氯吡脲在枇杷中的殘留降解及其膳食風(fēng)險評估

虞 淼，姚 芳，梁赤周，徐 永，陳小微

（浙江省農(nóng)藥檢定管理所，浙江杭州 310020）

氯吡脲在枇杷中的殘留降解及其膳食風(fēng)險評估

虞 淼，姚 芳，梁赤周，徐 永，陳小微

（浙江省農(nóng)藥檢定管理所，浙江杭州 310020）

采用簡單快速的前處理方法結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜準(zhǔn)確測定氯吡脲在枇杷果實中的殘留量，明確其消解規(guī)律，并進(jìn)一步結(jié)合現(xiàn)有的風(fēng)險評估模型，評價了杭州地區(qū)氯吡脲使用的環(huán)境和膳食風(fēng)險。連續(xù)試驗數(shù)據(jù)表明，氯吡脲在枇杷中的消解符合一級反應(yīng)動力學(xué)方程，半衰期分別為2.89～4.08 d；在推薦劑量和2倍推薦劑量（100和50倍稀釋倍數(shù)）下，在枇杷果徑長至1 cm時浸泡施藥1次，施藥7 d后其殘留量分別為0.039 8和0.052 8 mg·kg-1，施藥21 d后均未檢出，環(huán)境和膳食風(fēng)險低。

氯吡脲；枇杷；殘留；膳食風(fēng)險評估

氯吡脲（forchlorfenuron）又稱吡效隆、CPPU、KT-30等，其化學(xué)名稱1-（2-氯-4-吡啶基）-3-苯基脲，CAS登記號68157-60-8，是一種新型的人工合成取代苯脲類植物生長調(diào)節(jié)劑。氯吡脲對提高坐果率、促進(jìn)果實膨大及實現(xiàn)單性結(jié)實等方面具有顯著效果，給使用者帶來顯著經(jīng)濟(jì)利益，也因此被廣泛應(yīng)用于各種果樹和果菜類生產(chǎn)［1］。

自1987年四川大學(xué)在國內(nèi)率先合成氯吡脲開始，我國對氯吡脲在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用開展了廣泛的研究，基本涵蓋了黃瓜、西瓜、草莓、蘋果、梨、桃、獼猴桃、葡萄、柑橘、枇杷、菠蘿等主要果樹和果菜類。試驗結(jié)果多令人滿意，但因氯吡脲可能會對人體健康帶來潛在危害［2］，各國對其最高殘留量做出了嚴(yán)格限定。GB 2763—2014規(guī)定，氯吡脲在獼猴桃、葡萄和枇杷上的限量值為0.05 mg·kg-1，在黃瓜和西瓜上為0.1 mg·kg-1。關(guān)于氯吡脲在果蔬中的殘留［3-6］等安全性問題研究相對較少，范圍也較為局限。柴振林等［4］研究了不同濃度氯吡脲在獼猴桃中的殘留動態(tài)，掌握潛在風(fēng)險，指導(dǎo)安全生產(chǎn)；侯玉茹等［5］采用固相萃取-高效液相色譜法對葡萄中的氯吡脲殘留量進(jìn)行測定；龔勇等［6］建立了氯吡脲在黃瓜、西瓜和土壤中的殘留分析方法。近年來，隨著越來越多的乒乓球葡萄、頂花帶刺的黃瓜、體形碩大卻淡而無味的獼猴桃等非常規(guī)果蔬產(chǎn)品的出現(xiàn)，使民眾對氯吡脲等植物生長調(diào)節(jié)劑潛在的安全性問題表現(xiàn)出極大地疑慮，而2011年5月江蘇的西瓜爆炸事件（緣于氯吡脲的使用不當(dāng)）更是引發(fā)了消費(fèi)者恐慌，雖經(jīng)權(quán)威部門的及時辟謠而平靜，但問題并未完全解決，亟須進(jìn)一步研究。

張志恒等［7］的氯吡脲膳食風(fēng)險評估報告，通過現(xiàn)有數(shù)據(jù)和模型及周密研算，明確指出我國各類人群氯吡脲殘留的膳食攝入風(fēng)險非常低，現(xiàn)有的氯吡脲MRL標(biāo)準(zhǔn)對消費(fèi)者具有較高的保護(hù)水平。但該報告同時也指出，由于殘留數(shù)據(jù)的缺乏，風(fēng)險評估還存在一定的不確定性。有鑒于此，本文按照我國農(nóng)藥殘留登記試驗的要求進(jìn)行了氯吡脲在杭州地區(qū)枇杷上的殘留試驗，以成熟的前處理方法和定性定量準(zhǔn)確的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀共同提供嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臍埩魯?shù)據(jù)，為科學(xué)評價氯吡脲的膳食風(fēng)險提供堅實的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

試驗地點設(shè)在浙江省海寧市許村浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院楊渡科研基地。供試枇杷品種為未施用過氯吡脲的枇杷果園中樹齡為5～7年且長勢良好的白沙枇杷樹。

儀器有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（Waters Xevo TQ MS），勻漿機(jī)（IKA?-WERKE，T25 basic），電熱恒溫水浴鍋（上海浦東榮豐科技儀器有限公司，H. H.S-8），水浴氮吹儀（Organomation Associates Jnc，N-EVAP 112），旋渦混勻器（IKA MS3 basic），電子天平（BSA2202S，Sartoris公司）。

試劑有1 000 mg·L-1氯吡脲（forchlorfenuron）標(biāo)準(zhǔn)溶液（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所）；0.1%氯吡脲水劑（成都施特優(yōu)化工有限公司）；乙腈為UV級（Honeywell Burdick&Jackson公司）；乙二胺-N-丙基硅烷吸附劑（PSA）、無水硫酸鎂、氯化鈉等試劑均為市售分析純；試驗用水為去離子水；有機(jī)濾膜0.22μm。

1.2 消解動態(tài)處理設(shè)計

每小區(qū)2株，設(shè)3個重復(fù)及空白對照區(qū)，小區(qū)間設(shè)保護(hù)行。0.1%氯吡脲因易引起藥害（枇杷裂果），因此按說明書推薦劑量施用，即稀釋100和50倍，施藥方式為浸漬1 cm左右果徑的幼果（疏掉其余幼果及花蕾）30 s，并分別于施藥后2 h（果實表面干爽）和2、5、7、14、21、28 d后采集枇杷樣品。

1.3 分析方法

1.3.1 樣品預(yù)處理

將采集的樣品去核后高速搗碎，裝瓶密封后在-20℃冰箱中保存待測。

1.3.2 樣品提取與凈化

稱取枇杷樣品30.00 g，置于250 m L的燒杯中，加入60 m L乙腈，高速勻漿2 m in后過濾到100 m L具塞量筒中，加入6 g氯化鈉，振搖提取1 m in，靜止15 m in分層后，分離有機(jī)相和水相，用吸量管量取10 m L有機(jī)相于50 m L小燒杯中，于80℃水浴氮吹至近干。用2 m L二氯甲烷+甲醇（9∶1，V/V）混合液溶解，待凈化。

凈化用氨基柱，先用4 m L二氯甲烷+甲醇（9∶1，V/V）的混合液預(yù)淋洗柱子，當(dāng)溶液到達(dá)吸附層表面時，立即將上述濃縮液加至柱中，并用10 m L的刻度試管接洗脫液，以上述混合液4 mL洗滌3次，收集全部淋洗液。將收集的洗脫液在45℃水浴氮吹儀吹至近干，用2 m L的甲醇溶解，再加入2 m L超純水混合搖勻。靜止至室溫后，用超純水定容至5 m L，用0.22μm濾膜過濾，濾液加入進(jìn)樣瓶，待上機(jī)。

1.3.3 色質(zhì)譜條件

色譜柱為C18柱（100 mm×2.1 mm×2.6μm）；流動相為甲醇（A）與0.1%乙酸銨溶液（B）；進(jìn)樣量5μL。洗脫條件及流速見表1。電離方式為ESI+；離子源溫度150℃；毛細(xì)管電壓為3.0 KV；脫溶劑氣溫度500℃；脫溶劑氣流量800 L·h-1；錐孔反吹氣流量40 L·h-1；碰撞氣流速0.15 mL· min-1；錐孔電壓30 V；檢測方式為多反應(yīng)監(jiān)測MRM，m/z 247.9/129.0為定量離子對，m/z 247.9/93.1為定性離子對。

表1 流動相梯度及流速

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

準(zhǔn)確移取濃度為1 000 mg·L-1氯吡脲標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00 m L，用乙腈溶解并定容至10.0 m L，配制成濃度為100 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)母液，再用空白樣品提取溶液將標(biāo)準(zhǔn)母液稀釋混勻，最終得到質(zhì)量濃度分別為0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液，過膜后檢測。以進(jìn)樣質(zhì)量濃度為x軸，峰面積為y軸，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.3.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

數(shù)據(jù)采用外標(biāo)法定量，添加回收率采用單點法，樣品消解動態(tài)采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量計算。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的靈敏度與線性范圍

通過基質(zhì)加標(biāo)的方式得到枇杷中的最低檢測濃度為0.003 4 mg·kg-1（S/N=10），在0.01～5.00 mg·L-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=476.4 X+164.9，R2=0.997，具有良好的靈敏度和線性范圍。

2.2 添加回收率

在枇杷果實（去核）中添加氯吡脲標(biāo)準(zhǔn)溶液，使得枇杷果實中加標(biāo)濃度分別為0.01，0.10和1.00 mg·kg-1，每濃度重復(fù)3次，測定方法的回收率。

表2顯示，當(dāng)添加水平為0.01～1.00 mg· kg-1時，回收率78.6%～127.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.4%～8.4%之間，符合農(nóng)藥殘留分析要求。

表2 氯吡脲在果實（去核）中的添加回收率

2.3 消解動態(tài)

2011年實行10和20 mg·L-1氯吡脲在枇杷上的消解動態(tài)試驗（表3）。經(jīng)回歸分析，消解規(guī)律符合一級動力學(xué)反應(yīng)模式，回歸方程分別為ct= 0.188 e-0.24t（R2=0.930）和ct=0.310 e-0.17t（R2= 0.828），半衰期分別為2.89和4.08 d。

2.4 最終殘留及膳食風(fēng)險評估

不同施藥劑量和不同采收間隔期的最終殘留水平研究結(jié)果顯示，距最后1次施藥5 d采收的枇杷樣品，氯吡脲的殘留量均小于0.1 mg·kg-1，隨著采收時間延長至7 d，殘留量進(jìn)一步降低，推薦劑量施藥下的殘留量為0.039 8 mg·kg-1，低于國標(biāo)限量要求（0.05 mg·kg-1）；2倍推薦劑量施藥下的殘留量為0.052 8 mg·kg-1，略高于國標(biāo)的限量要求；當(dāng)采收時間再延長時，殘留量均低于國標(biāo)要求甚至未檢出。

表3 氯吡脲在枇杷果實中的消解動態(tài)

3 小結(jié)

本試驗采用高效液相色譜質(zhì)譜法對枇杷中氯吡脲進(jìn)行殘留分析，前處理用液相萃取技術(shù)，C18色譜柱分離，簡化了試驗步驟，縮短了試驗時間。以10倍信噪比計算出枇杷中氯吡脲的最低檢出濃度為0.003 4 mg·kg-1，在0.01～1.0 mg·kg-1添加范圍內(nèi)，回收率在78.6%～127.1%，RSD為1.4%～8.4%，符合農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則的要求。通過噴施2種不同劑量氯吡脲，檢測發(fā)現(xiàn)，枇杷中常規(guī)劑量和加倍劑量下的消解半衰期分別為2.89和4.08 d，施藥21 d后殘留量未檢出。這將為今后高效、安全、合理使用氯吡脲提供一定的參考價值。

［1］ 張衛(wèi)煒，楊永珍.氯吡脲的研究及應(yīng)用進(jìn)展［J］.農(nóng)藥科學(xué)與管理，2006，27（5）：36-40.

［2］ 李瑞娟，于建壘，宋國春.氯吡脲的環(huán)境行為及其安全性的研究進(jìn)展［J］.農(nóng)藥，2008，47（4）：240-243.

［3］ 雷紹榮，郭靈安，毛建霏，等.氯吡脲殘留檢測技術(shù)進(jìn)展及趨勢［J］.中國測試，2011，37（6）：53-56.

［4］ 柴振林，楊柳，朱杰麗，等.氯吡脲在獼猴桃中的殘留動態(tài)研究［J］.果樹學(xué)報，2013，30（6）：1011-1015.

［5］ 侯玉茹，楊媛，石磊，等.固相萃取-高效液相色譜法檢測葡萄中氯吡脲的研究［J］.食品科技，2011，36（1）：255-258.

［6］ 龔勇，單煒力，簡秋，等.黃瓜、西瓜和土壤中氯吡脲殘留分析方法［J］.農(nóng)藥科學(xué)與管理，2011，32（11）：30-34.

［7］ 張志恒，湯濤，徐浩，等.果蔬中氯吡脲殘留的膳食攝入風(fēng)險評估［J］.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，45（10）：1982-1991.

（責(zé)任編輯：張瑞麟）

S481

：A

：0528-9017（2016）12-2091-03

文獻(xiàn)著錄格式：虞淼，姚芳，梁赤周，等.氯吡脲在枇杷中的殘留降解及其膳食風(fēng)險評估［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，57（12）：2091-2093.

10.16178/j.issn.0528-9017.20161253

2016-08-15

虞 淼（1981—），男，浙江寧波人，農(nóng)藝師，碩士，從事農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留分析、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全工作，E-mail：yumiao2020@sina.com。