韋祝新,張?jiān)龇澹赫潲?,陳霜,羅殿中
(1廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院,南寧530021;2廣西醫(yī)科大學(xué))
鼻咽癌組織中BLU/ZMYND10α蛋白的表達(dá)變化及意義
韋祝新1,張?jiān)龇?,梁珍麗2,陳霜1,羅殿中1
(1廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院,南寧530021;2廣西醫(yī)科大學(xué))
目的 探討B(tài)LU/ZMYND10α蛋白在人鼻咽癌組織中的表達(dá)及其與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法 選取鼻咽癌蠟塊標(biāo)本90例(其中24例伴癌旁正常鼻咽上皮)和正常鼻咽黏膜組織蠟塊標(biāo)本18例,采用組織微陣列技術(shù)結(jié)合免疫組化法檢測(cè)標(biāo)本中BLU/ZMYDD10α蛋白表達(dá),分析BLU/ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與鼻咽癌患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 鼻咽癌組織中BLU/ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率低于癌旁正常鼻咽上皮組織、正常鼻咽上皮組織(P均<0.05),鼻咽癌組織BLU/ZMYDD10α蛋白在細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率低于正常鼻咽上皮組織和癌旁正常鼻咽上皮組織(P均<0.05)。鼻咽癌組織中BLU/ZMYND10α蛋白表達(dá)與患者性別、腫瘤組織學(xué)分類(lèi)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期無(wú)關(guān)(P均>0.05)。結(jié)論 BLU/ZMYND10α蛋白在鼻咽癌組織中呈低表達(dá),其低表達(dá)可能促進(jìn)鼻咽癌的發(fā)生。
鼻咽腫瘤;組織微陣列;BLU/ZMYND10α蛋白;免疫組織化學(xué)
鼻咽癌(NPC)是我國(guó)南方和東南亞地區(qū)的高發(fā)惡性腫瘤,其發(fā)病機(jī)制仍未完全清楚。NPC的發(fā)生、發(fā)展與多個(gè)癌基因和抑癌基因的激活和失活密切相關(guān)[1]。最近文獻(xiàn)報(bào)道,BLU/ZMYDD10α基因與某些惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān)[2,3],然而B(niǎo)LU/ZMYDD10α基因在NPC組織中的表達(dá)尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用組織芯片結(jié)合免疫組化技術(shù)對(duì)正常鼻咽上皮組織、癌旁和NPC組織中BLU/ZMYDD10α蛋白水平進(jìn)行檢測(cè),同時(shí)分析NPC組織中BLU/ZMYDD10α蛋白的表達(dá)與患者臨床病理特征之間的關(guān)系,以探討B(tài)LU/ZMYDD10α在NPC發(fā)生發(fā)展中的作用。
1.1臨床資料 選擇2003年2月~2008年12月廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科保存的NPC蠟塊標(biāo)本90例(其中24例伴癌旁正常鼻咽上皮),患者男69例、女21例,年齡13~75(43.12±3.21)歲;患者均未行放化療。WHO的NPC組織學(xué)分類(lèi)[4]:分化型83例,未分化型7例。90例NPC患者中,有69例經(jīng)臨床檢查、頭頸部MRI和(或)CT、淋巴結(jié)活檢病理診斷證實(shí)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移57例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12例。TNM分期采用2003年修改的國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)、美國(guó)腫瘤聯(lián)合會(huì)(AJCC)聯(lián)合制定修改的標(biāo)準(zhǔn),90例NPC患者中,有58例有完整臨床資料,TNM分期如下:Ⅰ期2例,Ⅱ期18例,Ⅲ期20例,Ⅳ期18例。同時(shí)選取正常鼻咽黏膜組織蠟塊標(biāo)本18例,男10例、女8例,年齡16~73(41.89 ±3.73)歲);其性別、年齡與NPC患者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
1.2不同鼻咽上皮組織中BLU/ZMYDD10α蛋白檢測(cè) 組織微陣列采用美國(guó)Beecher公司的組織陣列儀制作。兔抗人多克隆抗體BLU/ZMYDD10α蛋白抗體購(gòu)自Santa Cruz公司,抗兔免疫組織化學(xué)超敏SP試劑盒、正常非免疫羊血清和DAB顯色試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。組織蠟塊標(biāo)本采用全自動(dòng)切片機(jī)連續(xù)切片,切片厚4 μm。采用免疫組織化學(xué)SP染色法,首先將標(biāo)本芯片切片脫蠟,水化后置于3%H2O2中室溫封閉30 min后,滴加1∶500濃度的兔抗人多克隆抗體BLU/ZMYDD10α置于密封濕盒中4℃過(guò)夜;取出,滴入即用型生物素標(biāo)記二抗,以標(biāo)記過(guò)氧化物酶的鏈霉菌抗生物素蛋白,DAB顯色后,蘇木素復(fù)染,采用中性樹(shù)膠封片。陽(yáng)性對(duì)照為確診的肺腺癌切片,陰性對(duì)照以PBS代替一抗。采用盲法由2位資深病理醫(yī)師顯微鏡下觀察,高倍鏡下(×400)計(jì)數(shù)1 000個(gè)(要求避開(kāi)壞死區(qū)及其周邊部位)細(xì)胞,視野中棕黃色細(xì)小顆粒為細(xì)胞陽(yáng)性。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>20%為BLU/ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)[5]。
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料用百分比表示,比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1不同鼻咽上皮組織BLU/ZMYDD10α蛋白表達(dá) 正常鼻咽上皮組織BLU/ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為94.4%(17/18),癌旁正常鼻咽上皮組織BLU/ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為91.7%(22/24),NPC組織BLU/ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為64.4%(58/90)。NPC組織BLU/ZMYDD10α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率低于癌旁正常鼻咽上皮、正常鼻咽上皮組織(P均<0.05)。
2.2不同鼻咽上皮組織BLU/ZMYDD10α蛋白表達(dá)定位 正常鼻咽上皮組織BLU/ZMYDD10α蛋白單純?cè)诩?xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率為5.6%(1/18),在細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率為94.4%(17/18);癌旁正常鼻咽上皮組織BLU/ZMYDD10α蛋白單純?cè)诩?xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率為12.5%(3/24),在細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率為87.5%(21/24);鼻咽癌組織BLU/ZMYDD10α蛋白單純?cè)诩?xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率為48.9%(44/90),在細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率為51.1%(46/90)。正常鼻咽上皮和癌旁正常上皮組織BLU/ZMYDD10α蛋白在細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)率高于NPC組織(P均<0.05)。
2.3不同臨床病理特征NPC患者的BLU/ZMYDD10α蛋白表達(dá) 見(jiàn)表1。
表1 不同臨床病理特征NPC患者的BLU/ZMYDD10α蛋白表達(dá)比較(例)
研究發(fā)現(xiàn),BLU/ZMYDD10α基因定位于細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞核[6,7],主要編碼糖酵解限速酶的蛋白,能夠催化磷酸甘油轉(zhuǎn)化為磷酸烯醇式丙酮酸;同時(shí)編碼的c-myc啟動(dòng)子結(jié)合蛋白(MBP-1),在細(xì)胞核內(nèi)無(wú)酶活性,具有負(fù)向調(diào)控c-myc表達(dá)功能[8,9]。研究發(fā)現(xiàn),原癌基因c-myc參與調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化,這可能是MBP-1抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的主要原因[10]。BLU/ZMYDD10α基因位于人染色體1p35~p36,當(dāng)此段基因缺失時(shí),成神經(jīng)細(xì)胞瘤、惡性黑色素瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、乳腺癌和肝癌等惡性腫瘤均可發(fā)生[11]。文獻(xiàn)報(bào)道,轉(zhuǎn)染BLU/ZMYDD10α cDNA,以染色體1p缺失的成神經(jīng)細(xì)胞瘤株誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡可減少低存活的癌細(xì)胞數(shù)目,因此成神經(jīng)細(xì)胞瘤特征為染色體1p缺失[12]。缺失1p的成神經(jīng)瘤細(xì)胞在體外被導(dǎo)入轉(zhuǎn)錄的BLU/ZMYDD10α mRNA后,生長(zhǎng)受到抑制,類(lèi)似于導(dǎo)入293細(xì)胞系,提示MBP-1具有普遍的抑制腫瘤活性。研究發(fā)現(xiàn),前列腺癌細(xì)胞被導(dǎo)入腺病毒介導(dǎo)外源的MBP-1后,癌細(xì)胞可發(fā)生凋亡[9]。BLU/ZMYDD10α在非小細(xì)胞肺癌中普遍表達(dá)下調(diào),且表達(dá)下調(diào)程度越嚴(yán)重預(yù)后越差[13]。
本研究發(fā)現(xiàn)在正常鼻咽上皮和癌旁正常鼻咽上皮組織中BLU/ZMYDD10α蛋白正常表達(dá),而NPC組織中BLU/ZMYDD10α蛋白表達(dá)下調(diào),說(shuō)明其表達(dá)下調(diào)與NPC的發(fā)生可能有關(guān)。但是,BLU/ZMYDD10α的表達(dá)水平與患者臨床特征如性別、組織學(xué)分類(lèi)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期等無(wú)關(guān)。有報(bào)道BLU/ZMYDD10α蛋白在非小細(xì)胞肺癌[8]和與HBV相關(guān)的肝腫瘤[14]中高表達(dá),且腫瘤惡性程度與表達(dá)水平呈正相關(guān)。此類(lèi)瘤細(xì)胞較正常細(xì)胞代謝率更高,而B(niǎo)LU/ZMYDD10α蛋白具有糖分解酶活性,當(dāng)細(xì)胞代謝升高時(shí),則呈現(xiàn)BLU/ZMYDD10α的高表達(dá)狀態(tài)。
研究顯示,BLU/ZMYDD10α蛋白位于細(xì)胞內(nèi)不同部位,其功能活性也有不同。定位于細(xì)胞質(zhì)時(shí),具有糖酵解限速酶的酶活性;而在細(xì)胞核時(shí),具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。本文發(fā)現(xiàn),NPC組織中BLU/ZMYDD10α蛋白在細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)的陽(yáng)性表達(dá)低于正常鼻咽黏膜上皮、癌旁正常鼻咽上皮組織。在正常鼻咽上皮、癌旁正常鼻咽上皮組織,大量BLU/ZMYDD10α蛋白為細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)表達(dá),而NPC組織中BLU/ZMYDD10α蛋白單純?cè)诩?xì)胞質(zhì)表達(dá)量較高,細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)BLU/ZMYDD10α蛋白表達(dá)相對(duì)降低,導(dǎo)致在NPC上皮組織細(xì)胞核中抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的MBP-1減少或缺失,c-myc活性增強(qiáng),促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。
綜上所述,鼻咽癌細(xì)胞中BLU/ZMYDD10α蛋白細(xì)胞核伴或不伴細(xì)胞質(zhì)表達(dá)下調(diào),其表達(dá)變化與鼻咽癌發(fā)生相關(guān),因此其為臨床研究鼻咽癌發(fā)病機(jī)制提供了新的方向,同時(shí)也為鼻咽癌的早期診斷提供了新的分子靶標(biāo)。
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10.3969/j.issn.1002-266X.2016.21.015
R739.6
B
1002-266X(2016)21-0040-03
廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳科研課題(z2014046)。
張?jiān)龇澹‥-mail:zfzhangphd@163.com)
(2015-12-15)