牛羊皮膚癬菌病的研究進(jìn)展

吳潤(rùn)標(biāo) ， 李小燕 ， 李 奧 ， 劉 威 ， 曹 平 ， 張德志 ， 李前勇

(西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系 ， 重慶榮昌402460)

牛羊皮膚癬菌病的研究進(jìn)展

吳潤(rùn)標(biāo) ， 李小燕 ， 李 奧 ， 劉 威 ， 曹 平 ， 張德志 ， 李前勇

(西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系 ， 重慶榮昌402460)

牛羊皮膚癬菌病(Dermatophytosis)(亦稱銅錢癬、脫毛癬或禿毛癬病)是由皮膚癬菌(Dermatophytes)引起的牛羊淺在性皮膚真菌病，屬于臨床常發(fā)疾病，主要表現(xiàn)為局部的皮膚炎癥和病變，對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育和育肥增重效果影響較大。引起牛羊皮膚癬菌病的病原有石膏樣毛癬菌(Trichophytongypseum)、疣狀毛癬菌(T.verrucosum)、須癬毛癬菌(T.mentagrophytes)、玫瑰色毛癬菌(T.megninii)、紅色毛癬菌(T.rubrum)、馬類毛癬菌(T.equinum)、犬小孢子菌(Microsporumcanis)、石膏樣小孢子菌(M.gypseum)、豬小孢子菌(M.nanum)和馬蹄足小孢子菌(M.equinum)等。

牛羊皮膚癬菌病呈全球性分布，不同品種、性別、年齡及飼養(yǎng)條件的牛羊均可感染，由于皮膚癬菌的繁殖需要角蛋白作為營(yíng)養(yǎng)原料，而動(dòng)物和人的毛干，甲板，皮膚表皮等富含角蛋白，因此皮膚癬菌可在牛羊皮膚上大量繁殖，通過(guò)機(jī)械刺激和代謝產(chǎn)物的作用對(duì)宿主造成傷害，造成經(jīng)濟(jì)損失[1]。本病自1957年報(bào)道以來(lái)，臨床上發(fā)病逐漸增多，已引起了人們的關(guān)注。但該病病原種類多、鑒定難、發(fā)病后難以根除，臨床上又缺乏規(guī)范的診斷治療程序，已成為了臨床防治的難點(diǎn)問(wèn)題。只有深入的了解皮膚癬菌病的歷史分布與現(xiàn)狀、病原及流行病學(xué)、臨床癥狀、鑒別診斷才能有效的防制該病。

1 歷史分布與現(xiàn)狀

19世紀(jì)60年代，波斯尼亞和黑塞哥維那的學(xué)者Ozegovc[2]通過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該國(guó)國(guó)內(nèi)牛群中疣狀毛癬菌是最普遍的皮膚癬菌病原，陽(yáng)性率最高達(dá)93.3%，從那以后巴西、捷克共和國(guó)、摩洛哥、巴基斯坦、印度、日本、伊朗、意大利、土耳其、南斯拉夫、埃塞俄比亞、埃及、利比亞、伊拉克、尼日利亞等國(guó)陸續(xù)報(bào)道了牛羊的皮膚癬菌病，這些報(bào)道中，牛的感染率為2%～93.3%，主要病原為疣狀毛癬菌，須癬毛癬菌次之；羊的感染率7.67%～76%，主要病原為毛癬菌屬和小孢子菌屬。牛羊的混合感染率為5.45%。在我國(guó)，李自漢最早(1986年)報(bào)道了1頭1歲公綿羊與患牛拴在一起，通過(guò)飼養(yǎng)員和飼喂器具或飼料等途徑間接地感染牛疣狀毛癬菌[3]。此后，河南、貴州、蘭州、西安、黑龍江、廣東、新疆、河北、內(nèi)蒙古、四川、陜西、北京、寧夏、云南、福建等省份陸續(xù)報(bào)道了牛羊患皮膚癬菌病。綜合報(bào)道情況，國(guó)內(nèi)肉牛的感染率為6%～75.79%，主要病原為疣狀毛癬菌，山羊的感染率為0.84%～75%，病原為毛癬菌屬和小孢子菌屬。由此可見，牛羊皮膚癬菌病在全球范圍內(nèi)呈現(xiàn)廣泛發(fā)生，典型養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)病率高，是值得人們關(guān)注和重視的傳染性皮膚病。

2 病原及流行病學(xué)

本病的病原體是主要生長(zhǎng)在毛和皮膚或兩者上的真菌，稱為皮膚真菌或真菌癬，包括毛癬菌屬(Trichophyton)、小孢子菌屬(Microsporum)和表皮癬菌屬(Epidermophyton)，約45個(gè)種[8]，比較公認(rèn)對(duì)牛羊有致病作用的約有9種，分別是石膏樣毛癬菌、疣狀毛癬菌(T.verrucosum)、須癬毛癬菌(T.mentagrophytes)、馬類毛癬菌(T.equinum)、犬小孢子菌(M.canis)、石膏樣小孢子菌(M.gypseum)、豬小孢子菌(M.nanum)、犬小孢子菌(Mcanis)和馬蹄足小孢子菌(M.equinum)。皮膚癬菌主要由菌絲和孢子組成。菌絲是由孢子萌發(fā)而產(chǎn)生的，一般為長(zhǎng)管狀分支，具有典型的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，包括細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞漿、細(xì)胞核和內(nèi)含物，呈多核單細(xì)胞狀態(tài)，菌絲細(xì)胞的大小因菌種不同而異，細(xì)胞壁厚度為100～300 μm，內(nèi)含幾丁質(zhì)，占干重的2%～26%。根據(jù)功能不同可將菌絲劃分營(yíng)養(yǎng)菌絲，氣生菌絲和繁殖菌絲3類。伸入培養(yǎng)基中的為營(yíng)養(yǎng)菌絲，起吸收營(yíng)養(yǎng)作用；伸向空氣生長(zhǎng)的為氣生菌絲；氣生菌絲繼續(xù)發(fā)育到一定階段，產(chǎn)生孢子的繁殖器官的稱為繁殖菌絲。孢子是皮膚癬菌的繁殖結(jié)構(gòu)，多呈圓形或橢圓形，當(dāng)外界條件適宜時(shí)，以無(wú)性繁殖的方式，萌發(fā)成新的菌絲體，即真菌的菌落[1]。感染牛和羊的主要真菌、癬菌及宿主和地理分布詳見表1。癬菌真菌對(duì)犬、貓、牛、馬等動(dòng)物最為易感。牛羊皮膚癬菌病傳播方式是接觸傳染，易感動(dòng)物、被污染的土壤以及人是構(gòu)成傳播真癬菌的主要因素。犢牛羔羊比成年牛羊更易感染，1歲犢牛發(fā)病率為9.45%，1～2歲牛為2%，成年牛為0.94%[9]。該病一年四季均可發(fā)生，秋冬季比夏季多發(fā)，7～9月份為高峰期，潮濕溫暖(22 ℃～29 ℃)環(huán)境和動(dòng)物的皮膚創(chuàng)傷均可促進(jìn)發(fā)病。皮膚癬菌對(duì)宿主無(wú)選擇性，牛羊皮膚癬菌病病原常具有人畜共患性，可通過(guò)菌絲或分節(jié)孢子傳播給犬、貓、豬、賽馬、駱駝和人等。

表1 感染牛和羊的主要癬菌真菌

3 發(fā)病機(jī)制

目前，人們對(duì)于皮膚癬菌病的致病機(jī)制尚未完全明確，但普遍認(rèn)為癬菌感染皮膚的過(guò)程主要包括粘附和侵襲兩個(gè)階段。研究表明，皮膚癬菌可分泌粘附相關(guān)物質(zhì)、蛋白水解酶、半胱氨酸雙加氧酶(CDO)等物質(zhì)，并能分解角蛋白[4]；而表層皮膚的主要成分是角蛋白，角蛋白又與胱氨酸二硫鍵緊密連接；皮膚癬菌在角蛋白水解過(guò)程中通過(guò)半胱氨酸的氧化還原反應(yīng)產(chǎn)生胞內(nèi)亞硫酸鹽，通過(guò)亞硫酸鹽泵流出真菌胞外，亞硫酸鹽最終作為還原劑將角蛋白層的胱氨酸二硫鍵裂解。而半胱氨酸雙加氧酶(CDO)在真菌胞內(nèi)半胱氨酸的產(chǎn)生過(guò)程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。

4 臨床癥狀

癥狀明顯時(shí)，表現(xiàn)為體表皮膚圓形或不整形脫毛性禿斑；進(jìn)而在病變周圍形成癬垢，甚至堆積痂殼。脫斑大小不等，呈散在分布或連接成片；開始為白色，然后逐漸變厚、變黃，猶如石棉狀結(jié)痂。好發(fā)于頭、頸部，也可發(fā)于腹部、臀部和四肢。發(fā)于甲部時(shí)，多呈灰白色，甲板增厚，甲下常有角蛋白及碎屑沉積，嚴(yán)重時(shí)引起甲板破損脫落。發(fā)病牛羊還表現(xiàn)出脫毛、滲出、毛囊炎以及癢感[19]。犢牛感染后，病變常呈全身性分布[9]。

5 診斷

牛羊癬菌病主要通過(guò)流行病學(xué)、臨床癥狀和病原的分離進(jìn)行診斷。前者可作為懷疑性診斷。確診必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，常用的實(shí)驗(yàn)室診斷方法包括直接顯微鏡檢查、Wood氏燈試驗(yàn)、掃描電鏡檢測(cè)、真菌培養(yǎng)、血清學(xué)和分子生物學(xué)方法等。

顯微鏡檢查是先刮取病變部位的毛發(fā)，指(趾)甲，皮屑等兩份，一份做直接鏡檢，即將病料放于干凈滅菌的載玻片上，加入20%KOH 1滴制成涂片，以蓋玻片覆蓋，必要時(shí)在酒精燈火焰上輕輕加熱，使之軟化透明后再鏡檢觀察，臨床上也可以用膠帶粘病變部位的皮膚，載玻片上滴加少許乳酸酚棉藍(lán)染液，最后膠帶粘貼到載玻片上一段時(shí)間后鏡檢。另一份做病理切片染色檢查和培養(yǎng)，皮膚癬菌常用的染色方法有：六胺銀染色方法、糖原染色法、銀氨液浸染法、熒光染色等。其中六胺銀染色結(jié)果為真菌菌絲和孢子呈明顯的黑褐色，糖原染色結(jié)果為真菌菌絲和孢子呈品紅色，銀氨液浸染結(jié)果為真菌呈棕黑色，熒光染色結(jié)果為真菌顯熒光染料顏色。在組織切片中發(fā)現(xiàn)真菌菌絲和(或)孢子，即為診斷真菌感染的有力證據(jù)。

真菌培養(yǎng)是將采集的病料先用75%酒精和無(wú)菌生理鹽水洗滌處理后將其接種于沙保勞瓊脂平板上，28℃培養(yǎng)兩周。利用平板畫線的方法將在接種部位生長(zhǎng)的真菌進(jìn)一步純化，獲得單菌落。菌落的形態(tài)和類型及在培養(yǎng)基的正面和背面顯示不同顏色都是真菌的鑒別依據(jù)。還可將單菌落真菌接種到皮膚癬菌鑒定培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)1周，若培養(yǎng)基由黃變紅，則說(shuō)明為皮膚癬菌。用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)進(jìn)行小培養(yǎng)，誘導(dǎo)真菌產(chǎn)生孢子后鏡檢鑒定可將其鑒定到屬。

血清學(xué)診斷的原理為β-1,3-D-葡聚糖廣泛存在于各類真菌的細(xì)胞壁中，占真菌胞壁成分50%以上，而細(xì)菌和動(dòng)物上一般不存在這類物質(zhì)，檢測(cè)到β-1,3-D-葡聚糖，就可以初步認(rèn)為真菌感染。目前的檢測(cè)方法為G試驗(yàn)法，其靈敏度約為90%，特異性100%。但皮膚癬菌與腐生性真菌有共同抗原，因此，臨床上一般不用本法診斷皮膚癬菌感染。

分子生物學(xué)診斷可以用于種屬間的鑒別、種內(nèi)分化以及分子分型。該方法包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、核酸堿基GC比分析、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性、Southern印跡分析、脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性(RAPD)、DNA片段測(cè)序。目前，鑒別皮膚癬菌菌種的金標(biāo)準(zhǔn)為菌株rRNA的ITS測(cè)序。該法利用純培養(yǎng)的病原真菌提取基因組，用真菌ITS通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增并進(jìn)行產(chǎn)物測(cè)序，最后將測(cè)序的結(jié)果與基因數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列進(jìn)行比較，相似度最高的為種。近幾年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究表明，CHS1基因其在皮膚癬菌中高度保守，可用于皮膚癬菌鑒定[20]。

6 防制

預(yù)防為主、防治結(jié)合是當(dāng)前國(guó)內(nèi)外對(duì)于牛羊皮膚癬菌病的防制原則。有效地預(yù)防措施包括畜舍消毒和疫苗免疫。LTF-130凍干苗肌肉注射牛羊，即可獲得免疫力，安全有效[21]。一旦，牛羊群暴發(fā)癬菌病，應(yīng)先進(jìn)行隔離，對(duì)患畜用碘制劑、復(fù)方土槿皮、大蒜素或特比奈芬進(jìn)行外敷，口服噻苯咪唑也能取得較好的療效。治療過(guò)程中可與抗生素聯(lián)合用藥，用以治療除癬菌以外的細(xì)菌感染病，藥物治療配合熱療，可提高該病的治愈率。

7 小結(jié)

皮膚癬菌病是由一種群密切相關(guān)的絲狀真菌侵入皮膚角質(zhì)層及其附屬物引起的各種感染，這種疾病致死率雖低，但可造成養(yǎng)殖效益下降，對(duì)動(dòng)物福利、國(guó)際間牛羊交易均可帶來(lái)較大的負(fù)面影響。因此了解和掌握牛羊皮膚癬菌病的研究現(xiàn)狀，對(duì)于臨床上進(jìn)行疾病診斷和有效防制有著十分重要的意義。隨著人們對(duì)牛羊疾病的重視，尤其是皮膚癬菌致病機(jī)理和遺傳特性研究的不斷深入，以及診斷技術(shù)水平的持續(xù)提高，我們有理由相信，將會(huì)有更多牛羊皮膚癬菌病的快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的診斷新技術(shù)出現(xiàn)，也會(huì)有更加有效的防治藥物或方法被發(fā)現(xiàn)。

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2016-04-26

吳潤(rùn)標(biāo)(1991-)，男，碩士生，主要從事家畜皮膚癬菌病研究，E-mail:352304798@qq.com

李前勇,E-mail：qianyong_l@126.com

S827

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0529-6005(2016)11-0079-03