黑果枸杞對大鼠運(yùn)動性心肌損傷的保護(hù)作用

崔紀(jì)芳,曹建民,周海濤,郭 嫻

黑果枸杞對大鼠運(yùn)動性心肌損傷的保護(hù)作用

崔紀(jì)芳1,曹建民2,周海濤3,郭 嫻2

目的：研究黑果枸杞對長時(shí)間、大強(qiáng)度運(yùn)動導(dǎo)致的大鼠運(yùn)動性心肌損傷的保護(hù)。方法：以大強(qiáng)度耐力訓(xùn)練大鼠為模型，將55只42天齡雄性SPF級Wistar大鼠分為5組(數(shù)字隨機(jī)分組法)：安靜對照組(C組)、運(yùn)動對照組(M組)、運(yùn)動+黑果枸杞低劑量組(LM I組)，運(yùn)動+黑果枸杞中劑量組(LM II組)，運(yùn)動+黑果枸杞高劑量組(LM III組)，各組均為10只大鼠(剔除不符合實(shí)驗(yàn)要求的大鼠5只)。每天對大鼠灌胃(ig)1次，不同劑量水平干預(yù)組黑果枸杞劑量由低到高分別為0.25 g/kg、0.5 g/kg、1.5 g/kg，灌胃體積為5 mL/kg，C組、M組大鼠ig等量生理鹽水。游泳訓(xùn)練42天后，分別測定各組大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶等心肌損傷標(biāo)志物含量、心肌超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量，血清、心肌內(nèi)皮素及降鈣素基因相關(guān)肽含量等相關(guān)生化指標(biāo)。結(jié)果：血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(P<0.01)、乳酸脫氫酶(P<0.01)、肌酸激酶(P<0.05)、a-羥丁酸脫氫酶(P<0.01)、肌鈣蛋白I(P<0.01)，M組較C組顯著升高。血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶含量，LM各組較M組均有所降低(均為P<0.01)，組間無明顯差異；肌酸激酶含量，LM各組較M組均有所降低(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01)，組間無差異；a-羥丁酸脫氫酶、肌鈣蛋白I含量，LM各組較M組均有所降低(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01)，且組間隨劑量增加而遞減[LM III組低于LM I組(P<0.05)]。心肌SOD活性，M組較C組顯著降低(P<0.01)，LM各組較M組顯著升高(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01)，且組間隨劑量增加而遞增[LM II(P<0.05)、LM III組(P<0.01)高于LM I組]。心肌MDA含量，M組較C組顯著性升高(P<0.05)；LM各組較M組均顯著降低(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01)，且隨黑枸杞劑量增加而遞減[LM II(P<0.05)，LM III組(P<0.01)低于LM I組]。血清與心肌內(nèi)皮素含量，M組較C組顯著升高(P<0.05)，LM各組較M組顯著降低(血清內(nèi)皮素LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01，心肌內(nèi)皮素LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.01、P<0.01)，且組間皆隨劑量增加而遞減[LM III組(P<0.05)低于LM I組]。血清、心肌降鈣素基因相關(guān)肽含量，M組較C組顯著降低(P<0.05)，LM各組較M組顯著升高(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01)，且組間隨劑量增加而遞增[LM III組(P<0.05)高于LM I組]。結(jié)論：補(bǔ)充黑果枸杞對抗運(yùn)動性心肌損傷具有多靶點(diǎn)、多途徑的顯著特點(diǎn)。不同劑量黑果枸杞的補(bǔ)充可以有效地促進(jìn)抗氧化酶活性的增加，清除機(jī)體產(chǎn)生的過量的自由基，抑制內(nèi)皮細(xì)胞分泌內(nèi)皮素，促進(jìn)降鈣素基因相關(guān)肽的分泌，保證二者濃度的相對平衡。從而阻止因長時(shí)間、大強(qiáng)度運(yùn)動導(dǎo)致的心肌脂質(zhì)過氧化作用和心肌損傷，其中，以高劑量組(LM Ⅲ組)效果為最好。關(guān)鍵詞：黑果枸杞；心肌損傷標(biāo)志物；抗氧化酶；內(nèi)皮素；降鈣素基因相關(guān)肽；運(yùn)動性心肌損傷

運(yùn)動是一種特殊的應(yīng)激源。適度、有規(guī)律的運(yùn)動有助于促進(jìn)人體健康及提升運(yùn)動能力。為提高運(yùn)動能力及運(yùn)動成績，運(yùn)動員需定期進(jìn)行大強(qiáng)度訓(xùn)練。由于負(fù)荷大、周期長、恢復(fù)時(shí)間短等因素，長時(shí)間、大強(qiáng)度運(yùn)動極易超越機(jī)體的承受極限，造成過度訓(xùn)練并誘發(fā)多器官出現(xiàn)功能紊亂的病理狀態(tài)。有研究表明，過度訓(xùn)練會誘發(fā)心臟產(chǎn)生一系列病理及功能的改變，導(dǎo)致運(yùn)動性心臟超負(fù)荷、心肌損傷、心肌局部組織結(jié)構(gòu)破壞[2，14，20]。運(yùn)動性心肌損傷已成為當(dāng)前軍事醫(yī)學(xué)和運(yùn)動醫(yī)學(xué)急需解決的焦點(diǎn)問題。本實(shí)驗(yàn)選用青海產(chǎn)黑果枸杞對過度訓(xùn)練大鼠進(jìn)行營養(yǎng)干預(yù)，并通過測試血清中心肌損傷標(biāo)志物[15，17，19]：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase，ALT)、乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase，LDH)、肌酸激酶(Creatine kinase，CK)、a-羥丁酸脫氫酶(a-hydroxybutyrate dehydrogenase，a-HBDH)、肌鈣蛋白I(cTnI)的含量、心肌超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)的活性血清和心肌內(nèi)皮素(Endothelin，ET)及降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin gene related peptide，CGRP)的水平，觀察其對過度訓(xùn)練大鼠運(yùn)動性心肌損傷的保護(hù)作用。旨在為黑果枸杞在運(yùn)動營養(yǎng)和運(yùn)動醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 研究材料

1.1 藥物

黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)，產(chǎn)自青海，購于青海雪誼德寶生物科技有限公司。將干燥的黑果枸杞以浸漬法制備成濃度1 g/mL的溶液，4℃冰箱避光冷藏待用[5]。

1.2 試劑盒

ALT、LDH、CK、a-HBDH試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，批號 20140921),cTnI(上海美旋生物科技有限公司，批號20150311)試劑盒，SOD、MDA試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號 20140929)，ET、CGRP試劑盒(北京華英生物技術(shù)研究所，批號20141009)。

1.3 動物

55只42天齡SPF級雄性Wistar大鼠，平均體重196.2±10.3 g。實(shí)驗(yàn)動物由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)部提供，合格證編號SCXK(京)2006-0008，北京體育大學(xué)動物飼養(yǎng)室(許可證編號SYXK(京)2011-0034)飼養(yǎng)。

1.4 儀器

7160全自動生化分析儀(日本日立公司)，Allegra 25R臺式高速離心機(jī)(美國Beckman Coulter公司)，r-911全自動放免計(jì)數(shù)儀(中國科技大學(xué)實(shí)業(yè)總公司)，Wellscans K3 酶標(biāo)儀(美國雷博公司)，722分光光度計(jì)(上海分析儀器三廠)，NR-B17CC型超低溫冰箱(日本松下)，ISO9001電子天秤(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，DY89-Ⅱ電動玻璃勻漿機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)，DK-2000-ⅢL型電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)。

2 研究方法

2.1 動物分組

對實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)4天后，進(jìn)行篩選，訓(xùn)練周期為3天，運(yùn)動量為20 min/天，淘汰不適應(yīng)游泳訓(xùn)練的大鼠，將剩余的50只大鼠分為5組(數(shù)字隨機(jī)分組法)：安靜對照組(C組)、運(yùn)動對照組(M組)、運(yùn)動+黑果枸杞低劑量組(LM I組)，運(yùn)動+黑果枸杞中劑量組(LM II組)，運(yùn)動+黑果枸杞高劑量組(LM III組)，每組10只大鼠。各組大鼠自由攝食飲水并每天采用專業(yè)灌胃器進(jìn)行灌胃1次。其中，不同劑量水平干預(yù)組灌胃黑枸杞溶液劑量由低至高分別為0.25 g/kg/天、0.5 g/kg/天、1.5 g/kg/天，相當(dāng)于成人推薦劑量的5，10，30倍。灌胃體積為5 mL/kg，其他組灌胃等量生理鹽水[16]。

2.2 訓(xùn)練及測試方案[13，16]

安靜對照組實(shí)驗(yàn)期間不進(jìn)行任何運(yùn)動，其他各組均采用特制泳池進(jìn)行6周的遞增負(fù)荷游泳訓(xùn)練，泳池規(guī)格為 1.6 m×0.8 m×1.2 m，內(nèi)壁光滑，水深約 0 .6 m，水溫 30～33℃，每周6天。1～3周進(jìn)行中等強(qiáng)度訓(xùn)練，4～6周進(jìn)行負(fù)重高強(qiáng)度訓(xùn)練。具體訓(xùn)練情況見表1。

2.3 指標(biāo)測定

實(shí)驗(yàn)大鼠末次訓(xùn)練后即刻采用2%戊巴比妥鈉進(jìn)行深度麻醉，并由腹主動脈處取全血5 mL。稍后加入檸檬酸鈉溶液以抗凝，37℃水浴30 min后，4℃ 3 000 rpm離心10 min以分離制備血清[16]。取血后，立即剪開胸腔，取出心臟，取左心室前壁心肌組織約0.5 g，制成10%的組織勻漿液。將勻漿液以4 000 rpm離心30 min，取上清液測定。血清ALT、LDH、CK、a-HBDH均采用比色法測定，cTnI采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測定；心肌SOD活性以黃嘌呤氧化酶法進(jìn)行測定；心肌MDA含量以TBA法進(jìn)行測定。血清和心肌總ET、CGRP含量均采用放射免疫法進(jìn)行測定。測試過程中各指標(biāo)的測試均嚴(yán)格按照試劑盒說明書描述進(jìn)行。

表 1 本研究大鼠游泳訓(xùn)練具體方案[13，16]

注：(體重%)為負(fù)重占體重百分比。

2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

3 結(jié)果

3.1 黑果枸杞對大鼠心肌損傷標(biāo)志物含量的影響

血清ALT、LDH水平，運(yùn)動對照組大鼠均較安靜對照組大鼠顯著升高(P<0.01)；LM各組較運(yùn)動對照組均表現(xiàn)為顯著降低(P<0.01)，各組間數(shù)據(jù)呈現(xiàn)隨劑量增加而遞減，但未呈現(xiàn)顯著變化(P>0.05)。血清CK水平，與安靜對照組比較，運(yùn)動對照組顯著升高(P<0.05)；LM各組較運(yùn)動對照組顯著降低(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05，P<0.05，P<0.01)；組間隨劑量增加而遞減，但未呈現(xiàn)顯著性變化(P>0.05)。血清a-HBDH水平、cTnI水平，與安靜對照組比較，運(yùn)動對照組非常顯著性升高(P<0.01)，LM各組較運(yùn)動對照組顯著降低(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05，P<0.05，P<0.01)；LM Ⅱ組(P>0.05)、LM Ⅲ組(P<0.05)低于LM Ⅰ組(表2)。

表 2 黑果枸杞對大鼠心肌損傷標(biāo)志物含量的影響

注：與安靜對照組比較,*表示P<0.05，**表示P<0.01；與運(yùn)動對照組比較，#表示P<0.05，##表示P<0.01；與低劑量組比較，&表示P<0.05 ，&&表示P<0.01，下同。

3.2 運(yùn)動及黑果枸杞對大鼠心肌MDA含量及SOD活性的影響

心肌SOD活性，與安靜對照組比較，運(yùn)動對照組顯著降低(P<0.05)，LM各組與運(yùn)動對照組比較呈顯著升高(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01)，LM Ⅱ組(P<0.05)、LM Ⅲ組(P<0.01)高于LM Ⅰ組。心肌MDA含量，與安靜對照組比較，運(yùn)動對照組大鼠顯著升高(P<0.05)；LM各組較運(yùn)動對照組均顯著降低(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05，P<0.05，P<0.01)，LM Ⅱ組(P<0.05)、LM Ⅲ組(P<0.01)低于LM Ⅰ組(表3)。

3.3 運(yùn)動及黑果枸杞對大鼠血清及心肌ET、CGRP含量的影響

血清ET水平，與安靜對照組比較，運(yùn)動對照組顯著升高(P<0.05)，LM各組較運(yùn)動對照組顯著降低(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05，P<0.05，P<0.01)。LM各組間隨劑量增加而遞減,LM Ⅲ組(P<0.05)低于LM Ⅰ組。心肌ET水平，與安靜對照組比較，運(yùn)動對照組顯著升高(P<0.05)，LM各組較運(yùn)動對照組顯著降低(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05，P<0.01，P<0.01)，組間隨劑量增加而遞減，LM Ⅲ組(P<0.05)低于LM Ⅰ組。血清、心肌CGRP水平，與安靜對照組比較，運(yùn)動對照組顯著降低(P<0.05)，LM各組較運(yùn)動對照組呈顯著性升高(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05，P<0.05，P<0.01)；組間隨劑量增加而遞增，LM Ⅲ組(P<0.05)高于LM Ⅰ(表4)。

表 3 黑果枸杞對大鼠心肌MDA含量及SOD活性的影響

黑果枸杞溶液劑量(g/kg)SOD(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)C組—161．37±9．21 1．32±0．11 M組—123．67±5．36?1．91±0．14??LMⅠ組0．25151．67±9．42#1．41±0．13#LMⅡ組0．50175．65±10．14#&1．51±0．17#&LMⅢ組1．50199．14±11．56##&&1．71±0．25##&&

表 4 運(yùn)動及黑果枸杞對大鼠血清及心肌ET、CGRP水平的影響

4 討論

適量的運(yùn)動負(fù)荷可促進(jìn)心臟結(jié)構(gòu)可調(diào)節(jié)性、生理性重塑，有利于改善心臟功能。但急性力竭和高強(qiáng)度體能運(yùn)動會對機(jī)體產(chǎn)生不利影響，甚至造成運(yùn)動性心肌微損傷。其主要機(jī)制為：缺血缺氧反應(yīng)，神經(jīng)體液調(diào)節(jié)的改變，能量代謝障礙，心肌細(xì)胞凋亡，心肌局部炎癥反應(yīng)。研究表明[6，7，10，12，22，23，26]，運(yùn)動中心肌主要依靠冠脈血管的擴(kuò)張以增加其血流量滿足心肌對氧的需求。在劇烈運(yùn)動時(shí)，冠脈血流量可達(dá)安靜時(shí)的4倍。當(dāng)冠脈血流量因冠狀血管結(jié)構(gòu)或功能等因素導(dǎo)致無法滿足心肌對氧的需求時(shí)，極易出現(xiàn)缺氧癥狀。

有研究表明[17，19]，ALT、LDH、CK、a-HBDH、cTnI可以作為敏感指標(biāo)檢測運(yùn)動性心肌損傷的發(fā)生與發(fā)展。其中，cTnI作為一種存在于心肌中由鈣介導(dǎo)的調(diào)節(jié)肌動蛋白和肌球蛋白間動態(tài)平衡的特異性蛋白，因其不會受到骨骼肌等其他器官病變的影響而改變，為臨床醫(yī)學(xué)界廣泛認(rèn)同，稱其為診斷心肌損傷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。

運(yùn)動過程中機(jī)體內(nèi)蓄積的過量自由基可致機(jī)體發(fā)生運(yùn)動性心肌損傷，其損傷程度與自由基代謝程度及脂質(zhì)過氧化水平密切相關(guān)[8，18]?？寡趸甘菣C(jī)體內(nèi)清除自由基的主要物質(zhì)。SOD對底物具有高度的專一性，且可以與GSH-Px協(xié)同作用，催化GSH對過氧化氫的還原反應(yīng)，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整。因MDA是細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的主產(chǎn)物，常被作為敏感指標(biāo)衡量機(jī)體自由基代謝水平。ET是一種具有多生物學(xué)效應(yīng)的血管活性肽，在體內(nèi)廣泛分布，是目前已知的體內(nèi)縮血管作用最強(qiáng)、作用時(shí)間持續(xù)最久的內(nèi)源性血管收縮因子，可以通過與內(nèi)皮素受體結(jié)合發(fā)揮收縮血管的作用。在生理濃度下有助于穩(wěn)定心血管功能，在全身血管和局部血流調(diào)控中起到重要作用。CGRP作為人體最強(qiáng)的舒張血管的物質(zhì)，可以有效地舒張冠狀血管，消除冠狀血管阻力，增加冠狀動脈血流量，調(diào)節(jié)心臟局部的血流量。CGRP與ET在對血壓、血循環(huán)調(diào)節(jié)作用中扮演著截然相反的角色。二者對血管有強(qiáng)烈持久的相互拮抗效應(yīng)[3]。正常生理狀態(tài)下，兩類物質(zhì)的分泌處于一種動態(tài)的平衡中，內(nèi)皮素的過度釋放會抑制降鈣素基因相關(guān)肽的分泌，而二者分泌的失衡將導(dǎo)致疾病的發(fā)生。

本實(shí)驗(yàn)中，運(yùn)動對照組較安靜對照組：血清ALT(P<0.01)、LDH(P<0.01)、CK(P<0.05)、a-HBDH(P<0.01)、cTnI(P<0.01)含量顯著升高；心肌MDA含量顯著升高(P<0.01)；心肌SOD活性顯著降低(P<0.01)；血清、心肌ET含量顯著升高(P<0.05)；血清、心肌CGRP含量顯著下降(P<0.05)。這說明，連續(xù)6周的遞增負(fù)荷的游泳訓(xùn)練由于持續(xù)周期長，強(qiáng)度大，恢復(fù)時(shí)間短等因素導(dǎo)致大鼠過度訓(xùn)練，繼而引發(fā)大鼠出現(xiàn)運(yùn)動性心肌損傷。

其原因可能為：1)長時(shí)間的過度訓(xùn)練導(dǎo)致心臟冠狀動脈持續(xù)收縮，誘發(fā)心肌缺血缺氧，導(dǎo)致有效循環(huán)量不斷降低，心肌線粒體膜脂雙層發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，機(jī)體內(nèi)源性自由基大量增加。自由基及其他器官的代謝產(chǎn)物進(jìn)入血液使得抗氧化酶(SOD、GSH-Px)產(chǎn)生受阻并被更多地用于清除自由基進(jìn)而活性降低，從而引發(fā)心肌組織生物膜功能異常，造成細(xì)胞損害。2)有研究表明，長時(shí)間過度訓(xùn)練導(dǎo)致的自由基增加可以通過低密度脂蛋白膽固醇(LDL)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL)的氧化修飾作用引發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞(EC)的形態(tài)改變和功能異常[24]。EC形態(tài)的改變和功能異常導(dǎo)致了內(nèi)皮細(xì)胞過度分泌，進(jìn)而引發(fā)了血漿和心肌組織中ET水平升高。同時(shí)有研究表明，長時(shí)間劇烈運(yùn)動時(shí)心肌缺血、缺氧和損傷，也可導(dǎo)致血漿和心肌組織中ET水平升高[8]。而對ET拮抗作用較強(qiáng)的CGRP由于ET的升高而被不斷消耗，二者間作用與反作用的平衡被打破，進(jìn)而引發(fā)心血管過度收縮，心臟供血量急劇下降，心肌缺血缺氧損傷進(jìn)一步加劇。這一狀況也進(jìn)一步抑制了心肌中CGRP分泌，進(jìn)而導(dǎo)致血漿和心肌組織中CGRP水平降低。

本研究中，LM各組與運(yùn)動對照組比較：血清ALT(均為P<0.01)、LDH(均為P<0.01)、CK(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01)、a-HBDH(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01)、cTnI組(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01)水平呈顯著性降低；心肌MDA均顯著降低(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01)；心肌SOD均顯著升高(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01)；血清ET(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01)及心肌ET(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.01、P<0.01)含量均顯著降低；血清及心肌CGRP均顯著升高(LM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為P<0.05、P<0.05、P<0.01)。這說明，補(bǔ)充黑果枸杞可以在提高機(jī)體內(nèi)SOD及GSH-px活性的同時(shí)，減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)地發(fā)生及自由基地生成，進(jìn)而維持SOD的動態(tài)平衡，對清除機(jī)體中過量的自由基，減輕自由基對線粒體膜和肌漿網(wǎng)膜的損傷，減輕對酶蛋白的氧化損傷起到積極作用。同時(shí)，補(bǔ)充黑果枸杞可以通過有效的提高血漿和心肌組織中CGRP水平，在適當(dāng)范圍內(nèi)擴(kuò)張血管，改善心肌供血，增加心肌供氧，增強(qiáng)心肌收縮力，提高心排血量，有效地抑制了血漿及心肌組織中ET的升高，保證ET和CGRP濃度的相對平衡，從而有效地阻止心肌的脂質(zhì)過氧化和運(yùn)動性損傷。

其可能的機(jī)制為：1)黑果枸杞中原花青素、多糖、總黃酮等活性成分可通過提高SOD等抗氧化酶的活性，減輕力竭運(yùn)動過程中產(chǎn)生的大量自由基對心肌組織造成的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)[1，4，9，11，25，28，29]。2)補(bǔ)充黑果枸杞可以通過提高機(jī)體清除氧自由基能力在一定程度上有效地抑制ET的過度分泌[5]。3)鈣/鈣調(diào)蛋白依賴的原生型一氧化氮合酶和鈣/鈣調(diào)蛋白非依賴的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶廣泛存在于內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞中。正常生理情況下內(nèi)皮細(xì)胞可通過原生型一氧化氮合酶持續(xù)合成少量一氧化氮。這部分一氧化氮合酶可以進(jìn)入血管平滑肌細(xì)胞，通過環(huán)磷酸鳥苷途徑松弛血管；進(jìn)入血流抵抗血小板、白細(xì)胞的活化粘附聚集；通過直接抑制中性粒細(xì)胞的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶以減少其超氧自由基地產(chǎn)生[21]。但當(dāng)心肌細(xì)胞發(fā)生缺血缺氧時(shí)，冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞基礎(chǔ)性及乙酰膽堿刺激的一氧化氮釋放功能嚴(yán)重受損，無法發(fā)揮相關(guān)作用，進(jìn)而導(dǎo)致ET、CGRP二者間的動態(tài)平衡發(fā)生改變。黑果枸杞由于其含有免疫活性果膠LRGP5(Lycium ruthenicumglycoconjugate polysaccharide 5，LRGP5)可有效的通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞增殖，增強(qiáng)一氧化氮分泌，進(jìn)而增強(qiáng)或促進(jìn)體液免疫及細(xì)胞免疫功能，阻止炎性細(xì)胞因子生成增多及內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子的表達(dá)[1,15,21]，預(yù)防和緩解過度訓(xùn)練造成的運(yùn)動性心肌損傷。

本實(shí)驗(yàn)中分別以劑量為0.25 g/kg/天、0.5 g/kg/天、1.5 g/kg/天的黑果枸杞(相當(dāng)于成人推薦劑量的5、10、30倍)對大鼠進(jìn)行營養(yǎng)干預(yù)。不同劑量黑果枸杞組間，血清ALT、LDH、CK水平，隨劑量增加而遞減，但未呈現(xiàn)顯著變化(P>0.05)；血清a-HBDH、cTnI水平，隨劑量增加而遞減，LM Ⅲ組(P<0.05)低于LM Ⅰ組；心肌SOD活性，隨劑量增加而升高，LM Ⅱ組(P<0.05)、LM Ⅲ組(P<0.01)高于LM Ⅰ組；心肌MDA含量，隨劑量增加而遞減，LM Ⅱ組(P<0.05)、LM Ⅲ組(P<0.01)低于LM Ⅰ組。血清及心肌ET、CGRP含量與LM各劑量組的干預(yù)效果呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。其中，血清、心肌ET水平，隨劑量增加而遞減，LM Ⅲ組(P<0.05)低于LM Ⅰ組；血清、心肌CGRP水平，隨劑量增加而遞增，LM Ⅲ組(P<0.05)高于LM Ⅰ組。進(jìn)一步說明，黑果枸杞可以有效的提高血漿中CGRP水平，在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)擴(kuò)張血管及心肌組織CGRP水平，改善心肌供血，增加心肌供氧，增強(qiáng)心肌收縮力，提高心排血量，有效地抑制了血漿及心肌組織中ET的升高，保證ET和CGRP濃度的相對平衡，從而有效地阻止心肌的脂質(zhì)過氧化和運(yùn)動性損傷。LM各劑量組均具有治療效果，其中以LM Ⅲ組效果為最好。

5 結(jié)論

補(bǔ)充黑果枸杞對抗運(yùn)動性心肌缺血具有多靶點(diǎn)、多途徑的顯著特點(diǎn)。不同劑量的黑果枸杞補(bǔ)充可以有效地保持抗氧化酶活性，清除機(jī)體自由基；抑制內(nèi)皮素的分泌，促進(jìn)降鈣素基因相關(guān)肽的分泌，保證二者濃度的相對平衡，從而阻止因長時(shí)間、大強(qiáng)度運(yùn)動導(dǎo)致的心肌脂質(zhì)過氧和心肌損傷。其中，以高劑量組(LM Ⅲ組)效果為最好。

[1]陳晨,趙曉輝,文懷秀,等.黑果枸杞的抗氧化成分分析及抗氧化能力測定[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011,31(15):1305-1306.

[2]常蕓,楊紅霞,王菲.力竭運(yùn)動對大鼠心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)ICAM-1的影響[J].中國運(yùn)動醫(yī)學(xué)雜志,2015,34(4):334-340.

[3]李建平.一次性急性力竭運(yùn)動后大鼠血漿內(nèi)皮素、腎上腺髓質(zhì)素、降鈣素基因相關(guān)肽含量的變化[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2007,11(17):3347-3350.

[4]李淑珍.黑果枸杞總黃酮制備工藝優(yōu)化和抗氧化、降血脂活性及成分研究[D].烏魯木齊:新疆師范大學(xué),2009.

[5]劉維佳,崔坤敏,夏立營,等.鹽藻素抗氧化及對血清內(nèi)皮素和腫瘤壞死因子的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生,2011,49(13):3-4,6.

[6]廖興林,常蕓.運(yùn)動性心肌微損傷發(fā)生中炎癥反應(yīng)基因表達(dá)譜的研究[J].中國運(yùn)動醫(yī)學(xué)雜志,2010,29(1):34-37.

[7]劉揚(yáng),吳志峰.運(yùn)動性心肌微損傷的研究現(xiàn)狀[J].東南國防醫(yī)藥,2014,16(4):401-403.

[8]唐量,熊正英.葛根總黃酮保護(hù)小鼠運(yùn)動性心肌損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J].體育科學(xué),2005,25(3):62-64.

[9]王軍,陶大勇,王選東,等.黑果枸杞色素對三黃雞抗氧化酶的影響[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志,2009,28(1):29-31.

[10]王東輝,熊若虹,鄭兵,等.大鼠力竭游泳運(yùn)動后不同時(shí)相心肌和血清SOD、GSH-Px、MDA和Ca2+的變換[J].沈陽體育學(xué)院學(xué)報(bào),2004,23(3):332.

[11]汪建紅,陳曉琴,張蔚佼.黑果枸杞果實(shí)多糖抗疲勞生物功效及其機(jī)制研究[J].食品科技,2009,34(2):203-207.

[12]楊潔,鄭嘉毅,周冬冬,等.小鼠與大鼠急性力竭運(yùn)動方法的建立及其對心肌超微結(jié)構(gòu)的影響[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2011,31(10):1366-1369.

[13]衣雪潔,張慶榮,于瀅.健脾補(bǔ)糖對過度訓(xùn)練脾虛大鼠骨骼肌GLUT4和P38活性的影響[J]北京體育大學(xué)學(xué)報(bào),2007,30(9):1212-1215.

[14]余冬敏.力竭游泳應(yīng)激致大鼠心肌損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D].廣州：南方醫(yī)科大學(xué),2014.

[15]張鈞,許豪文,楊小英.運(yùn)動對心肌細(xì)胞凋亡的影響[J].體育科學(xué),2002,22(5):92-95.

[16]張珂,曹建民,郭嫻,等.黑果枸杞對大鼠運(yùn)動性腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].首都體育學(xué)院學(xué)報(bào),2015,27(1):85-89.

[17]鄭求烈.補(bǔ)充復(fù)合中藥對運(yùn)動大鼠心肌損傷標(biāo)志物及CGRP含量的影響[D].北京：北京體育大學(xué),2013.

[18]周海濤,曹建民,林強(qiáng).紅景天對大鼠力竭游泳能力和心肌線粒體的抗氧化能力的影響[J].沈陽體育學(xué)院學(xué)報(bào),2010,29(5):55-60.

[19]ARKRE K M,R?RAAS T,PETERSEN P H,etal.Weekly and 90-minute biological variations in cardiac troponin T and cardiac troponin I in hemodialysis patients and healthy controls[J].Clin Chem,2014,60(6):838-847.

[20]ATKINSON G,NEVILL A M.Is exercise induced myocardial injury self-abating?[J].Med Sci Sports Exe,2001,33(5):850-851.

[21]FERDINANDY P,CSONKA C,CSONT T,etal.Rapid pacing-induced preconditioning is recaptured by farnesol treatment in hearts of cholesterol fed rats:role of polyrenyl derivatives and nitric oxide[J].Mol Cell Biochem,1998,186(1):27-34.

[22]HUANG C C,LIN T J,CHEN C C.Endurance training accelerates exhaustive exercise-induced mitochondrial DNA deletion and apoptosis of left ventricle myocardium in rats[J].Eur J Appl Physiol,2009,107(6):697-706.

[23]KADAJA L,EIMRE M,PAJU K,etal.Impaired oxidative phosphorylation in overtrained rat myocardium[J].Exp Clin Cardiol,2010,15(4):e116-e127.

[24]LEVINE D M,PARKER T S,DONNELLY T M,etal.In vivo protection against endotoxin by high density lipoprotein[J].Proc Natl Acad Sci USA,1993,90(24):12040-12044.

[25]LIU Z,DANG J,WANG Q,etal.Optimization of polysaccharides from Lycium ruthenicum fruit using RSM and its anti-oxidant activity[J].Int J Biol Macromol,2013,61(10):127-134.

[26]PAN S S.Alterations of atrial natriuretic peptide in cardiomyocytes and plasma of rats after different intensity exercise[J].Scand J Med Sci Sports,2008,18(3):346-353.

[27]PENG Q,LV X P,XU Q S,etal.Isolation and structural characterization of the polysaccharide LRGP1 from lyci-um ruthenicum [J].Carbohyd Polym,2012,90(1):95-101.

[28]PENG Q,XU Q,YIN H,etal.Characterization of an immunologically active pectin from the fruits of Lycium ruthenicum[J].Int J Biol Macromol,2014,64(2):69-75.

[29]ZHENG J,DING C X,WANG L S,etal.Anthocyanins composition and antioxidant activity of wild Lycium ruthenicum Murr.from Qinghai-Tibet Plateau[J].Food Chem，2011,126(3),859-865.

The Protective Effects of Lycium Ruthenicum Murr on the Exercise-induced Myocardial Injury in Rat

CUI Ji-fang1,CAO Jian-min2,ZHOU Hai-tao3,GUO Xian2

Objective:To study the protective effects of Lycium Ruthenicum Murr.after the long time and intensive exercise induced myocardial injury in rats.Methods:The model was based on intensive endurance training,55 male Wistar rats at the age of 42-days old were divided into 5 groups randomly in test:control group (C group),general training group (M group),low dose Lycium Ruthenicum Murr.+ training group (LM I group),middle dose Lycium Ruthenicum Murr.+ training group (LM II group),high dose Lycium Ruthenicum Murr.+ training group (LM III group)(the rats that did not meet the requirements were removed).Every group include 10 rats,and the rats were assigned to go on 42 days of swimming training.Professional gavage were taken daily.The Rats in LM I,LM II and LM III group were given with 0.25,0.5 and 1.5 g/kg Lycium Ruthenicum Murr.gavage at 5 mL/kg and other groups were given the normal saline.After 42 days of swimming training,we detected the content of myocardial injury markers like serum ALT,SOD and MDA,we also detected the biochemical indexes like serum and myocardial ET and CGRP.Results:The content of serum ALT,LDH,CK ,a-HBDH and cTnI in M group were higher than C group (ALT,P<0.01,LDH,P<0.01,CK,P<0.05,a-HBDH,P<0.01,cTnI,P<0.01 ).In the mean time,ALT and LDH in all LM group were lower than M group (P<0.01),and CK in all LM group were lower than M group (LM I,P<0.05,LM II ,P<0.05,LM III,P<0.01),there were no differences between groups.The content of a-HBDH and cTnI in all LM group were lower than M group (LM I,P<0.05,LM II ,P<0.05,LM III,P<0.01),and they were decreasing with the increase of Lycium Ruthenicum Murr.Dose between groups (LM III was lower than LM I,P<0.05).The content of myocardial SOD(P<0.01),both myocardial and serum CGRP(P<0.05) in M group were lower than C group ,the content of myocardial MDA,myocardial and serum ET were higher than C group(P<0.05).The content of myocardial SOD,both myocardial and serum CGRP in all LM group were higher than M group (LM I,P<0.05,LM II ,P<0.05,LM III,P<0.01).The content of myocardial MDA,myocardial and serum ET were much lower than M group (MDA,serum ET:LM I,P<0.05,LM II ,P<0.05,LM III,P<0.01;myocardial ET:LM I,P<0.05,LM II ,P<0.01,LM III,P<0.01).In the mean time,Myocardial SOD in LM II group,LM III group was much lower than LM I group (LM II ,P<0.05,LM III,P<0.01).Both myocardial and serum CGRP in LM III group was much lower than LM I group (P<0.05).With the increase of Lycium Ruthenicum Murr.dose,the increase of myocardial SOD,myocardial and serum CGRP.Myocardial MDA in LM II group,LM III group was much higher than LM I group (LM II,P<0.05,LM III,P<0.01).Myocardial and serum ET in LM III group was much lower than LM I group (P<0.05).With the increase of Lycium Ruthenicum Murr.dose,the decrease of myocardial MDA and both myocardial and serum ET.Conclusion:The supplement of Lycium ruthenicum Murr.can protect exercise-induced myocardial injury in multiple targets and multiple ways.The different dose supplement will effectively keep the activity of antioxidant enzymes and scavenging the free radicals.In the mean time,it will inhibit the secretion of endothelin and promote the secretion of calcitonin gene related peptide,then ensure that the concentration of balance.At last,it will prevent the myocardial injury caused by long time and intensive training.The best dose-effect caused by Lycium ruthenicum Murr.was in high dose Lycium ruthenicum Murr.group.

LyciumRuthenicumMurr.;myocardialinjurymarkers;antioxidantenzymes;ET;CGRP;exercise-inducedmyocardialinjury

1002-9826(2016)05-0046-06

10.16470/j.csst.201605007

2015-05-11；

2016-06-03

北京市朝陽區(qū)協(xié)同創(chuàng)新項(xiàng)目(CYXC1508)；國家體育總局科研課題(2013A101)。

崔紀(jì)芳(1970-)，女，山東青島人，講師，主要研究方向?yàn)轶w育教育與健康，E-mail：xzcjf1970@163.com。

1.江蘇師范大學(xué)，江蘇 徐州 221116;2.北京體育大學(xué) 運(yùn)動人體科學(xué)學(xué)院，北京 100084;3北京聯(lián)合大學(xué) 生物化學(xué)工程學(xué)院，北京 100023 1.Jiangsu Normal University,Xuzhou 221116,China;2.Beijing Sport University,Beijing 100084,China;3.Beijing Union University,Beijing 100023,China.

G804.7

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