氣相色譜法同時(shí)測(cè)定醬腌菜中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量

劉煒，楊曉鳳，雷紹榮

（四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測(cè)試中心，四川成都610066）

氣相色譜法同時(shí)測(cè)定醬腌菜中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量

劉煒，楊曉鳳，雷紹榮

（四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測(cè)試中心，四川成都610066）

建立了毛細(xì)管柱氣相色譜法同時(shí)測(cè)定醬腌菜中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的方法。樣品經(jīng)鹽酸酸化后，乙醚提取，經(jīng)HP-FFAP（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）毛細(xì)管柱分離后，采用火焰離子化檢測(cè)器（FID）檢測(cè)醬腌菜樣品中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量。結(jié)果表明，山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸含量分別在5.0～400 mg/L線性良好（r＞0.999），平均回收率為87.6%～97.7%，RSD（n＝5）在0.8%～3.7%。該方法快速、準(zhǔn)確，適用于同時(shí)測(cè)定醬腌菜樣品中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量。

山梨酸；脫氫乙酸；苯甲酸；氣相色譜；醬腌菜

苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸是我國(guó)目前常用的食品防腐劑[1]。食品防腐劑可抑制食品中微生物的繁殖、殺死食品中含有的有害微生物，以此來防止食品變質(zhì)的化學(xué)過程，同時(shí)還不影響食品的味道[2]。據(jù)報(bào)道，過多地?cái)z入這些防腐劑會(huì)對(duì)人體造成傷害，如導(dǎo)致人體酸中毒、抽搐和過度深呼吸[3]，我國(guó)對(duì)食品防腐劑在食品中的使用都有嚴(yán)格的規(guī)定[4]。因此，對(duì)醬腌菜中常用的防腐劑山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的含量進(jìn)行檢測(cè)非常重要。

目前，檢測(cè)山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的方法有氣相色譜法[5-8]、氣相色譜-質(zhì)譜法[9]、液相色譜法[10-13]等；國(guó)標(biāo)方法主要有《GB/T5009.29—2003食品中山梨酸、苯甲酸的測(cè)定》和《GB/T 5009.121—2003食品中脫氫乙酸的測(cè)定》[14-15]。在氣相色譜法中，3種防腐劑的前處理方法不盡相同，給日常的檢測(cè)工作無疑增加了難度及強(qiáng)度。因此，有必要建立一種同時(shí)測(cè)定山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的檢測(cè)方法。

本研究建立了一種同時(shí)測(cè)定醬腌菜中山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的檢測(cè)方法，樣品經(jīng)鹽酸酸化、乙醚提取，用氣相色譜火焰離子化檢測(cè)器分析，該法操作簡(jiǎn)單快速，測(cè)定結(jié)果滿意，適合于同時(shí)測(cè)定醬腌菜樣品中3種防腐劑的含量。

1 材料和方法

1.1 主要儀器與試劑

美國(guó)Agi7890A氣相色譜儀，配有自動(dòng)進(jìn)樣品、FID檢測(cè)器；色譜柱為Agilent HP-FFAP石英毛細(xì)管柱（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）。

丙酮為色譜純；乙醚、無水硫酸鈉、氯化鈉均為分析純。

山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自Dr. Ehrenstorfer公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent HP-FFAP石英毛細(xì)管柱；載氣為氮?dú)猓兌取?9.999%）；恒流模式，流量2 mL/min；尾吹氣為氮?dú)?，流量?8 mL/min；檢測(cè)器溫度為250℃，空氣流量400mL/min，氫氣流量30mL/min；進(jìn)樣口溫度為200℃，分流進(jìn)樣，分流比為10∶1，進(jìn)樣量為1 μL；柱溫采用升溫程序：初始溫度150℃，以30℃/min速率升至220℃，保持3 min；后運(yùn)行：220℃保持5 min。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制：分別稱取山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品各50.0 mg，分別置于3個(gè)50 mL容量瓶中，均用丙酮定容至刻度，制成濃度為1 000 mg/L的山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，保存于4℃下。稱取山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品50.0 mg置于50 mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度，制成濃度均為1 000 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，保存于4℃下。使用前，用丙酮稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液。標(biāo)準(zhǔn)工作液系列的配制：丙酮稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)溶液得到5.0，10.0，50.0，100.0，200.0，400.0 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.2 樣品的前處理稱取2.50 g醬腌菜樣品于50 mL具塞比色管中，加入6 mol/L鹽酸1 mL后，分別用25 mL乙醚提取2次，每次振搖2 min后靜止，將上層乙醚提取液轉(zhuǎn)移至另一支具塞比色管，合并乙醚提取液。用40 g/L酸性氯化鈉溶液5 mL洗滌乙醚提取液1次，靜止2 min，棄去下層溶液。加入無水硫酸鈉，振搖1 min，將乙醚提取液于35℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，5 mL丙酮溶解定容后過0.45 μm濾膜備用。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜柱的選擇

考察了山梨酸、脫氫乙酸及苯甲酸在Agilent HP-5（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm），Agilent DB-17（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm），Agilent HP-FFAP（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）3種不同極性毛細(xì)管柱相同的程序升溫條件（初始溫度為60℃，以35℃/min速率升至220℃，保持10 min）下的色譜保留行為，結(jié)果如圖1所示。綜合山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸色譜峰的對(duì)稱性及峰高響應(yīng)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，極性FFAP柱分析山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸時(shí)峰形對(duì)稱，峰高較高，因此，本試驗(yàn)選擇HP-FFAP石英毛細(xì)管柱。

2.2 色譜條件的優(yōu)化及其色譜圖分析

柱溫對(duì)化合物的出峰時(shí)間和色譜峰形有較大的影響。在1.2色譜條件下，3種化合物色譜峰形較好，出峰時(shí)間短，實(shí)現(xiàn)了基線分離，且樣品中無干擾雜質(zhì)峰，表明試驗(yàn)條件良好。圖2為1.2色譜條件下山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品、醬腌菜空白樣品及醬腌菜空白加標(biāo)樣品的色譜圖。由圖2可知，山梨酸保留時(shí)間為2.589 min，脫氫乙酸的保留時(shí)間為2.894 min，苯甲酸的保留時(shí)間為3.634 min。

2.3 前處理方法的確定

一般生產(chǎn)時(shí)防腐劑添加的是山梨酸鉀或苯甲酸鈉或脫氫乙酸鈉，加鹽酸酸化后，會(huì)形成山梨酸、脫氫乙酸及苯甲酸，因此，極性大大減弱，這樣就較容易被弱極性的乙醚所提取，加入酸性氯化鈉后，由于鹽析作用，會(huì)使乙醚層中的微量水盡可能釋放出來，促進(jìn)分層。

另外，試驗(yàn)探討了乙醚用量對(duì)山梨酸、脫氫乙酸及苯甲酸萃取率的影響。用25 mL乙醚萃取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用25 mL乙醚萃取一次山梨酸、脫氫乙酸及苯甲酸的萃取率大于90%；經(jīng)過2次25 mL乙醚萃取，山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸能完全萃取。

因此，本試驗(yàn)選擇的前處理方法確定為1.3.2分析步驟的前處理方法。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限分析

在本試驗(yàn)條件下，采集不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品信號(hào)繪制其標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，3種防腐劑在質(zhì)量濃度為5.0～400.0 mg/L時(shí)，質(zhì)量濃度（C）與其峰面積（A）呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。以S/N＝3計(jì)，檢出限在0.12～0.21 mg/kg。3種防腐劑的相關(guān)系數(shù)和檢出限如表1所示。

表1 回歸曲線的基本參數(shù)

2.5 方法的準(zhǔn)確度和精密度分析

在不含有山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的醬腌菜樣品中分別添加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為5.0，50.0，200 mg/kg，每個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)水平重復(fù)5次，按照1.3.2分析步驟處理樣品，進(jìn)行精密度與準(zhǔn)確度的測(cè)定，3種添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)的方法回收率及精密度列于表2。從表2可以看出，該方法的回收率在87.6%～97.7%，RSD在0.8%～3.7%，表明該方法結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性良好。在四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測(cè)試中心2015年1月至2016年4月間，有179個(gè)醬腌菜樣品使用本研究的方法同時(shí)高效檢測(cè)山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸項(xiàng)目，共有28個(gè)樣品有檢出，其中，23個(gè)樣品中僅山梨酸檢出未超標(biāo)，3個(gè)樣品中苯甲酸檢出未超標(biāo)，2個(gè)樣品中脫氫乙酸檢出未超標(biāo)。

表2 方法的回收率和精密度試驗(yàn)（n＝5）

3 結(jié)論

本研究方法對(duì)3種防腐劑山梨酸、脫氫乙酸、苯甲酸的色譜分離效果良好、檢出限低、精密度高、標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍廣、加標(biāo)回收率高，符合色譜檢測(cè)的要求。而且操作簡(jiǎn)單、分析效率高，同時(shí)適合進(jìn)行大批量樣品的檢測(cè)，能滿足各級(jí)檢測(cè)機(jī)構(gòu)的實(shí)際檢測(cè)工作需要。

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Simultaneous Determination of Sorbic Acid，Dehydroacetic Acid and Benzoic Acid in Pickled Vegetables by Capillary Gas Chromatography

LIUWei，YANGXiaofeng，LEI Shaorong
（Analysis and TestingCenter，Sichuan Academy of Agricultural Sciences，Chengdu 610066，China）

Amethod based on capillarygas chromatographywas developed todetect sorbic acid,dehydroacetic acid and benzoic acid in pickled vegetables.After being acidified,samples were extracted with ether,separated on a capillary column（HP-FFAP,30.00 m× 0.32 mm×0.25 μm）and detected with a flame ionization detector（FID）.The result showed that the linear range was 5.0-400.0 mg/L and the linear correlation coefficients of sorbic acid,dehydroacetic acid and benzoic acid were greater than 0.999.The recoveries ranged from 87.6%to 97.7%with RSD（n=5）of 0.8%-3.7%.This method was stable,rapid and repeatable to detect the sorbic acid, dehydroacetic acid and benzoic acid in pickled vegetables．

sorbic acid;dehydroacetic acid;benzoic acid;gas chromatography;pickled vegetable

TS255.53

A

1002-2481（2016）10-1484-04

10.3969/j.issn.1002-2481.2016.10.14

2016-06-22

劉煒（1988-），女，重慶開縣人，研究實(shí)習(xí)員，主要從事食品安全分析研究工作。