大鼠SAMVT模型中相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的檢測分析

厲雙安，趙金偉，吳 杰，田維軍，馬 震，張振文

( 1.長春市中心醫(yī)院,吉林 長春130021;2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院;3.吉林省人民醫(yī)院;4.武警吉林省總隊醫(yī)院)

大鼠SAMVT模型中相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的檢測分析

厲雙安1，趙金偉2*，吳 杰3，田維軍3，馬 震3，張振文4

( 1.長春市中心醫(yī)院,吉林 長春130021;2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院;3.吉林省人民醫(yī)院;4.武警吉林省總隊醫(yī)院)

急性腸系膜上靜脈血栓形成(SAMVT)是一種罕見的急腹癥，約占急性腸系膜缺血性疾病的6%-9%，占急診入院病人的1/1000左右[1]隨著影像學(xué)技術(shù)的發(fā)展，特別是CT門靜脈造影術(shù)的廣泛應(yīng)用，使SAMVT的早期確診率明顯提高，敏感性可達(dá)90%以上，但對病情的嚴(yán)重性評估價值有限[2]，尋求合適的血清學(xué)標(biāo)記物有助于疾病的診斷及病情的評估。

為此，我們采用Fecl3溶液包裹腸系膜的方法建立大鼠SAMVT動物模型[3]，同時對其發(fā)生發(fā)展過程中的相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)進(jìn)行檢測分析，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 大鼠SAMVT模型的建立

具體實(shí)驗(yàn)方法參見文獻(xiàn)[3]。

1.2 標(biāo)本的收集

根據(jù)文獻(xiàn)實(shí)驗(yàn)方法，在不同的時相點(diǎn)，即在不同的分期內(nèi)，分別抽取大鼠靜脈血，并解剖大鼠，切除病變的腸管及腸系膜，福爾馬林溶液固定后行病理檢查，根據(jù)病理檢查結(jié)果確定分期。每組大鼠30只，結(jié)果，成功抽取靜脈血、切除病變組織及抽取腹水進(jìn)行細(xì)菌涂片檢查的大鼠如下：對照組25例；血栓形成組21例；粘膜壞死脫落組24例；腸管壞死、穿孔組26例。

1.3 檢測指標(biāo)和方法

外周血血漿腸脂肪酸結(jié)合蛋白(I-FABP)及二胺氧化酶(DAO)均采用美國RD公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒進(jìn)行檢測，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包分析。

2 結(jié)果

1組分別與2、3、4組相對比，P值均小于0.05；2、3組相對比，P值大于0.05；2組、3組分別與4組相對比，P值均小于0.05。如表1所示。

表1 外周血腸脂肪酸結(jié)合蛋白(I-FABP)和二胺氧化酶(DAO)的檢測

外周血腸脂肪酸結(jié)合蛋白(I-FABP)的檢測結(jié)果： 1組分別與2、3、4組相對比，P值均小于0.05；2、3組相對比，P值大于0.05；2組、3組分別與4組相對比，P值均小于0.05。二胺氧化酶(DAO)的檢測結(jié)果：1組與2、3、4組相對比，P值均小于0.05；2、3、4組兩兩組相對比，P值均大于0.05。

3 討論

目前，正在探索一些對診斷具有特異性或相對特異的指標(biāo)，比如，D-二聚體是一個敏感但不特異的指標(biāo)，但是其結(jié)果正常可能作為排除AMVT的依據(jù)[4]。

在AMVT中，缺血始于粘膜層，并擴(kuò)展至漿肌層，對腸系膜缺血的理想標(biāo)記物應(yīng)該是在粘膜缺血的早期即可檢測到標(biāo)記物的變化[5]。根據(jù)Evennett等人最新綜述的材料[6]，小腸脂肪酸結(jié)合蛋白(I-FABP)、二胺氧化酶(DAO)是腸系膜缺血頗具臨床應(yīng)用前景的血漿標(biāo)記物，I-FABP是一種低分子量(14-15KDa)的細(xì)胞基質(zhì)蛋白，參與脂肪酸的消化和吸收，高度表達(dá)于小腸微絨毛的管腔側(cè)，當(dāng)小腸上皮細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)完整性喪失時即可釋放入血液循環(huán)中，其上述特性并結(jié)合腸系膜缺血損傷部位的定位，使血漿和尿液中的I-FABP水平可作為腸上皮細(xì)胞損傷的標(biāo)記物[7]。另外，在伴有小腸缺血壞死組的病人I-FABP水平升高，但在腸梗阻病人組，懷疑伴有腸缺血但未發(fā)生腸缺血的病人，則I-FABP水平正常[8]。據(jù)報道，I-FABP診斷小腸術(shù)后腸管壞死的敏感性及特異性分別為0.90和0.89[9]由于血漿I-FABP的快速清除至尿液并在尿液中蓄積，使之檢測尿液I-FABP更具臨床應(yīng)用價值[7]。我們的動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，血漿I-FABP在AMVT形成過程中，隨著小腸粘膜的缺血、壞死及腸壁的壞死及穿孔，血漿I-FABP水平逐漸升高，并且對腸管的壞死、穿孔有預(yù)警價值。DAO是人類和哺乳動物小腸粘膜上皮細(xì)胞內(nèi)高活性的結(jié)構(gòu)酶，95%存在于小腸粘膜絨毛，當(dāng)腸系膜缺血時，腸粘膜結(jié)構(gòu)被破壞，DAO可大量釋放入血，在血中的濃度升高[9]，我們在大鼠SAMVT模型中檢測的數(shù)據(jù)顯示，在腸系膜缺血的早期，血漿DAO水平即可明顯升高，但其水平與腸管壞死無明顯相關(guān)性。

綜上所述，我們在采用Fecl3溶液包裹腸系膜的方法建立大鼠SAMVT模型中，動態(tài)檢測大鼠在不同病理階段的外周血血漿I-FABP及DAO水平進(jìn)行分析，在大鼠腸系膜上靜脈血栓形成后出現(xiàn)腸粘膜缺血即有外周血血漿I-FABP及DAO水平的升高，血漿I-FABP水平對腸管的壞死、穿孔有預(yù)警價值，但血漿DAO水平與腸管壞死無明顯相關(guān)性。這為我們進(jìn)一步探索血漿I-FABP及DAO水平評估SAMVT病人腸管病變程度提供良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

[1]Singal AK,Kamath PS,Tefferi A.Mesenteric venous thrombosis[J].Mayo Clin Proc，2013，88:285.

[2]Acosta S,Alhadad A,Ekberg O.Findings in multi-detector row CT with portal phase enhancement in patients with mesenteric venous thrombosis[J].Emerg Radiol,2009，16:477．

[3]趙金偉，王鐘林，吳 杰，等．Fecl3誘導(dǎo)建立腸系膜靜脈血栓形成的動物模型[J]．中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2010,15(10)：1641．

[4]Acosta S,Alhadad A,Svensson P,et al.Epidemiology,risk and prognostic factors in mesenteric venous thrombosis[J].Br J Surg,2008,95(10):1245．

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[7]Derikx JP,Luyer MD,Heineman E,et al.Noninvasive markers of gut wall integrity in health and disease[J].World J Gastroenterol，2010，16:5272．

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吉林省科技廳資助項目 (201005224)

1007-4287(2016)12-1985-02

趙金偉，男，副主任醫(yī)師，外科學(xué)博士，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橄到y(tǒng)腫瘤及急腹癥的基礎(chǔ)及臨床研究。

2016-03-15)

*通訊作者