清咽利肺散劑的止咳、化痰、抗炎和止痛作用研究Δ

張 麗，張一云，符 洪，王開裕，雷玲芳，王春桃#（.海南省中醫(yī)院藥學(xué)部，?？?57003；.海南省藥物研究所，?？?5706）

清咽利肺散劑的止咳、化痰、抗炎和止痛作用研究Δ

張 麗1＊，張一云2，符 洪2，王開裕1，雷玲芳1，王春桃2#（1.海南省中醫(yī)院藥學(xué)部，海口 570203；2.海南省藥物研究所，海口 570216）

目的：考察清咽利肺散劑的止咳、化痰、抗炎和止痛作用。方法：將小鼠分為模型組、陽性對照組（炎見寧片，0.29 g/kg）和清咽利肺散劑低、中、高劑量組（13.7、27.3、54.6 g/kg），每組10只。模型組小鼠ig等體積生理鹽水，各給藥組小鼠ig相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)7 d。給藥結(jié)束后，分別采用小鼠氨水引咳實驗、氣管酚紅排泌實驗、二甲苯致耳腫脹實驗和醋酸扭體實驗考察清咽利肺散劑的止咳、化痰、抗炎、止痛作用。結(jié)果：與模型組比較，除清咽利肺散劑低劑量組小鼠外，其余各組小鼠的咳嗽次數(shù)均明顯減少，且清咽利肺散劑高劑量組小鼠的咳嗽潛伏期明顯延長（P＜0.05或P＜0.01）；陽性對照組和清咽利肺散劑高劑量組小鼠的酚紅排泌量、20 min內(nèi)扭體次數(shù)明顯減少，耳腫脹度明顯減輕（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論：清咽利肺散劑對小鼠具有良好的止咳、化痰、抗炎、消腫止痛的作用。

清咽利肺散劑；止咳；化痰；消炎；止痛；小鼠

清咽利肺合劑為海南省中醫(yī)院張永杰教授通過長期的臨床實踐后總結(jié)優(yōu)化得出的經(jīng)驗方，由千里光、魚腥草、桑白皮、牛蒡子、杏仁、款冬花等18種中藥材組成，具有潤肺止咳、清火排毒之功效，適用于咳嗽咽癢、咳痰不爽、胸肺壅塞、頭身困重等癥，臨床上多用于風(fēng)熱襲肺咳嗽和痰濕壅肺型咳嗽的治療，作用明顯[1]。但由于該藥劑型為合劑，在保存和攜帶上存在一定的不便。鑒于此，筆者擬將其劑型改為散劑，采用小鼠氨水引咳實驗、氣管酚紅排泌實驗、二甲苯致耳腫脹實驗和醋酸扭體實驗考察清咽利肺散劑的止咳、化痰、抗炎、止痛作用，并以具有清熱消炎、鎮(zhèn)痛[2]、利尿[3]作用，用于治療上呼吸道感染，與本方適應(yīng)病癥相似的炎見寧片為陽性對照，旨在為新藥開發(fā)提供前期研究基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

UV-2401PC紫外分光光度計、AUW220D十萬分之一天平（日本島津公司）；402AI超聲霧化機（江蘇魚躍醫(yī)療設(shè)備股份有限公司）。

1.2 藥品與試劑

清咽利肺散劑（海南省中醫(yī)院自制，批號：150801，規(guī)格：15 g/包）；炎見寧片（廣州梧州制藥股份有限公司，批號：140502，規(guī)格：0.25 g/片）；間二甲苯（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：20130526，化學(xué)純）；氨水（西隴化工股份有限公司，批號：141207，分析純）；冰醋酸（廣東光華科技股份有限公司，批號：20141215，分析純）。

1.3 動物

KM小鼠180只，SPF級，♀♂各半，體質(zhì)量18～22 g，購自海南省實驗動物中心[許可證號：SCXK（瓊）2015-0007]。小鼠飼養(yǎng)于海南省藥物研究所SPF動物房內(nèi)，室溫為（23±1）℃，通風(fēng)良好，飼養(yǎng)期間大鼠自由飲食。

2 方法

2.1 分組與給藥

將小鼠隨機分為模型組、陽性對照組和清咽利肺散劑低、中、高劑量組。模型組小鼠ig等體積生理鹽水，陽性對照組小鼠ig炎見寧片0.29 g/kg（人臨床用量的等效劑量）[2]，清咽利肺散劑低、中、高劑量小鼠ig咽利肺散劑2.93、5.85、11.7 g/kg（分別為人臨床用量的0.5、1、2倍劑量），每天給藥1次，連續(xù)給藥7 d。

2.2 氨水引咳實驗[4-5]

隨機取小鼠80只（♀♂兼有）進(jìn)行預(yù)實驗。分別將小鼠放入500 ml燒杯中，用超聲波霧化器通入13%濃氨水霧化氣，5 s后停止。取出小鼠，從通入濃氨水霧化氣開始計時，3 min內(nèi)不發(fā)生咳嗽的小鼠（對氨水不敏感者）及咳嗽次數(shù)超過50次者（過于敏感）棄之不用[5]。剩余小鼠隨機取50只，休息3 d后按“2.1”項下方法進(jìn)行分組、給藥。于末次給藥30 min后，同法再次進(jìn)行氨水引咳實驗，記錄小鼠從通入氨氣開始至3 min內(nèi)初次咳嗽的時間（即咳嗽潛伏期）及咳嗽次數(shù)。

2.3 氣管酚紅排泌實驗[6-7]

取完成氨水引咳實驗的小鼠，于當(dāng)日ip 0.5%酚紅溶液（0.1 ml/10 g）。30 min后脫頸椎處死小鼠，分離從喉結(jié)至支氣管分叉段氣管條，剝離周圍組織。放入2 ml 5%碳酸氫鈉（NaHCO3）溶液中，剪開氣管段，輕微震搖。放置10 min后，以400×g離心10 min，取上清于546 nm波長處測光密度（OD546）值表示酚紅排泌量，5%NaHCO3溶液為空白對照。

2.4 二甲苯耳腫脹實驗[8]

取50只小鼠（♀♂各半），按“2.1”項下方法進(jìn)行分組、給藥。末次給藥30 min后，用40 μl二甲苯涂抹于小鼠右耳，30 min后脫頸處死小鼠，剪下雙耳，以5 mm打孔器打下相同位置耳片，記錄左右耳片質(zhì)量，計算耳腫脹度[耳腫脹度（%）＝（右耳片質(zhì)量－左耳片質(zhì)量）/左耳片質(zhì)量×100%]和腫脹抑制率[腫脹抑腫率（%）＝（模型組小鼠耳腫脹度－給藥組小鼠耳腫脹度）/模型組小鼠耳腫脹度×100%]。

2.5 醋酸扭體實驗[8]

取50只小鼠（♀♂各半），按照“2.1”項下方法進(jìn)行分組和給藥。末次給藥20 min后，各組小鼠ip 0.7%醋酸溶液（10 ml/kg），觀察20 min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)。

2.6 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 止咳、化痰作用考察結(jié)果

與模型組比較，各給藥組小鼠的咳嗽潛伏期均有所延長、咳嗽次數(shù)以及酚紅排泌量均有所減少。其中，清咽利肺散劑高劑量組小鼠的咳嗽潛伏期較模型組顯著延長（P＜0.05），陽性對照組和清咽利肺散劑高劑量組小鼠的酚紅排泌量、咳嗽次數(shù)以及清咽利肺散劑中劑量組小鼠的咳嗽次數(shù)較模型組均顯著減少（P＜0.01）。各組大鼠咳嗽潛伏期、咳嗽次數(shù)和酚紅排泌量測定結(jié)果見表1。

3.2 抗炎、止痛作用考察結(jié)果

與模型組比較，各給藥組小鼠的耳腫脹度均有不同程度降低，扭體次數(shù)均有不同程度減少。其中，陽性對照組和清咽利肺散劑高劑量組小鼠的耳腫脹度較模型組顯著減輕（P＜0.05），扭體次數(shù)較模型組顯著減少（P＜0.05）。各組小鼠的耳腫脹度、腫脹抑制率和20 min內(nèi)扭體次數(shù)測定結(jié)果見表2。

表1 各組大鼠咳嗽潛伏期、咳嗽次數(shù)和酚紅排泌量測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 1 Cough incubation period，cough times and phenol red excretion amount of mice in each group（±s，n＝10）

表1 各組大鼠咳嗽潛伏期、咳嗽次數(shù)和酚紅排泌量測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 1 Cough incubation period，cough times and phenol red excretion amount of mice in each group（±s，n＝10）

注：與模型組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01Note：vs.model group，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

酚紅排泌量0.162±0.096 0.063±0.031＊＊0.117±0.051 0.102±0.037 0.051±0.030＊＊組別模型組陽性對照組清咽利肺散劑低劑量組清咽利肺散劑中劑量組清咽利肺散劑高劑量組劑量，g/kg 0.29 2.93 5.85 11.70咳嗽潛伏期，s 74.97±28.69 98.80±26.76 76.50±27.66 80.62±31.59 105.39±28.28＊咳嗽次數(shù)8.3±3.1 4.1±2.3＊＊5.6±2.8 4.2±2.6＊＊3.7±2.3＊＊

表2 各組小鼠的耳腫脹度、腫脹抑制率和20 min內(nèi)扭體次數(shù)測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 2 Ear edema，inhibitory rate of ear edema and writhing time within 20 min of mice in each group（±s，n＝10）

表2 各組小鼠的耳腫脹度、腫脹抑制率和20 min內(nèi)扭體次數(shù)測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 2 Ear edema，inhibitory rate of ear edema and writhing time within 20 min of mice in each group（±s，n＝10）

注：與模型組比較，＊P＜0.05Note：vs.model group，＊P＜0.05

組別模型組陽性對照組清咽利肺散劑低劑量組清咽利肺散劑中劑量組清咽利肺散劑高劑量組20 min內(nèi)扭體次數(shù)21.7±7.8 12.6±6.2＊17.1±7.1 16.4±7.9 14.8±6.4＊劑量，g/kg 抑制率，% 0.29 2.93 5.85 11.70耳腫脹度，% 66.73±22.32 27.47±12.62＊50.33±21.17 42.35±18.29 34.58±11.36＊58.83 24.58 36.54 48.18

4 討論

研究藥物鎮(zhèn)咳作用時多采用機械刺激法、化學(xué)刺激法、電刺激法及抗原致敏引咳法來誘發(fā)咳嗽。本研究采用化學(xué)刺激法，用氨水刺激小鼠呼吸道引發(fā)咳嗽，該法不僅快速、簡便、耗藥量少[5，9]，而且還可以在一定程度上模擬外界刺激因素。本實驗結(jié)果顯示，給予高、中劑量清咽利肺散劑均能顯著減少小鼠的咳嗽次數(shù)，但是僅高劑量清咽利肺散劑能顯著延長氨水誘發(fā)咳嗽的潛伏期，中、低劑量效果不顯著。這表明清咽利肺散劑主要的作用途徑在于抑制咳嗽頻率，而對于咳嗽敏感性的貢獻(xiàn)相對較弱，猜測該藥可能通過作用于神經(jīng)中樞或降低咳嗽反射而達(dá)到減少咳嗽次數(shù)的作用。本次實驗所用小鼠均為當(dāng)天氨水引咳實驗小鼠，由于氨水刺激后的痰液分泌更貼近病原刺激所致的生理情形，相比單純酚紅痰泌量實驗，更能反映藥物在病理條件下對呼吸道炎癥的改善作用。實驗結(jié)果顯示，高劑量清咽利肺散劑能顯著減少小鼠氣管酚紅排出量，即可明顯減少小鼠氣管痰液分泌，與陽性對照藥的作用相似；而中劑量抑制痰液分泌效果具有邊緣效應(yīng)（P＝0.054）。鼠耳腫脹及醋酸扭體實驗結(jié)果顯示，高劑量清咽利肺散劑能顯著減輕二甲苯致耳腫脹度，抗炎效果明顯；同時能顯著減少小鼠醋酸扭體次數(shù)，具有一定止痛效果。但中劑量清咽利肺散劑在抗炎和止痛這兩個方面作用不明顯。

綜合來看，清咽利肺散劑主要的藥理作用是止咳和化痰。在止咳上，清咽利肺散劑中、高兩個劑量均對小鼠咳嗽有顯著的抑制作用；在化痰上，高劑量清咽利肺散劑能顯著減少

痰液分泌量，中劑量清咽利肺散劑抑制痰泌量則具有邊緣效應(yīng)。而在緩解急性炎癥及止痛方面效果相對一般，均只有高劑量清咽利肺散劑能明顯減輕炎性反應(yīng)及止痛效果。本處方所應(yīng)用的藥物包含千里光、魚腥草、桑百葉等多種藥材，其中多數(shù)性微寒，行清熱解毒之功效[10]。而根據(jù)處方各個藥材組分作用來看，理論上本處方應(yīng)當(dāng)具有良好的抗炎[4，11-13]、鎮(zhèn)咳[14]作用。在本次抗炎實驗中，可能是因為數(shù)據(jù)間離散度過大而掩蓋了其真實的抗炎效果。由于鼠耳腫脹實驗中耳片應(yīng)當(dāng)盡量打于相同區(qū)域，稍有偏差則鼠耳自身厚度差異會掩蓋部分腫脹效果，需要更熟練的打孔技巧來提高打孔位置精確度，以減小耳片數(shù)據(jù)誤差。本研究所用的模型及實驗大多為經(jīng)典止咳、化痰、消炎、止痛的基礎(chǔ)模型與實驗，主要通過考察藥效學(xué)方面的內(nèi)容驗證藥物的藥效，未涉及藥物的作用機制等深入內(nèi)容，在后續(xù)研究中筆者將進(jìn)一步探討。

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Study on the Effects of Relieving Cough，Reducing Phlegm，Inhibiting Inflammatory and Relieving Pain of Qingyan Lifei Powder

ZHANG Li1，ZHANG Yiyun2，F(xiàn)U Hong2，WANG Kaiyu1，LEI Lingfang1，WANG Chuntao2（1.Dept.of Pharmacy，Hainan Provincial Hospital of TCM，Haikou 570203，China；2.Hainan Institute for Pharmaceutical Research，Haikou 570216，China）

OBJECTIVE：To investigate the effects of Qingyan lifei powder（QYLFP）on relieving cough，reducing phlegm，inhibiting inflammatory and relieving pain.METHODS：The mice were divided into model group，positive control group（Yanjianning tablet，0.29 g/kg），QYLFP low-dose，medium-dose and high-dose groups（13.7，27.3，54.6 g/kg），with 10 mice in each group.Model group was given constant volume of normal saline intragastrically，and treatment groups were given relevant medicine intragastrically，once a day，for 7 days.After medication，the effects of relieving cough，reducing phlegm，anti-inflammatory and analgesic of QYLFP were investigated through ammonia-induced cough method，phenol red method，xylene-caused mice ear edema test and acetic acid writhing test.RESULTS：Compared with model group，the cough times of those groups decreased significantly，except for QYLFP low-dose group；the cough incubation period in QYLFP high-dose group prolonged significantly（P＜0.05 or P＜0.01）.The phenol red excretion amount and writhing times within 20 min of mice decreased significantly and ear edema relieved significantly in positive control and QYLFP high-dose group（P＜0.05 or P＜0.01）.CONCLUSIONS：QYLFP has good effects on relieving acough，reducing sputum and inhibiting inflammatory and relieving pain.

Qingyan lifei powder；Relieving cough；Reducing phlegm；Inhibiting inflammatory；Relieving pain；Mice

R943

A

1001-0408（2016）31-4376-03

2016-05-01

2016-09-13）

（編輯：林 靜）

海南省中藥現(xiàn)代化專項項目（No.ZY201428）

＊副主任中藥師。研究方向：中藥制劑、醫(yī)院藥學(xué)。電話：0898-66244599。E-mail：1047559396@qq.com

#通信作者：副主任藥師。研究方向：藥品檢驗、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。電話：0898-66832918。E-mail：1721170395@qq.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.31.17