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    藏橐吾小鼠急性毒性試驗

    2017-01-06 02:43:28郭亞洲張睿涵薛瑞旭趙寶玉
    中國獸醫(yī)雜志 2016年11期
    關鍵詞:水提液灌胃脾臟

    馮 柯 , 郭亞洲 , 張睿涵 , 薛瑞旭 , 王 歡 , 趙寶玉

    (1.西北農林科技大學動物醫(yī)學院 , 陜西楊凌712100; 2.拉薩市動物疫病預防控制中心 , 西藏拉薩851000)

    藏橐吾小鼠急性毒性試驗

    馮 柯1,2, 郭亞洲1, 張睿涵1, 薛瑞旭1, 王 歡1, 趙寶玉1

    (1.西北農林科技大學動物醫(yī)學院 , 陜西楊凌712100; 2.拉薩市動物疫病預防控制中心 , 西藏拉薩851000)

    為了研究藏橐吾地上部分水提液對小鼠的急性毒性作用, 將100只體質量30±2 g昆明系小鼠隨機分成10組(灌胃6組, 腹腔注射4組), 每組10只, 雌雄各半。 灌胃給藥劑量為53.00~135.00 g/kg(以生藥量計), 灌胃量為1 mL/30 g, 分3次灌胃, 每次間隔4 h; 腹腔注射劑量為8.88~21.90 g/kg(以生藥量計), 注射量為0.8 mL/30g, 1次腹腔注射。 給藥后, 每天觀察小鼠的臨床表現和死亡情況, 連續(xù)觀察14 d, 記錄小鼠出現的毒性反應及病理剖檢變化, 統(tǒng)計死亡數, 用改良寇氏法計算LD50。 結果表明, 小鼠灌胃和腹腔注射的LD50分別為91.69 g/kg和15.75 g/kg, 95%可信限分別為83.10~101.16 g/kg和14.01~17.72 g/kg; 兩種染毒方式的中毒癥狀相似, 均出現精神沉郁、運動遲緩、食欲及飲水廢絕、呼吸頻率降低; 病理剖檢可見胃腸道臌氣, 肝臟、脾臟壞死。 結合中毒小鼠的臨床癥狀和病理剖檢變化, 綜合分析后認為藏橐吾有毒性, 主要損傷器官為胃腸道、肝臟和脾臟。

    藏橐吾 ; 水提液 ; 灌胃 ; 腹腔注射 ; 急性毒性 ; 小鼠

    藏橐吾(Ligulariarumicifolia)是菊科(Compositae)橐吾屬(Ligularia)的多年生草本植物,產于我國西藏東南部至東北部,生于海拔3 700~4 500 m的湖邊、林下、灌叢及山坡[1]。作為一味中藥,藏橐吾具有散寒、化痰、止咳等功效,常用于治療咳嗽痰喘、肺癆等癥[2]。藏橐吾植株高(40~100 cm)、葉片寬大(長19 cm,寬6~10 cm),草原發(fā)生雪災后不易被積雪掩蓋,極易被饑餓動物采食,引起中毒。與藏橐吾同樣分布在青藏高原的黃帚橐吾(Ligulariavirgaurea)已造成青海貴南縣143頭牛、羊中毒[3]。同屬網脈橐吾(Ligulariadictyoneura)和牛蒡葉橐吾(Ligularialapathifolia)被認定為有毒植物[5]。目前,國內外尚無藏橐吾化學成分及毒性的相關報道。鑒于此,本試驗通過觀察藏橐吾水提液小鼠灌胃和腹腔注射的急性毒性,用改良寇氏法計算LD50,同時觀察小鼠的毒性反應及病理剖檢變化,以評價藏橐吾的毒性,為后續(xù)亞急性毒性試驗和毒性機理研究提供理論依據。

    1 材料與方法

    1.1 植物樣品 藏橐吾地上部分全草2014年8月采集于西藏堆龍德慶縣(30°02′07.46″N;90°36′26.06″E),曬干后粉碎,置于通風陰涼干燥處保存?zhèn)溆?。植物標本由西北農林科技大學生命科學學院常朝陽研究員鑒定。

    1.2 試驗動物 昆明系小鼠,雌雄各半,體質量 30±2 g,由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心購進。購進后進行7 d的喂養(yǎng)觀察,淘汰不健康小鼠。飼喂自制鼠糧。

    1.3 試驗方法

    1.3.1 水提液的制備 取一定質量的藏橐吾粉末,加10倍量的蒸餾水文火煎煮0.5 h,取上清液,過濾,如此重復3次,合并濾液,旋轉蒸發(fā)儀減壓濃縮至生藥量為4.05 g/mL的溶液(此濃度為灌胃給藥的最大濃度),加一定量的蒸餾水配置成不同生藥量的攻毒液。灌胃用的攻毒液,4 ℃保存?zhèn)溆茫骨蛔⑸溆玫墓ザ疽?,高壓滅菌后? ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.2 半數致死量(LD50)試驗 將健康小鼠隨機分成10組(灌胃6組,腹腔注射4組),每組10只,雌雄各半。試驗前12 h、試驗后4 h禁食,但不限制飲水。根據預試驗結果,小鼠灌胃給藥劑量為 53.00~135.00 g/kg(以生藥量計),劑間比為1∶0.83,灌胃量為1 mL/30g,分3次灌胃,每次間隔4h;小鼠腹腔注射劑量為8.88~21.90 g/kg(以生藥量計),劑間比為1∶0.74,注射量為0.8 mL/30g,1次腹腔注射。給藥后,每天觀察小鼠的臨床表現和死亡情況,連續(xù)觀察14 d,記錄小鼠出現的毒性反應及病理剖檢變化,統(tǒng)計死亡數。

    1.4 計算方法 用改良寇氏法計算LD50及95%可信限[6]。

    2 結果

    2.1 灌胃染毒結果

    2.1.1 LD50及95%可信限結果 灌胃后觀察14 d,統(tǒng)計各個劑量組的死亡率(表1),用改良寇氏法公式進行計算得出,藏橐吾地上部分水提液對小鼠灌胃的LD50為91.69 g/kg,95%可信限為 83.10~101.16 g/kg。

    2.1.2 小鼠臨床癥狀及病理剖檢變化 隨著灌胃劑量的增大,小鼠出現中毒癥狀的時間也越早。小鼠中毒臨床癥狀不明顯,僅表現為對外界聲音刺激敏感,不喜動,食欲、飲水廢絕。死亡主要集中在灌胃后96 h內,耐過后的小鼠恢復正常。死亡小鼠的病理剖檢,主要表現為胃腸道局部臌氣;肝臟邊緣壞死;胸腔有積血;脾臟壞死;其余臟器未見明顯肉眼變化。攻毒14 d后對存活的小鼠用頸椎脫臼法處死并進行病理剖檢,臟器均未見明顯肉眼變化。

    表1 小鼠灌胃急性毒性正式試驗結果

    2.2 腹腔注射染毒結果

    2.2.1 LD50及95%可信限結果 腹腔注射后觀察14 d,統(tǒng)計各個劑量組的死亡率(表2),用改良寇氏法公式進行計算得出,藏橐吾地上部分水提液對小鼠腹腔注射的LD50為15.75 g/kg,95%可信限為14.01~17.72 g/kg。

    表2 小鼠腹腔注射急性毒性正式試驗結果

    2.2.2 小鼠臨床癥狀及病理剖檢變化 腹腔注射后,隨著攻毒劑量的增大,小鼠出現中毒癥狀的時間也越早,癥狀也越明顯。主要癥狀包括精神沉郁,不喜動,食欲、飲水廢絕,呼吸頻率降低。最高劑量組在臨死前出現亂竄、后肢抽搐等癥狀,多數在注射后6 min內死亡。其余劑量組表現出對外界聲音刺激不明顯,臨死前出現后肢麻痹、僵硬等癥狀。絕大部分死亡集中發(fā)生在注射后的24 h內,耐過的小鼠在出現精神沉郁后恢復正常。對死亡小鼠進行病理剖檢,發(fā)現胃腸道局部臌氣,胃下部及小腸充血;心尖、肝臟、脾臟壞死;其余臟器未見明顯肉眼變化。攻毒14 d后對存活的小鼠用頸椎脫臼法處死并進行病理剖檢,臟器均未見明顯肉眼變化。

    3 討論與結論

    本試驗通過改良寇氏法計算得出,藏橐吾地上部分水提液小鼠灌胃的LD50為91.69 g/kg,95%可信限為 83.10~101.16 g/kg;腹腔注射的LD50為15.75 g/kg,95%可信限為14.01~17.72 g/kg。結合中毒小鼠的臨床癥狀和死后病理剖檢變化,綜合分析后認為藏橐吾有毒性,主要損傷器官為胃腸道、肝臟、脾臟。

    通過兩種不同的染毒途徑可以看出,灌胃和腹腔注射的中毒癥狀相似,均出現精神沉郁、不喜動、食欲和飲水廢絕、呼吸頻率降低和胃腸道臌氣,肝臟、脾臟壞死等臨床表現和病理剖檢變化。

    本試驗初步研究發(fā)現,藏橐吾地上部分水提液小鼠灌胃的LD50為91.69 g/kg,95%可信限為 83.10~101.16 g/kg;腹腔注射的LD50為15.75 g/kg,95%可信限為14.01~17.72 g/kg。結合中毒小鼠的臨床癥狀和死后病理剖檢變化,綜合分析后認為藏橐吾有毒性,主要損傷器官為胃腸道、肝臟、脾臟。灌胃和腹腔注射的中毒癥狀相似,均出現精神沉郁、不喜動、食欲和飲水廢絕、呼吸頻率降低和胃腸道臌氣,肝臟、脾臟壞死等臨床表現和病理剖檢變化。后續(xù)試驗可以進一步探究藏橐吾的主要有毒成分及其靶器官。

    [1] 傅坤俊,張振萬,何善寶,等.中國植物志.第77(2)卷[M].北京:科學出版社, 1993:47.

    [2] 中國藥材公司.中國中藥資源志要[M].北京:科學出版社,1994:1318.

    [3] 林永明.牛羊黃帚橐吾草中毒癥的診治[J].中國草食動物,2011,3:74-75.

    2015-11-05

    農業(yè)部“十二五”公益性行業(yè)(農業(yè))科研專項(201203062)

    馮柯(1982- ),男,碩士,主要從事動物中毒病與毒理學研究,E-mail: John3376@qq.com

    趙寶玉,E-mail:zhaobaoyu12005@163.com

    S859.87

    B

    0529-6005(2016)11-0113-02

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