高效液相色譜法測定山黃祛痛噴霧劑中秋水仙堿含量

虞 陽，林新艷，唐雯慧，殷書梅

（江蘇康緣陽光藥業(yè)有限公司，江蘇 南京 210046）

高效液相色譜法測定山黃祛痛噴霧劑中秋水仙堿含量

虞 陽，林新艷，唐雯慧，殷書梅

（江蘇康緣陽光藥業(yè)有限公司，江蘇 南京 210046）

目的 建立測定山黃祛痛噴霧劑中秋水仙堿含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱為Phenomenex Luna C18柱（150 mm× 4．6 mm，5 m），流動相為甲醇－水（45∶55），檢測波長為245 nm，柱溫為30℃，進樣量為10 L。結果 秋水仙堿質量濃度在2．0～50．1 g／mL范圍內與峰面積呈良好線性關系，回歸方程為 A＝35 181．93 C＋8．72(r＝0．999 9)，平均加樣回收率為 100．31%，RSD為2．23%（n＝9）。結論 該方法分離效率高、分析速度快、靈敏度高、易于實現自動化，為后期產品的質量控制和評價提供了科學依據。

高效液相色譜法；山黃祛痛噴霧劑；麗江山慈菇；秋水仙堿

山黃祛痛噴霧劑為中藥注冊6類新藥，源自江蘇省中醫(yī)院汪悅教授臨床經驗方，用于治療痛風急性發(fā)作期的外用抗炎鎮(zhèn)痛。本品處方君藥麗江山慈菇中所含秋水仙堿對急性痛風關節(jié)炎具有選擇性抑制作用，可與微管蛋白結合，妨礙有絲分裂中紡錘體的功能，并引起粒細胞和其他可移動細胞中原纖維微管解聚和消失，從而達到抗炎鎮(zhèn)痛的效果。本試驗中采用高效液相色譜（HPLC）法，以秋水仙堿作為山黃祛痛噴霧劑的含量控制指標進行方法學研究，現報道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫1200型高效液相色譜儀，DAD二極管陣列檢測器（安捷倫科技有限公司）；Mettler AB135－S型十萬分之一電子天平（梅特勒公司）；SK8200HP型超聲波清洗器（上?？茘u自動化系統有限公司）；甲醇為色譜純（默克公司）；水為重蒸餾水（自制）；秋水仙堿對照品（西格瑪公司，批號為2005985，標示純度98．0%）；山黃祛痛噴霧劑樣品，陰性制劑（江蘇康緣陽光藥業(yè)有限公司）。

2 方法與結果

2．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Phenomenex Luna C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm，美國菲羅門公司）；流動相：甲醇－水（45∶55）；檢測波長：245 nm；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。在此色譜條件下，秋水仙堿與其他相鄰組分色譜峰的分離度大于1．5，按秋水仙堿峰計算，理論板數應不低于1500。色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

精密稱取秋水仙堿對照品適量，置棕色瓶中，加甲醇制成每1 mL含0．01 mg的溶液，即得對照品溶液；分別取山黃祛痛噴霧劑（批號分別為 20100302，20100501，20100502，20100503，20110901）1 mL，精密取10 mL置容量瓶中，以70%甲醇定容至刻度，搖勻，再精密取1 mL，置10 mL容量瓶中，以70%甲醇定容至刻度，搖勻，以微孔濾膜（0．45 μm）過濾，即得供試品溶液；取缺麗江山慈菇的陰性制劑1 mL，同供試品溶液制備方法制備，即得陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

線性關系考察：按對照品溶液的制備方法，制備質量濃度為每 1 mL含秋水仙堿 0．100 2 mg的標準貯備液，搖勻。吸取標準貯備液1 mL，分別置50，25，10，5， 2 mL容量瓶中，分別加甲醇制成質量濃度為2．0，4．0，10．0，20．0，50．1 μg／mL的系列標準溶液。吸取上述溶液各10 μL進樣，測定，以峰面積（A）為縱坐標、對照品質量濃度（C，μg／mL）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程 A＝35 181．93 C＋8．72，r＝0．999 9（n＝5）。結果表明，秋水仙堿質量濃度在2．0～50．1 μg／mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：取質量濃度為10．0 μg／mL的標準溶液 10 μL，連續(xù)進樣 6次測定。結果的 RSD＝0．25%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液（批號為20100302），分別于0，2，4，8，12，24 h時進樣測定。結果的 RSD為1．03%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

重復性試驗：取同一批樣品（批號為20100302）依法制備供試品溶液，重復進樣6次，測定含量。結果的RSD＝1．99%（n＝6），表明該方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為20100302）0．5 mL，精密取10 mL，置容量瓶中，分別精密加秋水仙堿對照品溶液（質量濃度為0．100 2 g／L）2．1，2．5，3．1 mL，依法制備待測溶液，各重復進樣3次，按擬訂色譜條件進樣測定其含量。結果見表1。

表1 秋水仙堿加樣回收試驗結果（n＝9）

2．4 樣品含量測定

按擬訂方法，對4批樣品（批號分別為20100501，20100502，20100503，20110901）中秋水仙堿成分的含量進行檢測。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（n＝4，g／L）

3 討論

山黃祛痛噴霧劑屬中藥復方制劑，具有清熱解毒、消腫止痛的功效，用于治療急性痛風性關節(jié)炎濕熱蘊毒證。本品處方君藥為百合科山慈菇屬植物麗江山慈菇Iphigenia indica Kunth的干燥球莖，味微苦，性辛、寒，有毒，用于痛風、手足關節(jié)紅腫疼痛、瘡瘍腫毒、瘰疬結核、蟲蛇咬傷。其種子、球莖、葉、莖含秋水仙堿（colchicine）、角秋水仙堿（cornigerine）、β－光秋水仙堿（β－lumicolchicine）及N－甲酸－N－去乙酰秋水仙堿（N－formyl－N－deacetylcolchicine）等多種生物堿[1－2]，而秋水仙堿是針對痛風性關節(jié)炎有效的首選抗炎劑。

本試驗中以秋水仙堿為指標，采用簡便、準確的高效液相色譜法進行了含量測定方法的研究，結果顯示，該方法選擇性好，陰性無干擾。綜合文獻及前期自購麗江山慈菇藥材所測含量數據，麗江山慈菇中秋水仙堿的含量變化幅度較大（0．1% ～0．61%）[3]，其影響因素有生長年限、采收期、產地等。根椐實測麗江山慈菇藥材中秋水仙堿的含量及中試產品的秋水仙堿轉移率，并結合生產實際，暫訂本品含量限度為每1 mL含麗江山慈菇以秋水仙堿（C22H25NO6）計，不得少于0．27 mg。

[1]田素英，陳周全．山慈菇中秋水仙堿醇提工藝的優(yōu)選[J]．中草藥，2002，33（8）：708－710．

[2]何嘉莉，肖 瑩．從文獻統計探討急性痛風性關節(jié)炎的中醫(yī)藥治療規(guī)律[J]．浙江中醫(yī)雜志，2009，44（3）：224－225．

[3]袁理春，徐中志，趙 琪，等．麗江山慈姑秋水仙堿HPLC測定[J]．西南農業(yè)學報，2007，20（1）：120－122．

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)02－0059－03

虞陽（1989－），男，漢族，大學本科，助理工程師，主要從事新藥研究與開發(fā)工作，（電話）025－85661972（電子信箱 ）yugenius＠ qq．com；殷書 梅（1966－），女，漢族，大學本科，主任中藥師，主要從事新藥研究與開發(fā)工作，本文通訊作者，（電話）025－85661972（電子信箱）yin－shumei＠163．com。

2015－02－05；

2015－05－08)