina propria，SCE—simple columnar epithelium

2.2.3 越冬前后腸形態(tài)結(jié)構(gòu)變化

對大黃魚越冬前后腸組織學(xué)形態(tài)參數(shù)統(tǒng)計分析顯示(表3)，前腸的皺襞高度、皺襞寬度、肌層厚度、漿膜厚度和管腔直徑在越冬后減小，黏膜下層厚度和杯狀細(xì)胞短徑在越冬后增大，但與越冬前相比差異均不顯著(P>0.05)；杯狀細(xì)胞長徑和上皮層高度在越冬后變小，與越冬前相比差異極顯著(P<0.01)。中腸的皺襞寬度在越冬后減小，與越冬前相比差異極顯著(P<0.01)；皺襞高度和管腔直徑在越冬后均減小，與越冬前相比差異顯著(P<0.05)；杯狀細(xì)胞長徑和肌層厚度在越冬后增大，杯狀細(xì)胞短徑和黏膜下層厚度在越冬后減小，但與越冬前相比差異均不顯著(P>0.05)；漿膜厚度在越冬后增大，與越冬前相比差異極顯著(P<0.01)。后腸皺襞高度、黏膜下層厚度、肌層厚度和管腔直徑在越冬后減小，皺襞寬度在越冬后增大，但與越冬前相比差異均不顯著(P>0.05)；杯狀細(xì)胞長徑和短徑在越冬后減小，與越冬前相比差異極顯著(P<0.01)；漿膜厚度在越冬后增大，與越冬前相比差異顯著(P<0.05)。

越冬前，前腸腸絨毛間隙較小(圖1c)，上皮層高度較高(圖1e)；越冬后，前腸腸絨毛間隙增大(圖1d)，上皮層高度降低(圖1f)。

表3 大黃魚腸道越冬前后組織學(xué)形態(tài)參數(shù)比較

注：*表示組間差異顯著(P<0.05)，**表示組間差異極顯著(P<0.01)；空白處表示無數(shù)據(jù)

2.3 越冬前后肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)變化

大黃魚肝臟為實心腺體，外被單層上皮細(xì)胞和結(jié)締組織，肝小葉為其基本結(jié)構(gòu)單位。顯微觀察顯示，胰腺組織彌散分布于肝實質(zhì)中(圖2a)，小葉間膽管(圖2b)、小葉內(nèi)膽管(圖2c)和肝血竇明顯可見(圖2d)；胰腺組織內(nèi)可見動、靜脈(圖2e)。越冬前，大黃魚肝臟內(nèi)肝小葉間隙小而界限不明顯(圖2f)，肝細(xì)胞內(nèi)脂滴區(qū)明顯(圖2h)；越冬后，肝臟內(nèi)肝小葉間隙變大且界限明顯(圖2g)，肝細(xì)胞內(nèi)脂滴區(qū)比越冬前減小，肝細(xì)胞界限變得模糊(圖2i)。胰腺組織結(jié)構(gòu)越冬前后未見明顯變化。

圖2 大黃魚越冬前后肝臟顯微結(jié)構(gòu)變化Fig.2 The microstructure of liver of L. crocea and its histological changes before and after over-winteringa—大黃魚肝臟，示肝組織、胰腺組織(×100)；b—大黃魚肝組織，示小葉間膽管(×400)；c—大黃魚肝組織，示小葉內(nèi)膽管(×1 000)；d—大黃魚肝臟，示胰腺組織(×1 000)；e—胰腺組織，示血管(×1 000)；f—越冬前肝臟，示肝小葉間隙(×400)；g—越冬后肝臟，示肝小葉間隙(×400)；h—越冬前肝臟，示肝血竇及肝細(xì)胞(×1 000)；i—越冬后肝臟，示肝血竇及肝細(xì)胞(×1 000)BC—血細(xì)胞，GH—肝小葉間隙，HN—肝細(xì)胞核，HT—肝組織，LBD—小葉間膽管，IBD—小葉內(nèi)膽管，LI—脂滴，LA—動脈，LV—靜脈，PT—胰腺組織，S—肝血竇a—liver of L. crocea, liver and pancreatic tissue (×100); b—liver tissue of L. crocea, interlobular bile duct (×400); c—liver tissue of L. crocea, innerlobular bile duct (×1 000); d—liver of L. crocea, pancreatic tissue (×1 000); e—pancreatic tissue, blood vessel (×1 000); f—liver of L. crocea before over-wintering, gaps of the liver lobule boundary (×400); g—liver of L. crocea after over-wintering, gaps of the liver lobule boundary (×400); h—liver of L. crocea before over-wintering, sinusoids and liver cells (×1 000); i—liver of L. crocea after over-wintering, sinusoids and liver cells (×1 000)BC—blood cell，GH—gaps of the liver lobule boundary，HN—nuclear of liver cell，HT—liver tissue，LBD—interlobular bile duct，IBD—innerlobular bile duct，LI—fat droplets，LA—artery，LV—vein，PT—pancreatic tissue，S—sinusoid

透射電鏡觀察顯示，大黃魚肝細(xì)胞呈多邊形(圖3a)，核多偏位，核仁明顯，核邊緣多凹凸不平(圖3b)；細(xì)胞質(zhì)中含豐富的不同大小的脂滴，占據(jù)約55% ～ 70%的胞內(nèi)空間(圖3b)，線粒體分布于脂滴之間及核周圍，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)多分布于核周圍的胞質(zhì)中，糖原顆粒在胞質(zhì)中呈散狀或聚集分布(圖3c)。膽小管由相鄰肝細(xì)胞質(zhì)膜向胞內(nèi)凹陷形成，有些膽小管腔內(nèi)可見肝細(xì)胞表面的微絨毛，膽小管周圍肝細(xì)胞為緊密連接，防止膽汁外流入肝血竇內(nèi)(圖3d)。肝血竇為肝小葉內(nèi)一種特殊的毛細(xì)血管，呈網(wǎng)狀分布，血竇內(nèi)可見紅細(xì)胞。肝細(xì)胞與肝血竇之間的間隙稱為竇周間隙，其內(nèi)可見豐富的由肝細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)突起形成的微絨毛(圖3e)。膽小管、肝血竇等的超微結(jié)構(gòu)越冬前后均未表現(xiàn)出明顯差異。肝細(xì)胞內(nèi)，越冬前，脂滴小而數(shù)量多(圖3b)，細(xì)胞核周圍粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá)(圖3c)；而越冬后，脂滴變大，數(shù)量明顯減少，總量也減少(圖3f)，細(xì)胞核周圍粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變得不發(fā)達(dá)(圖3g)。

3 討論

3.1 越冬期饑餓對大黃魚消化道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

本研究表明，大黃魚幼魚越冬后胃黏膜下層厚度極顯著增加(P<0.01)，肌層厚度顯著減小，胃腺形態(tài)改變，胃腺細(xì)胞收縮、間隙變大，表明越冬期饑餓引起了大黃魚幼魚胃腺組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)變化。據(jù)研究，饑餓15 d的美國紅魚Sciaenopsocellatus[11]幼魚出現(xiàn)胃腺細(xì)胞收縮、胃腺結(jié)構(gòu)變不完整等變化；饑餓15 d的日本黃姑魚Nibeajaponica[18]幼魚表現(xiàn)出胃腺細(xì)胞收縮等變化；宋昭彬 等[10]在饑餓對南方鲇Silurumeridlionalis仔稚魚消化系統(tǒng)影響的研究中發(fā)現(xiàn)，雖然胃腺在饑餓過程中也伴隨著黏膜和腺層分離，上皮細(xì)胞層變低，胃腺收縮，胃腺間、胃腺與結(jié)締組織間隙增大等組織結(jié)構(gòu)變化，但其認(rèn)為胃腺在魚消化過程中具有相當(dāng)重要的作用，即使在饑餓條件下仍然可以在不同程度上保持結(jié)構(gòu)和功能完整性。大黃魚幼魚越冬饑餓條件下可以一定程度保持其形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的完整性，但越冬期長時間(約92 d)饑餓條件下胃部分組織形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變。

越冬饑餓后，大黃魚幼魚前腸腸絨毛間隙增大，上皮層高度變低；中腸皺襞高度越冬后顯著降低，皺襞寬度越冬后極顯著下降，中腸腸絨毛收縮明顯。據(jù)研究，施氏鱘Acipenserschrenckii[13]幼魚在22±2 ℃水溫條件下饑餓21 d后，十二指腸出現(xiàn)絨毛變稀疏、斷裂等變化。雜交鱘Husohuso♀×Acipenserbaeri♂[14]仔魚在20 ～ 24 ℃水溫條件下饑餓21 d后，十二指腸及瓣腸上皮細(xì)胞層高度下降。哲羅魚Huchotaimen[9]仔魚在10 ～ 12 ℃水溫條件下饑餓20 d后，腸上皮細(xì)胞層高度下降；饑餓24 d后，腸微絨毛不整齊，個別地方出現(xiàn)萎縮、斷裂和脫落等現(xiàn)象。本研究中的大黃魚越冬后腸管形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生了一定變化，但未見腸絨毛萎縮、斷裂等損傷現(xiàn)象，表明越冬饑餓對大黃魚腸道組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)的影響程度比上述常溫下饑餓的魚類輕。

圖3 大黃魚肝臟越冬前后超微結(jié)構(gòu)變化Fig.3 The ultrastructure of liver of L. crocea and its histological changes before and after over-winteringa—大黃魚肝臟，示肝細(xì)胞(×4 000)；b—大黃魚肝細(xì)胞，示肝細(xì)胞核、脂滴(×8 000)；c—大黃魚肝細(xì)胞，示胞內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體(×30 000)；d—大黃魚肝細(xì)胞間膽小管(×20 000)；e—大黃魚肝臟，示肝血竇、內(nèi)皮細(xì)胞(×8 000)；f—越冬后大黃魚肝細(xì)胞，示胞內(nèi)脂滴、膽小管(×8 000)；g—越冬后大黃魚肝細(xì)胞，示胞內(nèi)脂滴、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(×20 000)BI—膽小管，BC—血細(xì)胞，EN—內(nèi)皮細(xì)胞，GL—糖原顆粒，LI—脂滴，M—線粒體，MV—微絨毛，N—肝細(xì)胞核，NE—紅細(xì)胞核，NC—內(nèi)皮細(xì)胞核，NP—肝細(xì)胞核孔，NU—肝細(xì)胞核仁，RER—粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，S—肝血竇a—liver of L. crocea, liver cell (×4 000); b—liver cells of L. crocea, nuclear of liver cell and fat droplets (×8 000); c—liver cells of L. crocea, rough endoplasmic reticulum and mitochondrion (×30 000); d—bile canaliculi between liver cells (×20 000); e—liver of L. crocea, sinusoid and endothelial cell (×8 000); f—liver cells of L. crocea after over-wintering, fat droplets in liver cells and bile canaliculi (×8 000); g—liver cells of L. crocea after over-wintering, fat droplets in liver cells and rough endoplasmic reticulum (×20 000)BI—bile canaliculi，BC—blood cell，EN—endothelial cell，GL—glycogen granule，LI—fat drolpets，M—mitochondrion，MV—microvillus，N—nuclear of liver cell，NE—nuclear of erythrocyte，NC—nuclear of endothelial cell，NP—nuclear pore，NU—nucleolus，RER—rough endoplasmic reticulum，S—sinusoid

3.2 越冬期饑餓對大黃魚肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

大黃魚越冬后肝小葉間隙大而明顯，肝細(xì)胞界限變得模糊，肝細(xì)胞內(nèi)脂滴區(qū)變小。據(jù)報道，南方鲇[10]稚魚饑餓4 d后，肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)消失，索狀排列明顯；饑餓15 d后，肝細(xì)胞呈雜亂排列，有的以不連續(xù)的短索排列。卵形鯧鲹Trachinotusovatus[7]幼魚饑餓3 d和6 d后肝細(xì)胞體積縮小、胞內(nèi)脂肪減少；饑餓9 d后肝組織變得疏松、細(xì)胞界限模糊。饑餓后的美國紅魚[11]、日本黃姑魚[18]和銀鯧Pampusargenteus[12]幼魚肝臟均出現(xiàn)肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)減少的現(xiàn)象，銀鯧幼魚饑餓9 d后還出現(xiàn)細(xì)胞界限模糊、不易分辨、胞質(zhì)皺縮等現(xiàn)象?？梢姡煌N魚在不同饑餓試驗條件下肝組織結(jié)構(gòu)變化特征有相同也有不同。

大黃魚越冬后肝細(xì)胞中脂滴明顯減少，表明脂類是其越冬期間主要的能量來源[19]。LEATHLAND et al[20]認(rèn)為硬骨魚類的脂滴區(qū)大小與食性關(guān)系密切，其中肉食性魚類具有明顯的脂滴區(qū)。大黃魚為典型的肉食性魚類，其肝細(xì)胞內(nèi)存在非常明顯的脂滴區(qū)，與鱖魚Sinipercachuatsi[19]肝細(xì)胞中脂滴區(qū)相似。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與核糖體共同形成的復(fù)合結(jié)構(gòu)，其主要功能是合成分泌型蛋白和多種膜蛋白[21]；大黃魚越冬前肝細(xì)胞核及線粒體周圍粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)排列密集，越冬后肝細(xì)胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)則表現(xiàn)出排列稀疏或明顯較少的現(xiàn)象，表明越冬后肝細(xì)胞的蛋白合成作用減弱[22]。

4 小結(jié)

養(yǎng)殖大黃魚幼魚自然越冬后消化道及肝組織結(jié)構(gòu)發(fā)生了一定變化，肝臟中儲存的脂類物質(zhì)被消耗，肝細(xì)胞蛋白合成作用減弱。因此，建議在越冬后加強對大黃魚的投飼管理，促進消化道及肝臟結(jié)構(gòu)和功能恢復(fù)正常。

[1] QIAO Qiu-shi, JIANG Guang-zhen, LIU Wen-bin, et al. The effects of the cyclicstarvation-refeeding on growth, body compositon and digestive enzyme activities inCyprinuscarpiovar. Jian[J]. Oceanologia et Limnologia Sinica,2011,42(3):367-373. 喬秋實,蔣廣震,劉文斌,等.周期性饑餓再投喂對建鯉(Cyprinuscarpiovar. Jian)生長、體組成、消化酶的影響[J].海洋與湖沼,2011,42(3):367-373.

[2] SONG Guo, PENG Shi-ming, SUN Peng, et al. Effects of starvation, refeeding, and feeding frequency on growth and digestive enzyme activity ofOplegnathusfasciatus[J]. Journal of Fishery Sciences of China,2011,18(6):1 269-1 277. 宋國,彭士明,孫鵬,等.饑餓與再投喂及投喂頻率對條石鯛幼魚生長和消化酶活力的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2011,18(6):1 269-1 277.

[3] LONG Zhang-qiang, PENG Shi-ming, CHEN Li-qiao, et al. Effects of starvation and re-feeding on body weight，tissue biochemical composition and hepatic digestive enzyme activity in juvenile black seabream,Acanthopagrusschlegeli[J]. Journal of Fishery Sciences of China,2008,15(4):606-613. 龍章強,彭士明,陳立僑,等.饑餓與再投喂對黑鯛幼魚體質(zhì)量變化、生化組成及肝臟消化酶活性的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2008,15(4):606-613.

[4] QIAN Yun-xia, CHEN Hui-qun, SUN Jiang-fei, et al. Effects of starvation on hematological and blood biochemical indices in culturedLateolabraxjaponicus[J]. Journal of Fishery Sciences of China,2002,9(2):133-137. 錢云霞,陳惠群,孫江飛.饑餓對養(yǎng)殖鱸魚血液生理生化指標(biāo)的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2002,9(2):133-137.

[5] CHENG Chao, SHI Guang-mei. Effects of starvation on blood physiobiochemical indices and hemorheological properties ofCarassiusauratus[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin,2008,24(1):516-519. 程超,施光美.饑餓對鯽魚血液生理生化指標(biāo)和流變學(xué)性質(zhì)的影響[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2008,24(1):516-519.

[6] YANG Dai-qin, CHEN Fang, RUAN Guo-liang, et al. Effects of starvation on digestive enzyme activities ofMonopterusalbus[J]. Chinese Journal of Applied Ecology,2007,18(5):1 167-1 170. 楊代勤,陳芳,阮國良,等.饑餓對黃鱔消化酶活性的影響[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報,2007,18(5):1 167-1 170.

[7] OU You-jun, SU Hui, LI Jia-er, et al. Effects of starvation stress on the histological structure of the digestive organs for juveniles ofTrachinotusovatus[J]. Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Sunyatseni,2013,52(1):100-110. 區(qū)又君,蘇慧,李加兒,等.饑餓脅迫對卵形鯧鲹幼魚消化器官組織學(xué)的影響[J].中山大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2013,52(1):100-110.

[8] WANG Yan, JI Yan-bin, GAO Jin-wei, et al. Effects of starvation on histological structure of digestive tract ofParalichthyslethostigma[J]. Journal of Tianjin Agricultural University,2015,22(1):10-14. 王妍,季延濱,高金偉,等.饑餓對漠斑牙鲆消化道組織結(jié)構(gòu)的影響[J].天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報,2015,22(1):10-14.

[9] ZHANG Yong-quan, LIU Yi, XU Wei, et al. The effects of starvation on morphology, behavior and digestive system in larval TaimenHuchotaimen[J]. Journal of Dalian Ocean University,2010,25(4):330-336. 張永泉,劉奕,徐偉,等.饑餓對哲羅魚仔魚形態(tài)、行為和消化器官結(jié)構(gòu)的影響[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報,2010,25(4):330-336.

[10] SONG Zhao-bin, HE Xue-fu. Effects of starbation on morphology and histology of digestive system in larval and juvenileSilurusmeridionalisChen[J]. Acta Hydrobiologice Sinica,2000,24(2):155-160. 宋昭彬,何學(xué)福.饑餓對南方鲇仔稚魚消化系統(tǒng)的形態(tài)和組織學(xué)影響[J].水生生物學(xué)報,2000,24(2):155-160.

[11] LI Xia, JIANG Zhi-qiang, TAN Xiao-zhen, et al. Effects of starvation and refeeding on histology of digestive system inSciaenopsocellatus[J]. Journal of Fishery Sciences of China,2002,9(3):211-214. 李霞,姜志強,譚曉珍,等.饑餓和再投喂對美國紅魚消化器官組織學(xué)的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2002,9(3):211-214.

[12] GU Jiang-wen. Effects of starvation on biochemical composition and digestive system histology in juvenilePampusargenteus[D]. Ningbo：Ningbo University,2011. 谷江穩(wěn).饑餓脅迫對銀鯧幼魚體成分及消化系統(tǒng)組織學(xué)的影響[D].寧波:寧波大學(xué),2011.

[13] GAO Lu-jiao, CHEN Li-qiao, ZHAO Xiao-qin, et al. Starvation and compensatory growth ofAcipenserschrenckiijuveniles——Effects on digestive organs structure and digestive enzymes activity[J]. Journal of Fishery Sciences of China,2004,11(5):413-419. 高露姣,陳立僑,趙曉勤,等.施氏鱘幼魚的饑餓和補償生長研究——對消化器官結(jié)構(gòu)和酶活性的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2004,11(5):413-419.

[14] GAO Lu-jiao, CHEN Li-qiao, SONG Bing, et al. Effect of starvation on digestive system development of hybrid sturgeon (Husohuso♀×Acipenserbaeri♂) larvae[J]. Journal of Shanghai Fisheries University,2006,15(4):442-447. 高露姣,陳立僑,宋兵,等.饑餓對雜交鱘消化系統(tǒng)發(fā)育的影響[J].上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報,2006,15(4):442-447.

[15] CHEN Fei. Research on industrialization development of large yellow croaker’ s cultivation in Zhejiang [D]. Zhoushan：Zhejiang Ocean University,2011. 陳飛.浙江大黃魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)化發(fā)展研究[D].舟山:浙江海洋學(xué)院,2011.

[16] YI Xiang-hua, YIN Rong-xiang, WU Lin-zhong. Wintering experiment on large yellow croaker[J]. Fisheries Science & Technology Information,1998,25(6):261-263. 伊祥華,忻榮祥,吳林忠.大黃魚越冬試驗[J].水產(chǎn)科技情報,1998,25(6):261-263.

[17] SILVIA M L, ROSA B A, SILVIA N M, et al. Carob seed germ meal as a partial substitute in gilthead sea bream (Sparusaurata) diets: Amino acid retention, digestibility, gut and liver histology[J]. Aquaculture,2012,338-341:124-133.

[18] LOU Bao, SHI Hui-lai, LUO Ji-an, et al. Effects of starvation and refeeding on oxygen consumption rate and histology of digestive system in Japanese croaker (Nibeajaponica)[J]. Marine Fisheries,2007,29(2):140-147. 樓寶,史會來,駱季安,等.饑餓和再投喂對日本黃姑魚代謝率和消化器官組織學(xué)的影響[J].海洋漁業(yè),2007,29(2):140-147.

[19] FANG Zhan-qiang, ZHENG Wen-biao, FU Lu-di. Observation on the ultrastructural changes of the liver ofSinipercachuatsiin different breeding seasons[J]. Acta Hydrobiologice Sinica,2003,27(6):607-613. 方展強,鄭文彪,符路娣.不同生殖期鱖肝臟超微結(jié)構(gòu)變化的觀察[J].水生生物學(xué)報,2003,27(6):607-613.

[20] LEATHLAND J F, SONSTEGARD R A. Ultrastructure of the liver of lakeEriecohosalmon from post-hatching until spawning[J]. Cytobios,1988,54:195-208.

[21] ZHAI Zhong-he, WANG Xi-zhong, DING Ming-xiao, et al. Cell biology[M]. Beijing: China Higher Education Press,2000:168-170. 翟中和,王喜忠,丁明孝,等.細(xì)胞生物學(xué)[M].北京:高等教育出版社,2000:168-170.

Morphological changes of digestive tract and liver ofLarimichthyscroceabefore and after over-wintering

WANG You-fa1, ZHANG Dan-dan1, SHEN Wei-liang2, WU Xiong-fei2, ZHU Jun-quan*1

(1.KeyLaboratoryofAppliedMarineBiotechnologybytheMinistryofEducation,NingboUniversity,Ningbo315211,China; 2.NingboMarineandFisheriesResearchInstitute,Ningbo315012,China)

In order to know whether there are impacts of the digestive system during over-wintering stage inLarimichthyscrocea, some anatomical, histological, microscopic and submicroscopic technologies were used to study the changes of morphological structure of digestive tract and liver for the cultured large yellow croaker in Xiangshan Bay. The results show that liver weight is significantly decreased (P<0.05) and liver index (HSI) is also extremely decreased (P<0.01) after over-wintering. By microscopic observation, the thickness of wall becomes higher (P<0.05) and submucosa becomes thinner extremely (P<0.01) in esophagus after over-wintering. The thickness of submucosa of stomach is increased extremely (P<0.01) and muscle is reduced significantly (P<0.05) after over-wintering. Furthermore, gastric gland cells is shrinked and the cells’ gaps become bigger after over-wintering. Before over-wintering, the gaps of villus in foregut are short, but it become larger after over-wintering. The height of epithelial cell of foregut is reduced extremely (P<0.01) and the long diameters of goblet become smaller extremely (P<0.01) after over-wintering. The height of wall and the diameters of lumen in the midgut are reduced significantly (P<0.05) after over-wintering. The width of wall in the midgut is reduced extremely (P<0.01) but the thickness of serous is increased significantly (P<0.01) after over-wintering. The long and short diameters of goblet cells in the hindgut become extremely smaller (P<0.01). While the thickness of serous in the hindgut is increased significantly (P<0.05). Before over-wintering, the gaps of the liver lobule boundary are not obvious and there are lots of fat droplets in the liver cells. However, after over-wintering, the liver lobule boundary becomes obvious and the fat droplets are decreased. Transmission electron microscope show that the fat droplets are small but abundant in the liver cells and the rough endoplasmic reticulum are developed around the nuclear before over-wintering. While after over-wintering, the fat droplets become bigger and the number of droplets are reduced in the liver cells. Moreover, the rough endoplasmic reticulum is reduced too. This research shows that histological structures of digestive tract and liver of large yellow croaker juveniles have been changed after over-wintering. The lipid of liver has been consumed and the synthesis of protein of liver cells has been weakened. It is proposed that the staff should strengthen the management of feeding lager yellow croaker for restoring the structure and functions of digestive tract and liver.

Larimichthyscrocea; over-wintering; digestive tract; liver

10.3969/j.issn.1001-909X.2016.04.008.WANG You-fa, ZHANG Dan-dan, SHEN Wei-liang，et al. Morphological changes of digestive tract and liver ofLarimichthyscroceabefore and after over-wintering[J]. Journal of Marine Sciences, 2016,34(4):63-71, doi:10.3969/j.issn.1001-909X.2016.04.008.

2016-01-23

2016-06-30

寧波市科技計劃重大項目資助(2015C110005)；寧波市自然科學(xué)基金項目資助(2013A610165)；浙江省科技計劃項目資助(2012C12907-8)

王友發(fā)(1990-)，男，湖北監(jiān)利縣人，主要從事魚類繁殖與發(fā)育方面的研究。E-mail：youfa_wang@163.com

*通訊作者:竺俊全(1964-)，男，教授，主要從事水產(chǎn)經(jīng)濟動物繁殖與發(fā)育、精子發(fā)生及相關(guān)基因研究。E-mail：zhujunquan@nbu.edu.cn

S965.322

A

1001-909X(2016)04-0063-09

10.3969/j.issn.1001-909X.2016.04.008

王友發(fā)，張丹丹，沈偉良，等. 養(yǎng)殖大黃魚越冬前后消化道及肝臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化[J]. 海洋學(xué)研究, 2016,34(4):63-71,