鼻咽癌組織Ezrin、E-cadherin表達(dá)及其與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后的關(guān)系

李琴，謝瓊

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬荊州醫(yī)院，湖北荊州434020)

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鼻咽癌組織Ezrin、E-cadherin表達(dá)及其與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后的關(guān)系

李琴，謝瓊

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬荊州醫(yī)院，湖北荊州434020)

目的 探討埃茲蛋白(Ezrin)、上皮細(xì)胞鈣黏蛋白(E-cadherin)在鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 選擇鼻咽癌患者53例(觀察組)、慢性鼻咽炎癥患者50例(對照組)，取兩組病變組織，采用免疫組化法觀察Ezrin、E-cadherin蛋白表達(dá)；分析鼻咽癌組織Ezrin、E-cadherin表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 觀察組Ezrin陽性表達(dá)率明顯高于對照組，E-cadherin陽性表達(dá)率明顯低于對照(P均<0.05)；臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、伴淋巴轉(zhuǎn)移、浸潤深度T3～4者Ezrin陽性表達(dá)率明顯升高(P均<0.05)，E-cadherin陽性表達(dá)率明顯降低(P均<0.05)；Ezrin陰性者3年生存率明顯高于Ezrin陽性者，E-cadherin陽性者3年生存率明顯高于E-cadherin陰性者(P均<0.05)。結(jié)論 鼻咽癌組織Ezrin高表達(dá)、E-cadherin低表達(dá)，其表達(dá)變化與鼻咽癌侵襲、轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后有關(guān)。

鼻咽癌；埃茲蛋白；上皮細(xì)胞鈣黏蛋白；預(yù)后

上皮細(xì)胞鈣黏蛋白(E-cadherin)屬于Ca2+依賴性的細(xì)胞黏附分子，對胚胎發(fā)育的細(xì)胞識別、遷移等具有重要作用。有研究證實，E-cadherin功能或表達(dá)缺失與惡性腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)[1～3]。埃茲蛋白(Ezrin)屬于ERM家族的一員，為膜蛋白骨架連接蛋白，在維持細(xì)胞形態(tài)穩(wěn)定、連接黏附分子及調(diào)節(jié)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面具有重要作用。Ognibene等[4]研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、骨癌等侵襲和轉(zhuǎn)移能力較強(qiáng)的惡性腫瘤組織中Ezrin過表達(dá)。但目前關(guān)于Ezrin、E-cadherin在鼻咽癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的研究較少，二者是否參與了鼻咽癌的不良預(yù)后亦不十分明確。本研究觀察了鼻咽癌組織Ezrin、E-cadherin表達(dá)變化，并分析其表達(dá)與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年5月～2012年5月我院收治的鼻咽癌患者53例(觀察組)，均經(jīng)術(shù)后組織病理檢查確診，入組前未行放療、化療及手術(shù)治療。排除合并其他惡性腫瘤及既往給予其他抗腫瘤治療者。其中，男31例、女22例，年齡21～84(47±5)歲；臨床分期[5]：Ⅰ期3例，Ⅱ期10例，Ⅲ期22例，Ⅳ期18例；浸潤深度：T1～223例，T3～430例；合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例。同期選擇在我院就診的慢性鼻咽炎癥患者50例(對照組)，男29例、女21例，年齡18～87(48±4)歲，鼻竇炎27例、咽炎23例。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 病變組織Ezrin、E-cadherin表達(dá)檢測 留取兩組相應(yīng)的病變組織，10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚切片。切片常規(guī)脫蠟、水化，去除內(nèi)源性過氧化物酶，微波修復(fù)，封閉組織非特異性抗原，以鼠抗人Ezrin單克隆抗體或鼠抗人E-cadherin單克隆抗體作為一抗，4 ℃孵育24 h，陰性對照以PBS代替一抗；以生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG作為二抗，37 ℃孵育30 min；滴加辣根過氧化酶標(biāo)記的復(fù)合物，37 ℃孵育20 min；最后DAB顯色，蘇木精復(fù)染，二甲苯透明，中性樹膠封片，鏡檢。隨機(jī)取5個高倍鏡視野(×400)，計數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)，以染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占比例綜合評定。Ezrin陽性主要定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，呈黃色；E-cadherin陽性主要定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜，呈棕黃色或棕色。染色強(qiáng)度判定：無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕紅色為3分；陽性細(xì)胞所占比例：無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞所占比例<30%為1分、≥30%～<60%為2分、≥60%為3分。二者之和≤2分為陰性，≥3分為陽性。

1.3 術(shù)后治療及隨訪 鼻咽癌患者術(shù)后行常規(guī)局部根治性放療聯(lián)合化療。放療劑量：原發(fā)灶65～76 Gy，頸淋巴結(jié)50～65 Gy；放療時間35～54天。其中31例患者聯(lián)合1～6個療程輔助化療，化療方案為PF方案。術(shù)后隨訪3年，隨訪方式包括電話和門診復(fù)查，記錄患者生存期。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗或Fishers確切概率法。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Ezrin、E-cadherin陽性表達(dá)比較 觀察組及對照組Ezrin陽性表達(dá)率分別為67.9%(36/53)、6.0%(3/50)，E-cadherin陽性表達(dá)率分別為17.0%(9/53)、98.0%(49/50)。觀察組Ezrin陽性表達(dá)率明顯高于對照組，E-cadherin陽性表達(dá)率明顯低于對照組(P均<0.05)。

2.2 鼻咽癌組織Ezrin、E-cadherin表達(dá)的關(guān)系 鼻咽癌組織Ezrin陽性表達(dá)與E-cadherin陽性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.471，P<0.01)。

2.3 鼻咽癌組織Ezrin、E-cadherin陽性表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見表1。

表1 鼻咽癌組織Ezrin、E-cadherin陽性表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.4 生存分析 鼻咽癌Ezrin陰性者17例，3年生存率為22.3%；Ezrin陽性者36例，3年生存率為6.2%；二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.071，P<0.01)。鼻咽癌E-cadherin陽性者9例，3年生存率為40.8%；E-cadherin陰性者44例，3年生存率為22.7%；二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.715，P<0.01)。

3 討論

現(xiàn)已證實，Ezrin、E-cadherin異常表達(dá)與惡性腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)。Ezrin是維持細(xì)胞形態(tài)和功能完整的主要蛋白之一。正常情況下，Ezrin蛋白在體內(nèi)以激活狀態(tài)和休眠狀態(tài)兩種形式存在[6，7]；當(dāng)Ezrin末端被活化后能誘導(dǎo)其與黏附分子連接，從而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生遷移。有研究證實，Ezrin通過介導(dǎo)細(xì)胞膜與細(xì)胞骨架的連接來調(diào)節(jié)細(xì)胞活動[8，9]。細(xì)胞內(nèi)Ezrin異常變化可導(dǎo)致某些腫瘤的進(jìn)展，并與患者預(yù)后有關(guān)。如王繁等[10]報道，子宮內(nèi)膜癌組織Ezrin過表達(dá)與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)，且患者生存期縮短。本研究觀察組Ezrin陽性表達(dá)率明顯高于對照組，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、伴淋巴轉(zhuǎn)移、浸潤深度T3～4者Ezrin陽性表達(dá)率明顯升高，且Ezrin陰性者3年生存率明顯高于Ezrin陽性者。說明Ezrin過表達(dá)與鼻咽癌侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)，且其過表達(dá)多預(yù)示患者預(yù)后不良。

E-cadherin在各種上皮細(xì)胞中廣泛存在，可介導(dǎo)同型細(xì)胞發(fā)生連接。Nakagawa等[11]研究證實，E-cadherin在維持上皮細(xì)胞形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)和功能完整等方面具有重要作用。正常組織中E-cadherin表達(dá)穩(wěn)定；上皮性腫瘤組織中E-cadherin表達(dá)下調(diào)[12]。Ohishi等[13]報道，E-cadherin表達(dá)降低會抑制其與細(xì)胞內(nèi)catenin形成穩(wěn)定復(fù)合物，導(dǎo)致細(xì)胞骨架發(fā)生松動，細(xì)胞脫離原位而侵襲周圍組織。Koyuncuoglu等[14]研究證實，E-cadherin表達(dá)降低可導(dǎo)致由其介導(dǎo)的細(xì)胞間黏附性降低，細(xì)胞脫離原發(fā)灶并穿透基膜侵襲周圍組織。劉青等[15]研究發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌組織E-cadherin低表達(dá)與鼻咽癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究觀察組E-cadherin陽性表達(dá)率明顯低于對照組，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、伴淋巴轉(zhuǎn)移、浸潤深度T3～4者E-cadherin陽性表達(dá)率明顯降低；E-cadherin陽性者3年生存率明顯高于E-cadherin陰性者。提示E-cadherin陽性表達(dá)可抑制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究還發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌組織Ezrin陽性表達(dá)率與E-cadherin陽性表達(dá)率呈負(fù)相關(guān)，說明Ezrin高表達(dá)、E-cadherin低表達(dá)均與鼻咽癌的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。

綜上所述，Ezrin高表達(dá)、E-cadherin低表達(dá)參與了鼻咽癌的侵襲、轉(zhuǎn)移并與患者預(yù)后有關(guān)。

[1] Liu XW, Xie CM, Mo YX, et al. Magnetic resonance imaging features of nasopharyngeal carcinoma and nasopharyngeal non-Hodgkin′s lymphoma: are there differences[J]. Eur J Radiol, 2012,81(6):1146-1154.

[2] 陳奇松，林少俊，潘建基，等.779例鼻咽癌頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移規(guī)律分析[J].中國癌癥雜志，2010，20(1)：50-54.

[3] Hoy B, Geppert T, Boehm M, et al. Distinct roles of secreted HtrA proteases from gram-negative pathogens in cleaving the junctional protein and tumor suppressor E-cadherin[J]. J Biol Chem, 2012,287(13):10115-10120.

[4] Ognibene M, Vanni C, Segalerba D, et al. The tumor suppressor hamartin enhances Dbl protein transforming activity through interaction with ezrin[J]. J Biol Chem, 2011,286(34):29973-29983.

[5] 王鋒剛，陸雪官，宦堅，等.鼻咽癌中國1992、2008分期和國際抗癌聯(lián)盟2010分期標(biāo)準(zhǔn)的比較研究[J].中華放射腫瘤學(xué)雜志，2011，20(4)：270-275.

[6] 李海英.埃茲蛋白、轉(zhuǎn)移相關(guān)黏附分子44V6、E-鈣黏附素在人結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其意義[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2011，14(12)：1318-1320.

[7] Morales FC, Molina JR, Hayashi Y, et al. Overexpression of ezrin inactivates NF2 tumor suppressor in glioblastoma[J]. Neuro Oncol, 2010,12(6):528-539.

[8] Yogesha SD, Sharff AJ, Giovannini M, et al. Unfurling of the band 4.1, ezrin, radixin, moesin (FERM) domain of the merlin tumor suppressor[J]. Protein Sci, 2011,20(12):2113-2120.

[9] Yonglitthipagon P, Pairojkul C, Chamgramol Y, et al. Prognostic significance of peroxiredoxin 1 and ezrin-radixin-moesin-binding phosphoprotein 50 in cholangiocarcinoma[J]. Hum Pathol, 2012,43(10):1719-1730.

[10] 王繁，王瑛嫦，周潔.MMP-9和Ezrin在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及與ER、PR的相關(guān)性[J].實用腫瘤雜志，2012，27(3)：240-244.

[11] Nakagawa Y, Ohira M, Kubo N, et al. Tumor budding and E-cadherin expression are useful predictors of nodal involvement in T1 esophageal squamous cell carcinoma[J]. Anticancer Res, 2013,33(11):5023-5029.

[12] Hirano T, Satow R, Kato A, et al. Identification of novel small compounds that restore E-cadherin expression and inhibit tumor cell motility and invasiveness[J]. Biochem Pharmacol, 2013,86(10):1419-1429.

[13] Ohishi Y, Kurihara S, Takeuchi T, et al. E-cadherin nuclear staining is useful for the diagnosis of ovarian adult granulosa cell tumor[J].Hum Pathol, 2012,43(6):808-817.

[14] Koyuncuoglu M, Okyay E, Saatli B, et al. Tumor budding and E-Cadherin expression in endometrial carcinoma: are they prognostic factors in endometrial cancer[J]. Gynecol Oncol, 2012,125(1):208-213.

[15] 劉青，王雅棣，董稚明，等.錳超氧化物歧化酶和E-鈣黏蛋白在鼻咽癌組織中的表達(dá)及意義[J].中華放射腫瘤學(xué)雜志，2009，18(1)：37-41.

謝瓊(E-mail： 1279566754@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.40.032

R739.6

B

1002-266X(2016)40-0094-03

2016-07-24)