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    洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病的抑菌活性試驗(yàn)

    2017-01-04 10:52:23祁高展高丹丹
    浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年12期
    關(guān)鍵詞:輪紋病粗提物鱗莖

    祁高展,高丹丹

    (西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅蘭州 730030)

    洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病的抑菌活性試驗(yàn)

    祁高展,高丹丹*

    (西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅蘭州 730030)

    以新鮮洋蔥鱗莖為原料,采用水勻漿法制備粗提物,通過(guò)體外抑菌實(shí)驗(yàn)研究其對(duì)蘋果輪紋病的抑菌作用。結(jié)果表明,不同質(zhì)量濃度洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)均具有抑制活性,濃度越高,抑制作用越強(qiáng);抑制孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)的最低有效質(zhì)量濃度為3.125 mg·mL-1,當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到50 g· mL-1時(shí),其對(duì)孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)的抑制率分別達(dá)到99.0%和97.5%。

    洋蔥鱗莖;粗提物;蘋果輪紋??;抑菌作用

    蘋果輪紋病是蘋果重要病害之一,大面積發(fā)生時(shí),果實(shí)爛果率達(dá)到30%~50%[1]。目前,控制蘋果輪紋病主要采用化學(xué)藥劑處理,但是化學(xué)藥劑處理會(huì)造成蘋果中藥品殘留超標(biāo),對(duì)人體產(chǎn)生危害,不符合無(wú)公害產(chǎn)品生產(chǎn)要求[2-12]。因此,就需要一種簡(jiǎn)單、安全的方法來(lái)防治蘋果輪紋病。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    供試洋蔥(Allium sativum L.)為市售新鮮白皮洋蔥,蘋果輪紋病病原物(Physalospora piricola Nose)由西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院提供,蘋果為天水產(chǎn)白娃娃品種,從當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)購(gòu)買。

    使用的儀器設(shè)備有SW-CJ-1FDSW-CJ-2FD型無(wú)菌操作臺(tái)(蘇州江東精密儀器有限公司);YX-280B+型手提式高壓滅菌鍋(北京維欣儀奧科技有限公司);YP1201N型電子天平(上海精密儀器有限公司);HY-4型搖床(廣州市科訊實(shí)驗(yàn)器材有限公司);HV-1000Z型臺(tái)式硬度計(jì)(上海聯(lián)爾實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);MZB-85手持折光儀(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 不同質(zhì)量濃度洋蔥粗提物制備

    將新鮮洋蔥去皮,準(zhǔn)確稱量20.0 g,放入研缽研磨,邊研磨邊加入200 m L無(wú)菌水,濾紙過(guò)濾,得濾清液,配制成質(zhì)量濃度為100 mg·m L-1的母液,然后將母液稀釋成0、0.391、0.781、1.560、3.130、6.250、12.500和25.000 mg·m L-1的梯度溶液,剩余母液置于4℃冰箱內(nèi)儲(chǔ)藏備用。此過(guò)程需在無(wú)菌條件下進(jìn)行操作。

    1.2.2 抑菌圈直徑測(cè)定

    用打孔器打取孔徑為8 mm的濾紙片,滅菌,浸泡在配制好的不同質(zhì)量濃度(0~25.000 mg· m L-1)的粗提物溶液中。浸泡60 min后將濾紙片取出瀝干,置于涂布好病菌的PDA培養(yǎng)基中央,25℃避光培養(yǎng),3 d后量取抑菌圈直徑。每處理2個(gè)濾紙片,重復(fù)3次。

    1.2.3 菌絲生長(zhǎng)抑制活性測(cè)定

    含粗提物培養(yǎng)基的制備。將PDA培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌,將配制好的(0~25.0 mg·m L-1)粗提物溶液與相同體積的培養(yǎng)基混合均勻,配制成含粗提物0、1.5625、3.125、6.25、12.5、25.0和50.0 mg·m L-1的培養(yǎng)基,倒于平板上備用。

    平板菌落制備。將病原菌活化,加無(wú)菌水,配成濃度為104~105個(gè)·m L-1的菌懸液,用5 m L移液管吸取菌懸液于PDA平板上,25℃避光培養(yǎng),待菌落布滿平板后使用。

    抑菌活性測(cè)定。用直徑8 mm打孔器在菌落生長(zhǎng)良好的平板上打取圓形菌片,放置在含不同質(zhì)量濃度粗提物的PDA培養(yǎng)基中央,25℃避光培養(yǎng),每皿放置1個(gè)菌片,重復(fù)3次,3 d后量取菌落擴(kuò)展直徑,并計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。

    菌絲生長(zhǎng)抑制率/%=(對(duì)照皿菌落直徑-處理皿菌落直徑)/對(duì)照皿菌落直徑×100。

    1.2.4 孢子萌發(fā)抑制活性測(cè)定

    將病原菌培養(yǎng)產(chǎn)生孢子,配成400倍物鏡下每個(gè)視野20個(gè)孢子的菌懸液。用移液槍吸取60μL菌懸液,分別與同體積不同質(zhì)量濃度的粗提物混合均勻。將載玻片放入培養(yǎng)皿中,皿底鋪有濾紙,將打好的孔徑為15 mm的PDA培養(yǎng)基置于載玻片上,每皿放置2片。用移液槍吸取30μL混合液于培養(yǎng)基上,25℃避光培養(yǎng)24 h后,400倍物鏡下鏡檢病原菌孢子萌發(fā)情況,計(jì)算病菌孢子萌發(fā)率和萌發(fā)抑制率。

    孢子萌發(fā)率/%=(孢子萌發(fā)數(shù)/總孢子數(shù))×100;

    孢子萌發(fā)抑制率/%=(對(duì)照孢子萌發(fā)數(shù)-處理孢子萌發(fā)數(shù))/對(duì)照孢子萌發(fā)數(shù)×100。

    用DPS和Excel軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 對(duì)蘋果輪紋病菌的抑菌活性

    由表1可以看出,低質(zhì)量濃度洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病抑制效果不明顯,隨著粗提物質(zhì)量濃度提高,抑菌圈直徑增大,兩者之間呈正相關(guān)關(guān)系;當(dāng)質(zhì)量濃度大于3.125 mg·m L-1時(shí),各處理與對(duì)照間的差異達(dá)到極顯著水平;但質(zhì)量濃度為3.125和6.25 mg·m L-1的2個(gè)處理間及3.125和1.562 5 mg·m L-1的2個(gè)處理間的差異不顯著。

    表1 不同質(zhì)量濃度洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病的抑菌效果

    2.2 對(duì)蘋果輪紋病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制活性

    從表2可以看出,洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病菌絲生長(zhǎng)具有抑制活性,并且隨著粗提物質(zhì)量濃度的增加,抑制作用逐漸增強(qiáng)。質(zhì)量濃度為6.25 mg·m L-1的處理對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率達(dá)到了51.6%,且處理與對(duì)照間的差異達(dá)到極顯著水平;質(zhì)量濃度分別為12.5、25和50 mg·m L-1的處理對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率分別達(dá)到了70.7%、87.6%和97.5%。但25和50 mg·m L-12個(gè)處理之間的差異不顯著。

    表2 不同質(zhì)量濃度洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病菌絲生長(zhǎng)的抑制活性

    2.3 對(duì)蘋果輪紋病孢子萌發(fā)的抑制活性

    由表3可以看出,隨著洋蔥鱗莖粗提物質(zhì)量濃度的提高,其對(duì)蘋果輪紋病菌孢子萌發(fā)的抑制活性逐漸增強(qiáng)。當(dāng)質(zhì)量濃度大于3.125 mg·m L-1時(shí),各處理的孢子萌發(fā)抑制率分別達(dá)到了38.0%、74.5%、96.6%、98.1%和99.0%,且各處理的孢子萌發(fā)率與對(duì)照間的差異均達(dá)到了極顯著水平,但1.562 5和3.125 mg·m L-12個(gè)處理間以及12.5、25和50 mg·m L-13個(gè)處理間的差異不顯著。

    表3 不同質(zhì)量濃度洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病孢子萌發(fā)的抑制效應(yīng)

    3 小結(jié)與討論

    不同質(zhì)量濃度的洋蔥鱗莖粗提物對(duì)病原物的菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)均具有抑菌活性,抑菌活性與質(zhì)量濃度呈正相關(guān)關(guān)系,抑菌實(shí)驗(yàn)篩選出的最低有效抑菌濃度為3.125 mg·mL-1;當(dāng)濃度為50 mg· m L-1時(shí),其對(duì)病原物孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)的抑制率分別達(dá)到99.0%和97.5%。

    利用天然植物活性物質(zhì)對(duì)真菌病害的拮抗性是果蔬采后病害無(wú)害化防治的一個(gè)重要研究方向,符合綠色無(wú)公害農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)的理念,在這方面,相關(guān)科研人員做了大量的研究工作,但目前尚沒(méi)有成熟可靠的技術(shù)可用于生產(chǎn)實(shí)際,因此相關(guān)工作還需要進(jìn)一步的深入開(kāi)展。洋蔥含有很多活性物質(zhì),其對(duì)很多真菌具有拮抗作用,且來(lái)源廣泛,價(jià)格低廉,本研究為洋蔥鱗莖粗提物用于蘋果輪紋病無(wú)害化防治技術(shù)的開(kāi)發(fā)做一些基礎(chǔ)性的工作。

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    (責(zé)任編輯:張才德)

    S436

    :A

    :0528-9017(2016)12-2065-02

    文獻(xiàn)著錄格式:祁高展,高丹丹.洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病的抑菌活性試驗(yàn)[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,57(12):2065-2067.

    10.16178/j.issn.0528-9017.20161245

    2016-09-18

    祁高展(1981—),男,河南商丘人,講師,碩士,研究方向?yàn)檗r(nóng)產(chǎn)品貯藏和加工,E-mail:270995651@qq.com。

    高丹丹,E-mail:109458906@qq.com。

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