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    水飛薊素對(duì)腎間質(zhì)纖維化大鼠AngⅡ、NF-κB表達(dá)的影響

    2016-11-22 07:57:44韓子明信陽(yáng)市中心醫(yī)院兒科信陽(yáng)464000新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院兒科新鄉(xiāng)45300
    北方藥學(xué) 2016年11期
    關(guān)鍵詞:薊素水飛小管

    王 鵬 韓子明(.信陽(yáng)市中心醫(yī)院兒科信陽(yáng)464000;.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院兒科新鄉(xiāng)45300)

    水飛薊素對(duì)腎間質(zhì)纖維化大鼠AngⅡ、NF-κB表達(dá)的影響

    王鵬1韓子明2(1.信陽(yáng)市中心醫(yī)院兒科信陽(yáng)464000;2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院兒科新鄉(xiāng)453100)

    目的:探討水飛薊素對(duì)腎小管間質(zhì)纖維化大鼠AngⅡ、NF-κB表達(dá)的影響。方法:隨機(jī)將13周齡SD大鼠56只分為假手術(shù)組8只、梗阻組24只和水飛薊素治療組24只。采用左側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)造成腎間質(zhì)纖維化模型,分為梗阻組和治療組,分別于實(shí)驗(yàn)d7、d14、d21對(duì)梗阻組和治療組各處死大鼠8只,假手術(shù)組于d21處死全部大鼠,觀察術(shù)側(cè)腎組織病理變化并應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)腎組織AngⅡ及NF-κBp65的表達(dá)。結(jié)果:腎小管間質(zhì)評(píng)分顯示水飛薊素在各觀察時(shí)間點(diǎn)能顯著改善腎組織纖維化,降低腎間質(zhì)評(píng)分;免疫組化提示水飛薊素顯著下調(diào)AngⅡ及NF-κBp65各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)。結(jié)論:水飛薊素可能是通過(guò)下調(diào)AngⅡ、NF-κBp65的表達(dá)從而起到對(duì)腎臟的保護(hù)作用。

    水飛薊素 腎間質(zhì)纖維化 AngⅡNF-κB

    腎小管間質(zhì)纖維化(TIF)是各種病因?qū)е碌哪I臟疾病進(jìn)展至終末期腎病的共同病理途徑及最終結(jié)局[1]。在腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)程中,主要有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(主要為巨噬細(xì)胞)、肌成纖維細(xì)胞增殖、腎小管細(xì)胞凋亡、腎小管上皮-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化以及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)過(guò)度積聚等不斷呈現(xiàn)出來(lái)[2]。水飛薊素作為一種有效防治肝臟纖維化的傳統(tǒng)藥物,根據(jù)中醫(yī)異病同治理論,我們建立了大鼠腎間質(zhì)纖維化模型,觀察水飛薊素抗腎纖維化作用及其對(duì)AngⅡ、NF-κB表達(dá)的影響。

    1 材料與方法

    1.1腎小管間質(zhì)損傷評(píng)定:光鏡下(×200)采用雙盲法對(duì)每張HE染色的組織切片行腎小管間質(zhì)損傷并評(píng)分:隨機(jī)選取10個(gè)不重疊視野,采用IDA-2000高清晰度數(shù)碼顯微圖像分析系統(tǒng)測(cè)定小管間質(zhì)纖維化面積與同視野小管間質(zhì)總面積的百分比,腎間質(zhì)纖維化病理過(guò)程主要表現(xiàn)為①程度不同的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);②腎小管腫脹或萎縮;③間質(zhì)纖維組織形成3個(gè)變量判定,每個(gè)變量為0~3分,每張組織切片腎間質(zhì)損傷評(píng)分為0~9分。(0分為正常,病變無(wú);1分為輕微損傷,病變范圍<25%;2分為中度損傷,25%≤病變范圍<50%;3分為重度損傷,病變范圍≥50%)。

    1.2統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS11.5軟件,組間差異采用單因素方差分析(one-way ANOVA),組間兩兩比較用LSD檢驗(yàn)法,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    2 結(jié)果

    光鏡下假手術(shù)組大鼠腎組織無(wú)明顯變化,腎小球、近端小管、遠(yuǎn)端小管的大小形態(tài)與正常腎組織一樣,間質(zhì)無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、小管腫脹及纖維組織形成。梗阻組與治療組術(shù)后d7,可見(jiàn)少量巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、小管上皮細(xì)胞之間連接疏松、細(xì)胞變性、水腫,腎小管間質(zhì)出現(xiàn)成纖維細(xì)胞增生聚集,腎小管管腔輕度擴(kuò)張及部分呈現(xiàn)萎縮,腎間質(zhì)面積稍增大。術(shù)后14d腎小管間質(zhì)呈現(xiàn)大量巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),成纖維細(xì)胞增生明顯,大量上皮細(xì)胞出現(xiàn)腫脹及空泡變性,部分腎小管因嚴(yán)重破壞而消失,部分腎小管及集合管擴(kuò)張成囊腔狀,小管間質(zhì)增寬明顯。術(shù)后21d,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較前稍減少,小管上皮細(xì)胞變性進(jìn)一步加重,幾乎全部小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)萎縮、壞死脫落,殘余的腎小管也在被逐漸破壞,腎小管間質(zhì)面積增寬顯著,皮髓質(zhì)均變薄、失去功能。同一觀察點(diǎn),腎間質(zhì)損傷評(píng)分治療組明顯低于梗阻組(P<0.05),梗阻組隨著造模時(shí)間延長(zhǎng),與假手術(shù)組相比,腎間質(zhì)損傷評(píng)分逐漸加重(P<0.01);見(jiàn)表1。

    表1 腎小管間質(zhì)損傷評(píng)分各組之間比較(±s)

    表1 腎小管間質(zhì)損傷評(píng)分各組之間比較(±s)

    ★P<0.01與假手術(shù)組比較;◆P<0.05治療組與梗阻組比較;▲P<0.05梗阻組與治療組后一時(shí)間點(diǎn)與前一時(shí)間點(diǎn)比較。

    ?

    3 討論

    本試驗(yàn)結(jié)果顯示NF-κBp65的表達(dá)與腎間質(zhì)纖維化損傷評(píng)分呈正相關(guān),梗阻組腎小管上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞NF-κBp65表達(dá)無(wú)論染色強(qiáng)度還是染色面積均較假手術(shù)組增強(qiáng),支持NF-κBp65參與腎纖維化的發(fā)生過(guò)程。NF-κBp65的表達(dá)治療組與梗阻組相比,每一時(shí)間點(diǎn)均減少,差異顯著,推測(cè)可能是水飛薊素對(duì)腎組織NF-κB產(chǎn)生和活性的干預(yù)作用有關(guān)。單側(cè)輸尿管梗阻大鼠用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑處理后,發(fā)現(xiàn)腎皮質(zhì)中激活的NF-κB活性有所下降,這可能與AngII生成的減少抑制了的NF-κB產(chǎn)生與活性有關(guān)。由此可以推測(cè)出AngII與NF-κB在腎間質(zhì)纖維化的演變進(jìn)程中扮演著重要的角色,且具有協(xié)同作用,阻斷一種物質(zhì)的生成或共同阻斷都能起到一定的抗纖維化作用。水飛薊素系指從菊科植物水飛薊的種子中提取的一類二氫黃酮醇與苯丙素衍生物縮合而成的黃酮木脂素類成分,主要含有水飛薊寧、水飛薊賓。據(jù)最新研究[3],清除自由基、抗炎、免疫調(diào)節(jié)和抗肝纖維化及保護(hù)肝細(xì)胞膜、促進(jìn)損傷肝細(xì)胞合成結(jié)構(gòu)蛋白等是這類藥物的基本藥理活性。本實(shí)驗(yàn)觀察到了水飛薊素對(duì)腎間質(zhì)纖維化大鼠腎組織的保護(hù)作用,據(jù)此推測(cè)可能是通過(guò)抑制腎組織AngⅡ、NF-κB的表達(dá)進(jìn)而延緩TIF進(jìn)展,這可能是水飛薊素“多途徑、多靶點(diǎn)”抗腎間質(zhì)纖維化的作用之一。

    [1]TherrienFJ,AgharaziiM,LebelM,et al.Neutralization of tumor necrosis factor-alpha reduces renal fibrosis and hypertension in rats with renal failure[J].Am J Nephrol,2012,36(2):151-161.

    [2]López-GuisaJM,RassaAC,CaiX,et al.Vitronectin accumulates in the interstitium but minimally impacts fibrogenesis in experimental chronic kidney disease[J].Am J Physiol Renal Physiol,2011,300(5):1244-1254.

    [3]馬星海.水飛薊化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2015,11(19):62-65.

    R 285.5

    B

    1672-8351(2016)11-0129-01

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