多粘類芽孢桿菌防治鐵皮石斛細菌性葉斑病及促生效果

徐桑爾，盧 鵬，金莉萍，王勇軍*

（浙江農林大學a.林業(yè)與生物技術學院，b.生物農藥高效制備技術國家地方聯(lián)合工程實驗室，浙江臨安 311300）

多粘類芽孢桿菌防治鐵皮石斛細菌性葉斑病及促生效果

徐桑爾a，盧 鵬b，金莉萍a，王勇軍ab*

（浙江農林大學a.林業(yè)與生物技術學院，b.生物農藥高效制備技術國家地方聯(lián)合工程實驗室，浙江臨安 311300）

采用雙層培養(yǎng)法測定了生防細菌多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛細菌性葉斑病病原細菌的拮抗活性，溫室試驗測定了CF05防治鐵皮石斛細菌性葉斑病的效果。結果表明，CF05菌劑顯著抑制鐵皮石斛細菌性葉斑病病原細菌的生長，對病害的防治效果達到63.6%。同時，CF05菌劑顯著促進鐵皮石斛的生長，鮮質量提高了31.0%，側芽增加31.58%。

多粘類芽孢桿菌；鐵皮石斛；細菌性葉斑病

鐵皮石斛（Dendrobium officinal Kimura et Migo）為蘭科石斛屬多年生草本植物，是一種重要的藥用植物，已在我國進行了大面積栽培。當前，一種由萎蔫短小桿菌（Curtobacterium flaccum faciens）引起的細菌性葉斑病在浙江很多鐵皮石斛種植大棚發(fā)生嚴重，導致產量損失嚴重［1］，亟待安全有效的防治措施。

多粘類芽孢桿菌（Paenibacillus polymyxa）是一種廣泛存在于土壤、植物體內的根際促生菌，對真菌、細菌、線蟲等引起的植物病害具有防治效果，是一種安全高效的生物農藥。多粘類芽孢桿菌通過產生多種抗生素及酶等物質拮抗植物病原菌的生長，誘導植物產生水楊酸，誘發(fā)植物系統(tǒng)抗性，合成植物生長素、細胞分裂素等物質促進植物生長，具有溶磷、固氮等活性［2］。本研究測定了多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛細菌性葉斑病的防治效果和促生效果。

1 材料與方法

1.1 材料

生防菌多粘類芽孢桿菌CF05分離自浙江天目山柳杉土壤中，本實驗室保存［3］。5×1010·m L-1芽孢桿菌液由生物農藥高效制備技術國家地方聯(lián)合工程實驗室通過發(fā)酵制備，用水稀釋至108· m L-1。病原菌萎蔫短小桿菌YJ-05分離自發(fā)病的鐵皮石斛，本實驗室保存［1］。溫室生物防治效果測定在臨安天目山鐵皮石斛潘山基地，供試植物為6個月幼苗。

1.2 方法

1.2.1 雙層培養(yǎng)法測定CF05對植物病原細菌的拮抗作用

取10μL CF05菌懸液點于LB培養(yǎng)基上，每皿1點，30℃培養(yǎng)36 h后，用三氯甲烷熏蒸10～12 h，殺死細菌；制備1×109·m L-1的病原細菌菌懸液，取100μL病原菌菌懸液加入到10 m L融化后冷卻至45℃左右的半固體LB培養(yǎng)基中，迅速混勻，倒入經過熏蒸后的多粘類芽孢桿菌培養(yǎng)基上，均勻鋪平，30℃培養(yǎng)24 h，觀察抑菌圈。

1.2.2 CF05防治鐵皮石斛細菌性葉斑病的效果測定

采用每盆20 m L稀釋后的CF05芽孢菌液進行灌根處理，空白對照（CK）為20 m L清水。每處理設重復3次，隨機區(qū)組排列。每個重復100盆，分別于2015年4月24日和2015年5月11日進行2次灌根，2015年6月30日調查病情指數(shù)。病級參考郭曉強等［4］進行劃分。

1.2.3 鐵皮石斛促生能力測定

按照1.2.2節(jié)進行處理，灌根2次后，稱量植株鮮質量，計算植物側芽數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用DPS v7.05數(shù)據(jù)系統(tǒng)進行統(tǒng)計分析，顯著性水平采用Duncan’s新復極差法分析。

2 結果與分析

2.1 CF05對鐵皮石斛細菌性葉斑病病原菌的拮抗作用

從圖1可以看出，多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛細菌性葉斑病病原菌具有明顯的拮抗效果，抑菌圈明顯，說明CF05菌株可產生活性較強的拮抗物質。

圖1 多粘類芽孢桿菌對鐵皮石斛細菌性葉斑病病原菌的拮抗作用

2.2 CF05對鐵皮石斛細菌性葉斑病的防治效果

從表1可以看出，CF05芽孢菌液處理后病情增長率為32.8%，明顯低于對照的90.1%，防治效果達到63.6%，說明CF05對鐵皮石斛細菌性葉斑的擴展具有明顯的抑制作用，防治效果顯著。

表1 多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛細菌性葉斑病的防治效果

2.3 CF05對鐵皮石斛的促生效果

從表2可以看出，多粘類芽孢桿菌CF05處理的鐵皮石斛生長勢明顯較對照好，葉片幼嫩新鮮，鮮質量較對照增加了31.0%。多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛側芽的萌發(fā)具有明顯的促進作用，增加率達到31.5%。因此，多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛具有顯著的促生效果。

表2 多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛的促生效果

3 小結與討論

隨著化學農藥的大量使用，環(huán)境安全和食品安全等問題日趨嚴重，安全高效的生物農藥可成為替代化學農藥的首選，生物農藥的研究和應用也成為當前植物病蟲害防治的熱點。本試驗測定了多粘類芽孢桿菌CF05對鐵皮石斛細菌性葉斑病的防治效果和促生效果，表明多粘類芽孢桿菌可有效防治鐵皮石斛細菌性葉斑病，并具有顯著的促生效果，是一種藥肥雙效的微生物菌劑，表現(xiàn)出很好的推廣應用價值。當前，活體生物農藥在農業(yè)上的廣泛推廣使用仍面臨穩(wěn)定性不好、效果不高、生產成本偏高等問題［5］，今后將針對微生物遺傳改良、發(fā)酵工藝優(yōu)化及農藥制劑品種改良等方面來開展下一步研究。

［1］ WANG Y，JIN L，LU P.First report of bacterial leaf spot caused by Curtobacterium flaccum faciens on Dendrobium officinale Kimura et Migo in China［J］.Plant Disease，2016，100（2）：515.

［2］ 蒼桂璐，張付云，楊陽，等.多粘類芽孢桿菌的研究進展［J］.安徽農業(yè)科學，2013（2）：487-489.

［3］ 郭芳芳，謝鎮(zhèn)，盧鵬，等.一株多粘類芽孢桿菌的鑒定及其生防促生效果初步測定［J］.中國生物防治學報，2014（4）：489-496.

［4］ 郭曉強，李翔，趙志強，等.不同殺菌劑對花生葉斑病防治效果及產量影響的研究［J］.花生學報，2014（1）：56-60.

［5］ 陳軍，孫冬麗，繆有志，等.微生物農藥的研究進展［J］.安徽農業(yè)科學，2010，38（23）：12561-12563.

（責任編輯：侯春曉）

S432.4+2；S567.23+9

：A

：0528-9017（2016）12-2033-02

文獻著錄格式：徐桑爾，盧鵬，金莉萍，等.多粘類芽孢桿菌防治鐵皮石斛細菌性葉斑病及促生效果［J］.浙江農業(yè)科學，2016，57（12）：2033-2034.

10.16178/j.issn.0528-9017.20161233

2016-09-27

浙江省“三農六方”科技協(xié)作計劃

徐桑爾（1993—），女，浙江紹興人，碩士研究生，從事植物病理學研究工作，E-mail：610674352@qq.com。

王勇軍（1981—），男，江西撫州人，副教授，從事微生物農藥開發(fā)工作，E-mail：wangyj@zafu.edu.cn。