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    北京地區(qū)警犬皮膚葡萄球菌分離鑒定及耐藥性試驗

    2017-01-06 02:43:26周傳鐸任連權(quán)周雅楠李曉曉林德貴
    中國獸醫(yī)雜志 2016年11期
    關(guān)鍵詞:賓格北京地區(qū)警犬

    周傳鐸 , 任連權(quán) , 趙 然 , 張 迪 , 周雅楠 , 李曉曉 , 林德貴

    (1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 , 北京海淀100193 ; 2.北京市公安局刑偵總隊警犬技術(shù)支隊 ,北京大興102614 ; 3.天津市獸藥飼料監(jiān)察所 , 天津北辰300402)

    北京地區(qū)警犬皮膚葡萄球菌分離鑒定及耐藥性試驗

    周傳鐸1,2, 任連權(quán)3, 趙 然2, 張 迪1, 周雅楠1, 李曉曉1, 林德貴1

    (1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 , 北京海淀100193 ; 2.北京市公安局刑偵總隊警犬技術(shù)支隊 ,北京大興102614 ; 3.天津市獸藥飼料監(jiān)察所 , 天津北辰300402)

    犬膿皮病,又稱為犬細菌性皮膚病或犬細菌性毛囊炎,為由細菌引起的犬皮膚及其相關(guān)結(jié)構(gòu)的感染[1],系犬常見病之一。該病具有發(fā)病率高、療程長、易復(fù)發(fā)的特點,加上日益嚴重的細菌耐藥問題,使得該病的治療愈發(fā)困難。而葡萄球菌被認為是引起人與動物化膿感染的主要的病原菌之一[1]。本試驗對北京地區(qū)警犬膿皮病病例及健康警犬體表皮膚的葡萄球菌進行分離、鑒定及藥物敏感性試驗,為警犬皮膚病防治提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料選擇 (1)2014年10月-2015年01月,北京地區(qū)新發(fā)的警犬膿皮病病例18例;(2)北京地區(qū)健康警犬50頭(體表無化膿感染病灶,其他器官或系統(tǒng)無明顯病變),其中德國牧羊犬、史賓格犬、拉布拉多犬、羅威納犬、馬里努阿犬各10只,雌雄各半,年齡平均分布。

    1.2 培養(yǎng)基及試劑 細菌培養(yǎng)所用各種培養(yǎng)基,購自北京奧博星生物技術(shù)有限責任公司;藥敏試紙片,分別購自賽默飛世爾生物化學(xué)制品(北京)有限公司及北京天壇生物科技有限公司;培養(yǎng)基及其他試劑的配制均按產(chǎn)品說明或常規(guī)方法配制;標準菌株金黃色葡萄球菌ATCC25923、ATCC29213由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)藥理實驗室提供;DNA Marker,購自天跟生化科技(北京)有限公司;2*EasyTaqSupperMix,購自北京全式金生物技術(shù)有限公司;PCR引物合成及測序由北京三博遠志生物技術(shù)有限責任公司完成。

    1.3 細菌的分離、鑒定 (1)膿皮病病例:用無菌生理鹽水對病灶表面進行沖洗,用浸有無菌BHI肉湯的棉簽蘸取新的膿汁或沿感染灶與健康組織交界處蘸取滲出物,于酒精燈旁接種5%哥倫比亞血營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基;37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h;根據(jù)菌落的形態(tài)、顏色、溶血情況等,挑取不同的單菌落轉(zhuǎn)接至新的哥倫比亞血平板,37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h~36 h;(2)健康犬皮膚:將一次性無菌采樣拭子用無菌生理鹽水浸濕后,分別對每只犬的右眼眼周、背部正中、左側(cè)腹股溝處皮膚進行采樣,并置于7.5%高鹽肉湯培養(yǎng)基,37℃孵育24 h~36 h。在超凈臺中,將培養(yǎng)后的菌液接種于高鹽甘露醇瓊脂培養(yǎng)基,置37℃恒溫箱孵育24 h~48 h。挑取單菌落轉(zhuǎn)接至新的高鹽甘露醇瓊脂培養(yǎng)基,進一步純化;(3)挑取單一形態(tài)菌落:經(jīng)染色、鏡檢后,經(jīng)BHI肉湯增菌培養(yǎng),采用水煮法[2]提取DNA,并采用16S rDNA法(通用引物27F、1492R)及生化鑒定法對細菌進行鑒定。

    1.4 藥敏試驗 對分離得到的葡萄球菌采用紙片擴散法進行藥物敏感性試驗。結(jié)果判定依CL.SI(2015修訂版)進行。

    2 結(jié)果

    2.1 北京地區(qū)警犬膿皮病病原菌的分離鑒定結(jié)果 從18例膿皮病患犬患處分離到細菌34株。其中葡萄球菌18株(52.94%),芽孢桿菌11株(32.35%),結(jié)果見表1。

    表1 北京地區(qū)膿皮病警犬病原菌鑒定結(jié)果

    2.2 北京地區(qū)警犬健康皮膚葡萄球菌分離鑒定結(jié)果 150個采集樣本中,共分離出葡萄球菌23株。其中,偽中間型葡萄球菌最多,6株,占26.1%,結(jié)果見表2。

    表2 北京地區(qū)警犬健康皮膚葡萄球菌分離鑒定結(jié)果

    2.3 膿皮病患病品種統(tǒng)計及健康犬皮膚葡萄球菌與樣本間關(guān)系 18例警犬膿皮病中,史賓格犬、德國牧羊犬病例數(shù)最高,各6例,分占33.33%,拉布拉多犬、馬里努阿犬、羅威納犬分別為3例、2例和1例。而健康犬皮膚分離的23株葡萄球菌,從品種看,7株(30.43%)來自于史賓格犬,占比最高;德國牧羊犬與羅威納犬均為5 株(21.74%);馬里努阿犬及拉布拉多犬分別為4 株(17.39%)、2 株(8.7%);從分離部位看,左腹股溝處分離出菌數(shù)量最多,為12 株(52.17%),背部最少4株(17.39%)。

    2.4 北京地區(qū)警犬皮膚葡萄球菌耐藥情況 對膿皮病警犬患處分離的18 株葡萄球菌及健康警犬皮膚分離的23 株葡萄球菌進行藥物敏感性試驗,全部葡萄球菌均對頭孢西丁敏感,結(jié)果見表3。多重耐藥(同時對3 種及3 種以上藥物耐藥)的菌株情況見表4。

    表3 北京地區(qū)警犬皮膚分離葡萄球菌的耐藥情況

    a:依照CLSI獸醫(yī)標準;b:金黃色葡萄球菌及路登葡萄菌依表格標準,其他葡萄球菌依S≥25、R≤24標準

    表4 北京地區(qū)警犬分離葡萄球菌多重耐藥情況

    3 討論

    3.1 犬皮膚感染致病菌較多,且多為復(fù)合感染。在既往的研究中,犬膿皮病分離得到的病原菌并不完全一致,但葡萄球菌,尤其是偽中間型葡萄球菌為犬膿皮病的主要病原菌已成為動物醫(yī)學(xué)界的共識[3-10],本試驗的結(jié)果再次證實了這一結(jié)論。但試驗中,從膿皮病患犬處未分離到鏈球菌、綠膿桿菌、微球菌、變形桿菌、棒狀桿菌等[4-7,9]致病菌,而薛占永等[8]在研究北京地區(qū)犬膿皮病的病原菌時同樣未分離到鏈球菌與綠膿桿菌,其原因可能與地域及季節(jié)等因素有關(guān)。另外,從健康犬皮膚表面分離得到的凝固酶陰性葡萄球菌相對較多,而某些凝固酶陰性葡萄球菌也具有特定致病性,可以引發(fā)動物及人感染[11-12],仍不能忽視。

    3.2 從患病犬統(tǒng)計看,史賓格犬、德國牧羊犬為膿皮病發(fā)病率最高的品種。從健康警犬皮膚分離的葡萄球菌在犬品種間的分布來看,史賓格犬體表分離到的葡萄球菌最多,與史賓格犬膿皮病發(fā)病病例較高相呼應(yīng)。德國牧羊犬為人們已知的膿皮病易感品種,提示史賓格犬可能也具有膿皮病易感特性,應(yīng)引起警犬技術(shù)人員的重視。

    3.3 葡萄球菌為公認的犬膿皮病主要致病菌,故對其進行分離及藥物敏感性試驗。從試驗結(jié)果看,所有分離菌株均對頭孢西丁敏感,未篩查出耐甲氧西林葡萄球菌;對阿莫西林-克拉維酸、阿米卡星、氟苯尼考也全部敏感,為以后臨床提供更多選擇;對青霉素G耐藥率最高;而常用的皮膚病用藥-克林霉素在健康犬皮膚分離葡萄球菌的耐藥率僅為 8.70%,但對發(fā)病犬分離菌的耐藥率提高為 38.89%,提示其可能較易產(chǎn)生耐藥性,在用藥時要審慎選擇。而與近年相關(guān)研究結(jié)果相比較,分離菌藥物敏感性試驗結(jié)果及多重耐藥情況均優(yōu)于國內(nèi)薛占永、楊靜等[8-9]的試驗,與國外研究的耐藥情況較為一致[5-7]。但從健康警犬皮膚分離的葡萄球菌耐藥情況看,雖然菌株對藥物敏感性情況優(yōu)于膿皮病患犬組,但對所用試驗藥物全部敏感的菌株僅占26.09%,仍有較多菌株對不同藥物耐藥,且存在著4株多重耐藥菌株,提示警犬皮膚葡萄球菌耐藥性存在的普遍性。

    4 小結(jié)

    由試驗可知,北京警犬膿皮病病原菌仍以葡萄球菌(偽中間型葡萄球菌)為主,皮膚分離葡萄球菌藥物敏感性情況要好于國內(nèi)平均水平,但仍存在一定的耐藥性問題。警犬技術(shù)工作人員要加強對警犬皮膚細菌耐藥性的監(jiān)測,重點圍繞易感的史賓格犬和德國牧羊犬品種展開膿皮病的預(yù)防及治療工作,合理使用藥物,提高膿皮病治療效果的同時,減少細菌耐藥性的產(chǎn)生,更要加強防范,減免動物源性耐藥菌向人的傳播。

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    2015-11-16

    周傳鐸(1982-),男,獸醫(yī)師,工程師,博士,從事警犬疾病防治工作,E-mail:zthxc@163.com

    林德貴,E-mail:csamam@sina.com

    R446.5

    B

    0529-6005(2016)11-0091-03

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