益生菌發(fā)酵產(chǎn)物對肉雞腸道形態(tài)和腸道屏障功能的影響

張 俊，朱建津，劉江英，蔣 蓉，成向榮

(1.江南大學(xué) 食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122； 2.上海三智生物科技有限公司，上海 201706)

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益生菌發(fā)酵產(chǎn)物對肉雞腸道形態(tài)和腸道屏障功能的影響

張 俊1，朱建津1，劉江英1，蔣 蓉2，成向榮1

(1.江南大學(xué) 食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122； 2.上海三智生物科技有限公司，上海 201706)

為了研究益生菌發(fā)酵產(chǎn)物對肉雞腸道形態(tài)和腸道屏障功能的影響，將495羽1日齡實(shí)驗(yàn)雞隨機(jī)分5組，每組9個重復(fù)，每重復(fù)11羽。各組飼喂不同飼糧：第Ⅰ組為正對照，基礎(chǔ)日糧+桿菌肽鋅80 mg·kg-1飼料+硫酸粘菌素20 mg·kg-1飼料+2%未發(fā)酵飼料；第Ⅱ組為負(fù)對照組，基礎(chǔ)日糧+2%未發(fā)酵飼料；第Ⅲ組，基礎(chǔ)日糧+1%未發(fā)酵飼料+1%發(fā)酵飼料；第Ⅳ組，基礎(chǔ)飼糧+2%發(fā)酵飼料；第Ⅴ組，基礎(chǔ)飼糧+2%滅菌發(fā)酵飼料。試驗(yàn)期70 d。試驗(yàn)結(jié)束時，取血清測內(nèi)毒素(lipopolysaccharide，LPS)濃度，取回腸用于掃描電鏡(SEM)檢測，用無菌玻片刮取小腸黏膜用于測定腸道緊密連接蛋白的表達(dá)量。結(jié)果顯示，第Ⅰ組、第Ⅳ組、第Ⅴ組血清內(nèi)毒素水平有顯著下降趨勢；第Ⅴ組、第Ⅲ組絨毛比第Ⅱ組更長、更光滑，且其微絨毛長度顯著高于第Ⅰ組、第Ⅳ組，但腸絨毛密度不及第Ⅰ組、第Ⅳ組。第Ⅴ組和第Ⅳ組腸道緊密連接蛋白表達(dá)量均顯著上調(diào)。結(jié)果表明，不僅是益生菌，其發(fā)酵代謝產(chǎn)物對腸道健康也發(fā)揮重要作用。

發(fā)酵產(chǎn)物；肉雞；腸道形態(tài)；緊密連接蛋白

抗生素作為促生長飼料添加劑用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)已經(jīng)有數(shù)十年，出現(xiàn)了細(xì)菌耐藥性增加、抗生素殘留等問題，因此尋找無毒副作用、無藥殘的綠色飼料添加劑替代抗生素成為必然趨勢。目前研究表明，日糧中添加益生菌、益生元、酶、抗菌肽[1]、發(fā)酵飼料[2]、酸化劑[3]、天然植物[4]等能提高飼料轉(zhuǎn)化效率、免疫功能、消化能力、胴體品質(zhì)等，但是大部分替代物難以達(dá)到令人滿意的效果。發(fā)酵飼料不僅含有益生菌，還有有機(jī)酸、肽等發(fā)酵代謝產(chǎn)物，研究表明，細(xì)菌細(xì)胞壁中肽聚糖的水解產(chǎn)物胞壁酰二肽(MDP)[5]、細(xì)菌分泌的磷壁酸[6]、某些乳桿菌的胞外蛋白和丁酸[7-8]、多聚磷酸鹽[9]、多種細(xì)菌產(chǎn)生的吲哚[10]等能參與調(diào)節(jié)腸道上皮緊密連接蛋白的合成，促進(jìn)動物腸道健康。為了研究益生菌及其發(fā)酵產(chǎn)物對腸道屏障的影響，本實(shí)驗(yàn)以在日糧中添加發(fā)酵飼料和滅菌發(fā)酵飼料并與正對照組及負(fù)對照組對比，通過觀察肉雞腸道形態(tài)、測定血清內(nèi)毒素和緊密連接蛋白基因表達(dá)的情況，以評價益生菌發(fā)酵產(chǎn)物對肉雞的腸道黏膜形態(tài)和屏障功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器

單向閥塑料袋(溫州創(chuàng)佳包裝材料有限公司)；掃描電鏡(SU1510，日本日立株式會社)；實(shí)時定量PCR儀(Applied Biosystems Prism 7900，美國Applied Biosystems公司)。

1.1.2 試劑

植物乳桿菌菌液、發(fā)酵菌粉(上海三智生物科技有限公司)；Biozol RNA提取試劑(美國BIOMIGA公司)；ELISA試劑盒(廈門慧嘉生物科技有限公司)；引物序列(上海捷瑞有限公司)；SYBR Green Master Mix(韓國Bioneer公司)。

1.1.3 發(fā)酵飼料

發(fā)酵底物(豆粕40%、麥麩30%、玉米皮40%)經(jīng)錘片式粉碎機(jī)粉碎，篩孔直徑2 mm。植物乳桿菌菌液、菌粉、水和發(fā)酵底物按照質(zhì)量10∶1∶500∶1 000的比例混勻，置于含單向閥塑料袋內(nèi)，密封并保持在(25 ± 5) ℃，pH<4.8時飼料發(fā)酵成功。植物乳桿菌菌液Lactobacillusplantarum，發(fā)酵菌粉中枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis、地衣芽胞桿菌Bacilluslicheniformis、釀酒酵母Saccharomycescerevisiae的活菌數(shù)分別為1×108、0.5×107、5×107、1.5×107cfu·g-1。

1.1.4 滅菌發(fā)酵飼料

將發(fā)酵飼料密封，121 ℃滅菌10 min。

1.1.5 實(shí)驗(yàn)動物

購自常州立華畜禽有限公司的1日齡慢速黃羽肉雞495羽，初重(41.27 ± 0.49) g

1.1.6 基礎(chǔ)日糧

試驗(yàn)日糧為玉米豆粕型日糧，參照美國國家研究委員會標(biāo)準(zhǔn)(NRC，1994)配制，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分見表1。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與動物飼養(yǎng)

將495羽實(shí)驗(yàn)雞隨機(jī)分成5組，每組9個重復(fù)，每重復(fù)11羽。第Ⅰ組為正對照，飼喂基礎(chǔ)日糧+桿菌肽鋅80 mg·kg-1+硫酸粘菌素20 mg·kg-1飼料；第Ⅱ組為負(fù)對照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧；第Ⅲ組為基礎(chǔ)飼糧+1%發(fā)酵飼料；第Ⅳ組為基礎(chǔ)飼糧+2%發(fā)酵飼料；第Ⅴ組為基礎(chǔ)飼糧+2%滅菌發(fā)酵飼料。實(shí)驗(yàn)雞自由飲水和采食，常規(guī)免疫，常規(guī)飼養(yǎng)管理。實(shí)驗(yàn)期70 d，試驗(yàn)結(jié)束時，每組選擇體質(zhì)量接近的雞8羽(公母各半)，進(jìn)行屠宰試驗(yàn)。

1.3 樣品采集

在實(shí)驗(yàn)第70天，處理組中隨機(jī)選取8羽接近平均體質(zhì)量的健康仔雞屠宰，肉雞頸脈放血，用采血管收集血液，待血液自然凝固后，1 574g，離心10 min，取上層血清分裝于0.5 mL 塑料離心預(yù)混料為每kg日糧提供：Mn 110 mg (MnSO4·H2O)；Fe 66.5 mg (FeSO4·H2O)；Zn 88 mg (ZnSO4·7H2O)；Cu 8.8 mg (CuSO4·5H2O)；I 0.7 mg (CaI2)；Se 0.288 mg (Na2SeO3)；VA 11 500 IU；VD33500 IU；VE 30 mg；VK35 mg；VB13.38 mg；VB29 mg；VB68.96 mg；VB120.025 mg；氯化膽堿800 mg；泛酸鈣13 mg；煙酸45 mg；生物素0.08 mg；葉酸1.20 mg。

表1 基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平

Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet

成分Ingredient用量Dosage/%1—21d22—42d43—70d營養(yǎng)成分Nutrition含量Content1—21d22—42d43—70d玉米Corngrain60.764.567.3代謝能ME/(MJ·kg-1)12.112.713.3魚粉Fishmeal200粗蛋白質(zhì)Crudeprotein/%20.0217.9416.79豆粕Soybeanmeal302724鈣Ca/%1.020.930.86未發(fā)酵飼料Unfermentedfeed222有效磷Virtualphosphor-us/%0.450.380.33豆油Soybeanoil12.22.7賴氨酸Lys/%1.21.11.0磷酸氫鈣CaHPO41.51.51.2蛋+胱Met+Cys/%0.850.760.66石粉Limestone1.51.51.5蘇氨酸Thr/%0.830.740.64預(yù)混料Premix11.31.31.3色氨酸Trp/%0.260.230.21合計(jì)Total100100100

Premix provided for per kilogram of diet: Mn 110 mg (as MnSO4·H2O); Fe 66.5 mg (FeSO4·H2O); Zn 88 mg (ZnSO4·7H2O); Cu 8.8 mg (CuSO4·5H2O); I 0.7 mg (CaI2); Se 0.288 mg (Na2SeO3); VA 11 500 IU; VD33 500 IU; VE 30 mg; VK35 mg; VB13.38 mg; VB29 mg; VB68.96 mg; VB120.025 mg; Choline chloride 800 mg; Calcium pantothenate 13 mg; Niacin 45 mg; Biotin 0.08 mg; Folic acid 1.20 mg.

管中；迅速取腸分段，用載玻片輕輕刮取回腸中段腸黏膜置于塑料離心管并加入1.5 mL Biozol RNA提取試劑，皆用液氮速凍并置于-80 ℃超低溫冰箱中保存。取回腸近中段，用4%戊二醛清洗并固定。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 腸絨毛形態(tài)

常規(guī)方法制成掃描電鏡材料， 用掃描電鏡觀察、照相，并測量微絨毛長度。

1.4.2 血清內(nèi)毒素測定

嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明操作。

1.4.3 緊密連接蛋白基因表達(dá)

實(shí)時定量PCR(real time-PCR)法測定回腸黏膜轉(zhuǎn)錄因子NF-KBp65、Toll樣受體TLR2、緊密連接蛋白Claudin-3、Occludin、ZO-1與內(nèi)參基因β-actin的相對表達(dá)豐度。提取腸黏膜組織總RNA，瓊脂糖凝膠電泳檢查RNA的完整性。核酸蛋白檢測儀于260 nm檢測RNA濃度并稀釋到合適濃度進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。cDNA反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系(10 μL)：第一步，模板RNA+DEPC水6.00 μL，dNTP(10 nmol·L-1)2.00 μL，Oligo(dT)2.00 μL混勻，70 ℃水浴5 min后，迅速取出至冰浴冷卻；第二步，DEPC水9.25 μL ，5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液5.00 μL，Rnase Inhibitor(50 U·μL-1)0.25 μL，M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶(200 U·μL-1)0.50 μL混勻，37 ℃水浴1.5 h，95 ℃水浴5 min，4 ℃冷卻。從而得到cDNA樣品，將反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA分別稀釋至適當(dāng)濃度后作為熒光定量PCR反應(yīng)模板，-20 ℃保存。運(yùn)用Prime Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)緊密連接蛋白基因和內(nèi)參基因引物，引物序列見表2。實(shí)時定量PCR儀進(jìn)行測定。反應(yīng)體系為10 μL∶SYBR Green Master Mix 5.0 μL，上下游引物各0.4 μL，cDNA 0.5 μL，DEPC水3.7 μL。PCR反應(yīng)條件為： 95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性20 s，60 ℃退火30 s，共40個循環(huán)，72 ℃延伸2 min，最后95 ℃ 15 s生成熔解曲線。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)

用Excel統(tǒng)計(jì)后，根據(jù)各基因的Ct值計(jì)算擴(kuò)增效率和分析熔解曲線，以確定模板和引物達(dá)到用熒光定量檢測組織相對表達(dá)量的要求。用2-ΔΔCt法計(jì)算出腸道粘膜每個樣品重復(fù)3 次后取平均值。通過SPSS17.0進(jìn)行One-way ANOVA 分析，并進(jìn)行LSD與Duncan’s 多重比較，以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，數(shù)據(jù)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM) 表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵產(chǎn)物對回腸形態(tài)的影響

由圖1可知，Ⅰ組(A)回腸絨毛褶皺數(shù)目相對較多，絨毛密度高，絨毛間縫隙較小，絨毛表面略粗糙；Ⅱ組(B)腸絨毛褶皺較少，絨毛變寬、嚴(yán)重萎縮并塌陷，絨毛密度較低；Ⅲ組(C)的腸絨毛褶皺飽滿、表面光滑、較粗短，絨毛數(shù)量相對正對照組較少；Ⅳ組(D)腸絨毛褶皺較Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅴ組多，絨毛密度較高，絨毛飽滿且表面光滑；Ⅴ組(E)的腸絨毛與Ⅲ組相似，但腸絨毛表面比Ⅲ組光滑，且絨毛較長，表明實(shí)驗(yàn)組改善了腸道形態(tài)。

表2 Real-time PCR 所需序列引物

Table 2 Primer sequences for Real-time PCR analysis

基因Gene引物序列Primersequence(5’-3’)β-actinF-GAGAAATTGTGCGTGACATCAR-CCTGAACCTCTCATTGCCAOccludinF-CTTATAGGCCTGATGAATR-CATAGACAGAATCCGAATClaudin-3F-GTCTATGGGGCTGGAGATCGR-ATCCACAGCCCTTCCCAGAZO-1F-CTTCAGGTGTTTCTCTTCCTCCTCR-CTGTGGTTTCATGGCTGGATCNF-KBp65F-CCACAACACAATGCGCTCTGR-AACTCAGCGGCGTCGATGTLR2F-ATTGAGAAGAGCCACAAGACGCR-CGCCACATCGTTGTTCTCGTC

A—E分別為Ⅰ—Ⅴ組。SEM×150A-E showed result of treatment Ⅰ-Ⅴ， respectively. SEM×150圖1 益生菌發(fā)酵產(chǎn)物對肉雞回腸絨毛形態(tài)的影響Fig.1 Effects of fermentation metabolite on intestinal villus morphology of chicken ileum

2.2 發(fā)酵產(chǎn)物對血清內(nèi)毒素水平和微絨毛高度的影響

由表3可知，實(shí)驗(yàn)組Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的血清內(nèi)毒素含量相對于負(fù)對照組Ⅱ組分別提高4.8%、6.7%和6.1%，且高于正對照組Ⅰ組，但差異均不顯著(P=0.08)，表明抗生素、發(fā)酵飼料和發(fā)酵產(chǎn)物在一定程度上可降低腸道通透性。實(shí)驗(yàn)Ⅴ組回腸微絨毛高度比Ⅰ組、Ⅲ組、Ⅳ組分別提高70.5%、27.1%、72.4%(P<0.05)，但與Ⅱ組差異不顯著(P>0.05)。Ⅲ組微絨毛高度比Ⅰ組、Ⅳ組分別高34.1%、35.6%(P<0.05)，Ⅰ組、Ⅳ組之間無LPS，內(nèi)毒素水平；HIM，回腸微絨毛高度。同列數(shù)據(jù)后無相同小寫字母的表示差異顯著(P<0.05)，n=8。下同。

表3 益生菌發(fā)酵產(chǎn)物對肉雞血清內(nèi)毒素水平和回腸微絨毛高度的影響

Table 3 Effects of fermentation metabolite on serum LPS and height of ileum microvilli (HIM) in broilers

處理Treat-mentsLPSHIM/μmⅠ11.77±0.500.88±0.02cⅡ13.75±0.601.51±0.04aⅢ13.09±1.341.18±0.06bⅣ12.83±0.640.87±0.03cⅤ12.91±0.301.50±0.02a

LPS， lipopolysaccharide content. HIM， height of ileum microvilli in broilers. Data in the same column followed by no same letter indicated significant difference atP<0.05.n=8. The same as below.

顯著差異(P>0.05)，表明發(fā)酵產(chǎn)物擴(kuò)大腸道吸收面積。

2.3 發(fā)酵產(chǎn)物對緊密連接蛋白基因表達(dá)的影響

由表4可知，添加滅菌發(fā)酵飼料組Ⅴ組腸黏膜的TLR2、claudin-3、ZO-1、NF-kBmRNA表達(dá)量顯著高于負(fù)對照組II組(P<0.05)，但TLR2、claudin-3的mRNA表達(dá)量顯著低于發(fā)酵飼料組Ⅳ組(P<0.05)；Ⅳ組TLR2、claudin-3、ZO-1、NF-kB的mRNA表達(dá)量顯著高于負(fù)對照組(P<0.05)，且claudin-3的表達(dá)量顯著高于正對照組。各個處理對occludin的表達(dá)沒有顯著影響(P>0.05)。

表4 益生菌發(fā)酵產(chǎn)物對肉雞回腸緊密連接蛋白基因表達(dá)的影響

Table 4 Effects of fermentation metabolite on expressions of tight junction protein genes in chicken ileum

處理TreatmentOccludinClaudin-3ZO-1NF-kBp65TLR2Ⅰ1.29±0.161.90±0.22c1.67±0.22b1.28±0.05ab1.36±0.06cⅡ1.08±0.111.10±0.084d1.02±0.11c1.01±0.11b1.01±0.07cⅢ1.01±0.133.03±0.23b1.29±0.03bc1.46±0.13a1.12±0.20cⅣ1.06±0.093.61±0.18a2.20±0.10a1.47±0.63a3.83±0.42aⅤ1.03±0.123.07±0.12b2.19±0.23a1.22±0.16ab2.13±0.04b

3 討論

良好的腸道形態(tài)對肉雞健康至關(guān)重要，如小腸絨毛密度、長度和微絨毛高度會影響小腸的吸收面積，腸絨毛表面光滑有利于防御微生物入侵、發(fā)揮物理屏障功能、提高健康水平[11]。本實(shí)驗(yàn)中添加2%滅菌發(fā)酵飼料組的回腸絨毛密度與添加1%發(fā)酵飼料組的回腸絨毛相似且都有提高，但低于添加2%發(fā)酵飼料組和正對照組。但其微絨毛高度相對增高，從而擴(kuò)大了小腸面積，這恰好與正對照組的結(jié)果相反。表明滅菌和未滅菌發(fā)酵飼料都能改善腸道形態(tài)，發(fā)酵飼料中的益生菌和發(fā)酵產(chǎn)物都產(chǎn)生了有益影響。但滅菌發(fā)酵飼料對腸道形態(tài)的改善程度不如未滅菌發(fā)酵飼料，因?yàn)橐嫔芨纳颇c道形態(tài)[12]，所以可能是滅菌后活菌數(shù)降低，降低了對腸絨毛密度增加的刺激。但是其效果仍優(yōu)于負(fù)對照組，推測原因可能是發(fā)酵產(chǎn)物中的有機(jī)酸、氨基酸、小肽等代謝產(chǎn)物改善了腸內(nèi)營養(yǎng)狀態(tài)，有利于微絨毛的生長發(fā)育。

內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細(xì)菌在代謝過程或死亡后從細(xì)胞壁中釋放出來的類脂多糖體(脂多糖)。內(nèi)毒素會隨腸道細(xì)菌的移位進(jìn)入血液循環(huán)而引起一系列病理改變，因此，血清內(nèi)毒素能間接反映腸黏膜的屏障功能[13]。本實(shí)驗(yàn)中，負(fù)對照組和實(shí)驗(yàn)組Ⅳ、Ⅴ的血清內(nèi)毒素濃度均有降低趨勢，但差異不顯著，在一定程度上表明發(fā)酵飼料和滅菌發(fā)酵飼料降低了腸道通透性，提高了肉雞腸道屏障功能。此結(jié)果與腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的改善相對應(yīng)。

腸粘膜上皮細(xì)胞之間的緊密連接是腸道物理屏障的主要結(jié)構(gòu)，緊密連接的通透性決定著整個腸上皮細(xì)胞的屏障功能[14]。益生菌可以提高緊密連接蛋白的表達(dá)量。Patel等[15]研究發(fā)現(xiàn)在新生小鼠日糧中添加益生菌可以促進(jìn)claudin-3的表達(dá)，同時促進(jìn)新生小鼠腸道屏障功能的發(fā)育成熟；Resta-Lenert等[16]研究發(fā)現(xiàn)嗜熱乳酸鏈球菌(Streptococcusthermophilus)和嗜酸乳桿菌能夠激活磷酸肌醇3激酶(PI3K)信號分子通路、p38、ERK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)，提高ZO-1和Occludin蛋白磷酸化表達(dá)量，增強(qiáng)HT-29細(xì)胞和Caco-2細(xì)胞的屏障功能?；蛩降难芯勘砻?，植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)MB452能夠改變腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白相關(guān)基因表達(dá)量，如編碼細(xì)胞骨架和Occludin的基因[17]。在本實(shí)驗(yàn)中，日糧中添加2%發(fā)酵飼料和2%滅菌發(fā)酵飼料與添加抗生素和未發(fā)酵飼料相比，回腸黏膜中claudin-3、ZO-1、TLR2的表達(dá)量均顯著上調(diào)，添加2%發(fā)酵飼料的肉雞回腸黏膜NF-kBp65表達(dá)量顯著高于負(fù)對照組，且與其他組無顯著差別，因此，發(fā)酵飼料組的結(jié)果可能是因?yàn)橐嫔淖饔?。本?shí)驗(yàn)中，滅菌的發(fā)酵飼料也提高了緊密連接蛋白表達(dá)量，可能是益生菌的細(xì)胞壁成分或發(fā)酵代謝產(chǎn)物的影響。研究表明，細(xì)菌細(xì)胞壁中肽聚糖的水解產(chǎn)物胞壁酰二肽(MDP)可通過增強(qiáng)TLR2-MyD88-Nf-kB信號通路增強(qiáng)TJ蛋白表達(dá)[5]，細(xì)菌分泌的磷壁酸也參與TJ調(diào)節(jié)[6]。此外，細(xì)菌的一些代謝產(chǎn)物也參與TJ的調(diào)節(jié)，如某些乳桿菌的胞外蛋白和丁酸[7-8]、多聚磷酸鹽[9]、多種細(xì)菌產(chǎn)生的吲哚[10]。

綜上所述，益生菌發(fā)酵產(chǎn)物能在一定程度上降低血清內(nèi)毒素水平，改善腸道形態(tài)，上調(diào)腸道緊密連接蛋白表達(dá)量，表明益生菌發(fā)酵產(chǎn)物能改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)和提高腸道機(jī)械屏障功能。但是詳細(xì)機(jī)制尚不完全清楚，需要進(jìn)一步探究。

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(責(zé)任編輯 盧福莊)

Effects of fermentation metabolite produced by probiotics on intestinal morphology and intestinal barrier function in chicken

ZHANG Jun1， ZHU Jian-jin1， LIU Jiang-ying1， JIANG Rong2， CHENG Xiang-rong1

(1.SchoolofFoodScienceandTechnology，JiangnanUniversity，Wuxi214122，China; 2.ShanghaiSanzhiBiotechnologyCo.Ltd.，Shanghai201706，China)

In order to evaluate the effects of fermentation metabolite produced by probiotics on intestinal morphology and intestinal barrier function in chicken， 495 1-d-old broilers were randomly allotted into 5 dietary treatments， namely: Treatment Ⅰ， positive control， basal diet + bacitracin zinc 80 mg·kg-1feed + colistin sulfate 20 mg·kg-1feed + 2% unfermented feed; Treatment Ⅱ， negative control， basal diet + 2% unfermented feed; Treatment Ⅲ， basal diet + 1.0% fermented feed + 1% unfermented feed; Treatment Ⅳ， basal diet + 2.0% fermented feed; Treatment Ⅴ， basal diet + 2.0% sterilized fermented feed. The serum was collected for lipopolysaccharide (LPS) test， ileum was removed for observation of intestinal morphology by scanning electron microscopy (SEM)， and the intestinal mucosa was scraped from the ileum by glass slide to determine the expression of intestinal tight junction. It was shown that the levels of serum lipopolysaccharide in treatment Ⅰ， Ⅳ， Ⅴ tended to be decreased significantly. The treatment Ⅴ and Ⅲ had higher and smoother intestinal villus in ileum than treatment Ⅱ， and the length of microvilli in these 2 treatments were significantly higher than that in treatment Ⅰ and Ⅳ， but villi density was less than that of treatment Ⅰ and Ⅳ. The expression of intestinal tight junction protein in treatment Ⅴ and Ⅳ were up-regulated significantly. These results suggested that not only probiotics but also fermentation metabolite played role in intestinal barrier function.

fermentation metabolite; broilers; intestinal morphology; tight junction protein

http://www.zjnyxb.cn

10.3969/j.issn.1004-1524.2016.10.05

2016-02-19

江蘇省自然科學(xué)基金(青年項(xiàng)目)(BK20140147)

張俊(1990—)，女，河南南陽人，碩士研究生，研究方向?yàn)闋I養(yǎng)代謝與調(diào)控。E-mail: 18206180298@163.com

S831；Q939.9

A

1004-1524(2016)10-1657-06

浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)ActaAgriculturaeZhejiangensis， 2016，28(10): 1657-1662

張俊，朱建津，劉江英，等. 益生菌發(fā)酵產(chǎn)物對肉雞腸道形態(tài)和腸道屏障功能的影響[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2016，28(10): 1657-1662.