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    超聲波-微波協(xié)同提取西瓜皮多糖及體外抗氧化活性研究

    2022-03-24 08:48:34王秀杰
    現(xiàn)代食品 2022年4期
    關(guān)鍵詞:西瓜皮提取物微波

    ◎ 王秀杰,相 艷,金 杰

    (江蘇省徐州醫(yī)藥高等職業(yè)學(xué)校 制藥工程系,江蘇 徐州 221116)

    西瓜皮富含多種氨基酸和糖類,以及一些豐富的礦物質(zhì)和維生素C等[1-2],營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,具有保健作用[3-4]。大量研究表明,植物多糖除有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤[5]生物學(xué)效應(yīng)外,還有抗衰老[6]、降血糖、抗凝血[7]等作用,且對(duì)機(jī)體毒副作用小。目前西瓜皮多糖提取一般采用溶劑浸提法[8],酸、堿提取法[9],酶提取法[10],超濾法[11],微波提取法[12]和超聲波提取法[13]。本研究采用超聲波-微波協(xié)同法提取西瓜皮多糖,用單因素和正交試驗(yàn)法確定西瓜皮多糖提取的最佳工藝,并進(jìn)行了質(zhì)量評(píng)價(jià)和抗氧化能力測(cè)定,為提高西瓜皮的綜合利用價(jià)值,進(jìn)一步加強(qiáng)農(nóng)副產(chǎn)品資源高效利用奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與試劑

    JA50038電子分析天平:上海精科天美科學(xué)有限公司;UV-2000紫外可見分光光度計(jì):尤尼柯上海儀器有限公司;CW-2000型超聲波微波協(xié)同萃取裝置:新拓分析儀科技有限公司;HX-10N-50B試驗(yàn)型冷凍干燥機(jī):上海滬析實(shí)業(yè)有限公司。

    T-AOC測(cè)定試劑盒,購于南京建成生物試劑公司。其他試劑均為分析純?cè)噭?/p>

    1.2 材料

    京欣西瓜,購于徐州市大潤(rùn)發(fā)超市。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 工藝流程

    西瓜皮多糖工藝提取流程為西瓜皮→清洗干燥→粉碎過篩→加入提取溶液→(超聲波-微波輔助浸提)→離心分離→過濾→醇沉→脫除蛋白→二次醇沉→真空干燥→粗多糖。

    1.3.2 試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)

    (1)西瓜皮多糖提取方法設(shè)計(jì)。西瓜皮粉碎過100目篩,準(zhǔn)確稱取1 g于錐形瓶中,加入40 mL蒸餾水,用超聲波-微波協(xié)同反應(yīng)器進(jìn)行提取,設(shè)置超聲功率200 W,提取溫度70 ℃,提取時(shí)間300 s進(jìn)行試驗(yàn)。離心后取上清液并稀釋后,測(cè)定吸光度。①單因素試驗(yàn)。分別考察西瓜皮粉的料液比為1∶20 (g∶mL)、1∶30 (g∶mL)、1∶40 (g∶mL)、1∶50 (g∶mL)和1∶60 (g∶mL);超聲功率為100 W、150 W、200 W、250 W和300 W;提取溫度為50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃和90 ℃;提取時(shí)間為100 s、200 s、300 s、400 s和500 s對(duì)西瓜皮多糖提取效果的影響。②正交試驗(yàn)。在選定單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,考慮到因素之間的交互影響,設(shè)計(jì)4因素3水平正交試驗(yàn),對(duì)西瓜皮多糖提取工藝進(jìn)行研究。

    (2)西瓜皮多糖得率測(cè)定。采用蒽酮硫酸法對(duì)提取的多糖進(jìn)行測(cè)定[14],分別取0 mL、0.30 mL、0.60 mL、0.90 mL和1.20 mL,濃度為0.1 mg·mL-1的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,補(bǔ)加蒸餾水至1.20 mL,分別加入蒽酮-硫酸溶液6.80 mL,混勻后,沸水浴加熱10 min,立即在冷流水下進(jìn)行冷卻,并在紫外可見分光光度計(jì)波長(zhǎng)620 nm下測(cè)定吸光度。多糖得率測(cè)定為:

    式中:X為西瓜皮多糖得率,%;Cx為樣品多糖測(cè)定濃度,μg·mL-1;V為樣品定容測(cè)定體積,mL;F為樣品測(cè)定稀釋倍數(shù);m為樣品質(zhì)量,g。

    (3)西瓜皮多糖提取物的質(zhì)量評(píng)價(jià)。按照西瓜皮多糖最佳提取工藝得到的提取液進(jìn)行離心得到上清液后,分別進(jìn)行兩次Sevege法除蛋白和兩次醇沉后,進(jìn)行真空冷凍干燥得到西瓜皮多糖成品,參照《枸杞多糖》產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)[15]進(jìn)行西瓜皮多糖提取物的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

    (4)西瓜皮多糖提取物總抗氧化能力測(cè)定。選用常用的食品抗氧化劑維生素C和BHA,在相同條件下選用總抗氧化能力(T-AOC)測(cè)定試劑盒同本試驗(yàn)得到的西瓜皮多糖粉進(jìn)行總抗氧化能力比較測(cè)定??偪寡趸芰τ?jì)算公式為:

    2 結(jié)果與分析

    2.1 蒽酮-硫酸法測(cè)定多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

    根據(jù)1.3.2(1)方法,采用蒽酮硫酸法進(jìn)行西瓜皮多糖得率測(cè)定,其標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制,如圖1所示。由圖1可知,蒽酮-硫酸法測(cè)定多糖的線性擬合方程為:y=0.044 5x+0.002 4,相關(guān)系數(shù)r達(dá)到了0.999 9,科學(xué)研究中標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)r通常要求不低于0.999即可。因此,本試驗(yàn)多糖測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線能完全滿足多糖檢驗(yàn)要求。

    圖1 蒽酮硫酸法測(cè)定多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

    2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果

    2.2.1 料液比對(duì)西瓜皮多糖提取率的影響

    按照1.3.2(1)試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)進(jìn)行料液比單因素試驗(yàn),考察料液比對(duì)西瓜皮多糖提取效果的影響,結(jié)果如圖2所示。由圖2可知,隨著料液比的增加,西瓜皮多糖得率呈現(xiàn)先降低后增加再降低現(xiàn)象,在料液比為1∶50 (g∶mL)時(shí),西瓜皮多糖得率達(dá)到了最大值。料液比增加,多糖的溶出量隨之增加,西瓜皮多糖得率升高;當(dāng)料液比繼續(xù)增大,多糖溶出可能達(dá)到飽和,但加入的物料質(zhì)量在增加,導(dǎo)致得率降低[16]。所以本試驗(yàn)選擇料液比1∶50 (g∶mL)為最佳。

    圖2 不同料液比對(duì)西瓜皮多糖得率的影響圖

    2.2.2 超聲功率對(duì)西瓜皮多糖得率的影響

    按照1.3.2(1)試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)進(jìn)行超聲功率單因素試驗(yàn),考察超聲功率對(duì)西瓜皮多糖得率效果的影響,結(jié)果如圖3所示。

    圖3 不同超聲功率對(duì)西瓜皮多糖得率的影響圖

    由圖3可知,隨著超聲功率的增加,西瓜皮多糖得率不斷增大,當(dāng)超聲功率為250 W時(shí),西瓜皮多糖得率達(dá)到最大值,隨著超聲功率的繼續(xù)增加,西瓜皮多糖得率開始下降,這可能是由于超聲功率過高會(huì)導(dǎo)致空化泡在聲波的壓縮相內(nèi)來不及發(fā)生破裂,使得細(xì)胞壁破壞不完全,從而不利于提取,導(dǎo)致西瓜皮多糖得率減少,所以選定微波功率250 W為最佳[17]。

    2.2.3 提取時(shí)間對(duì)西瓜皮多糖得率的影響

    按照1.3.2(1)試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)進(jìn)行提取時(shí)間單因素試驗(yàn),考察提取時(shí)間對(duì)西瓜皮多糖得率的影響,結(jié)果見圖4。

    圖4 不同提取時(shí)間對(duì)西瓜皮多糖得率的影響圖

    由圖4可知,隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng),西瓜皮多糖得率不斷增加,當(dāng)提取時(shí)間為300 s時(shí),西瓜皮多糖得率達(dá)到最大值,隨著提取時(shí)間的進(jìn)一步延長(zhǎng),多糖得率逐漸降低,可能是由于超聲波具有較強(qiáng)的機(jī)械剪切作用,使大分子多糖的糖苷鍵斷裂,從而導(dǎo)致多糖含量下降,所以選定提取時(shí)間300 s為最佳[18]。

    2.2.4 提取溫度對(duì)西瓜皮多糖得率的影響

    按照1.3.2(1)試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)進(jìn)行提取溫度單因素試驗(yàn),考察提取溫度對(duì)西瓜皮多糖得率的影響,結(jié)果見圖5。

    圖5 不同溫度對(duì)西瓜皮多糖得率的影響圖

    由圖5可知,隨提取溫度的增加,西瓜皮多糖得率出現(xiàn)先增加后減小現(xiàn)象,當(dāng)提取溫度為80 ℃時(shí),西瓜皮多糖得率達(dá)到最大值,這是由于提取溫度過高可能使多糖結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,導(dǎo)致已溶出多糖的降解,從而使西瓜皮多糖得率降低,所以選定提取溫度80 ℃為最佳[19]。

    2.3 西瓜皮多糖提取正交試驗(yàn)

    根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,以料液比、溫度、功率和時(shí)間為影響因素,以西瓜皮多糖得率為考察指標(biāo),進(jìn)行4因素3水平正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),并對(duì)西瓜皮多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。正交試驗(yàn)結(jié)果見表1。

    表1 西瓜皮多糖提取正交試驗(yàn)表

    由表1可知,在超聲波微波協(xié)同法提取西瓜皮多糖的正交試驗(yàn)中第4組A2B1C2D3的西瓜皮多糖得率最高,達(dá)到了13.0%;根據(jù)k值分析,對(duì)西瓜皮多糖得率影響因素的大小順序?yàn)镈>C>B>A。根據(jù)k值可知,西瓜皮多糖提取的最優(yōu)組合為A2B2C2D3,核對(duì)正交試驗(yàn)表1中沒有符合的試驗(yàn)號(hào),因此有必要與4號(hào)試驗(yàn)組得率最高的A2B1C2D3組合進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn),結(jié)果見表2。由表2可知,A2B2C2D3比A2B1C2D3的得率高,最終選定西瓜皮多糖提取得最佳組合為A2B2C2D3,即料液比1∶50(g∶mL),提取溫度80 ℃,超聲功率250 W,提取時(shí)間400 s。

    表2 驗(yàn)證試驗(yàn)表

    2.4 西瓜皮多糖提取物質(zhì)量評(píng)價(jià)

    將得到的西瓜皮多糖成品與《枸杞多糖》(QB/T 5176—2017)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行主要指標(biāo)比較,并進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià),結(jié)果見表3。

    表3 西瓜皮多糖提取物的質(zhì)量評(píng)價(jià)表

    2.5 西瓜皮多糖提取物總抗氧化能力測(cè)定

    將食品抗氧化劑維生素C和BHA同得到的西瓜皮多糖提取物進(jìn)行總抗氧化能力比較。試驗(yàn)中均準(zhǔn)確稱量0.030 g維生素C、BHA和西瓜皮多糖提取物,溶解并稀釋后,采用總抗氧化能力試劑盒進(jìn)行測(cè)定,平行測(cè)定3次,取其平均值,結(jié)果見圖6。

    圖6 不同物質(zhì)總抗氧化能力的比較圖

    如圖6所示,3種物質(zhì)中本試驗(yàn)提取的西瓜皮多糖的總抗氧化能力最高,其抗氧化能力比常見的抗氧化劑BHA和維生素C的抗氧化能力分別高出23%和131%。

    3 結(jié)論與討論

    3.1 結(jié)論

    (1)通過正交試驗(yàn)和單因素確定了提取西瓜皮多糖的最佳工藝條件西瓜皮粉碎度為100目,料液比為1∶50 (g∶mL),功率250 W,溫度80 ℃,時(shí)間400 s,溶劑pH=7時(shí),多糖提取得率最好。

    (2)在最佳條件下得到的西瓜皮多糖的成品為顏色一致的黃褐色粉末狀,無異味,多糖含量達(dá)到62%,并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià),符合《枸杞多糖》(QB/T 5176—2017)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求。

    (3)本試驗(yàn)得到的西瓜皮多糖提取物有較強(qiáng)的抗氧化活性,其抗氧化能力比常見的抗氧化劑BHA和維生素C的抗氧化能力分別高23%和131%。

    3.2 討論

    微波提取技術(shù)是指使用適合的溶劑在微波反應(yīng)器中從天然藥用植物、礦物、動(dòng)物組織中提取各種化學(xué)成分的技術(shù)和方法,該技術(shù)與現(xiàn)有其他提取技術(shù)相比優(yōu)勢(shì)明顯,可有效提取物料中的有用成分,對(duì)提取物具有高選擇性,并具有提取快、產(chǎn)率高、省時(shí)、耗能低、溶劑用量少、生產(chǎn)線組成簡(jiǎn)單、節(jié)省投資和無污染等優(yōu)點(diǎn)。本研究以超聲微波輔助提取得到的西瓜皮多糖得率較高,并且西瓜皮多糖具有強(qiáng)體外抗氧化活性,本試驗(yàn)優(yōu)化的西瓜皮多糖提取工藝合理可行,可為西瓜皮多糖的研究與開發(fā)提供一定的理論依據(jù)。本研究后期會(huì)繼續(xù)對(duì)提取得到的西瓜皮多糖進(jìn)行進(jìn)一步純化,進(jìn)行多糖種類和性質(zhì)的深入研究,以盡快實(shí)現(xiàn)對(duì)西瓜皮多糖的工業(yè)化應(yīng)用。

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