血清 CA125、HE4及 MMP-9聯合檢測在卵巢癌早期診斷中的臨床價值研究

黃雪梅，趙詠梅，蒲澤晏，余恒勇

（1.遂寧市中心醫(yī)院檢驗科，四川遂寧629000；2.重慶市黔江區(qū)中醫(yī)院檢驗科，重慶400032）

血清 CA125、HE4及 MMP-9聯合檢測在卵巢癌早期診斷中的臨床價值研究

黃雪梅1，趙詠梅1，蒲澤晏1，余恒勇2

（1.遂寧市中心醫(yī)院檢驗科，四川遂寧629000；2.重慶市黔江區(qū)中醫(yī)院檢驗科，重慶400032）

目的 探討血清糖類抗原125（CA125）、人附睪分泌蛋白4（HE4）及基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）三者聯合檢測在卵巢癌早期診斷中的價值。方法 選取2014年2月至2016年2月間我院收治的60例卵巢癌患者作為觀察組，并選取我院同一時期收治的45例良性卵巢腫瘤患者作為卵巢良性腫瘤組，以及45例健康志愿者作為健康對照組。采用電化學發(fā)光法（ECLIA）檢測三組的血清CA125水平，并采用酶聯免疫法（ELISA）檢測其血清HE4及MMP-9水平，并對比三組上述指標的檢測結果。結果 觀察組血清CA125、HE4及MMP-9水平均顯著高于卵巢良性腫瘤組與健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；觀察組中不同分期患者的上述血清標志物水平組間比較差異有統計學意義（P＜0.05）；且觀察組上述各標志物檢測的陽性率均明顯高于其他兩組，差異有統計學意義（P＜0.05）；并且在卵巢癌的診斷中，血清CA125、HE4及MMP-9三者聯合檢測的靈敏度為93.3%，明顯優(yōu)于各指標單獨檢測的靈敏度63.3%、83.3%、76.7%，同時三者聯合檢測的特異度為96.7%明顯優(yōu)于各指標單獨檢測的特異度74.4%、91.1%、81.1%，差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論單獨檢測患者血清CA125、HE4及MMP-9水平在卵巢癌的早期診斷中具有一定的價值，而三指標聯合檢測明顯提高了檢測的靈敏度及特異度，在卵巢癌早期診斷中的價值更高。

糖類抗原125； 人附睪分泌蛋白4； 基質金屬蛋白酶-9； 卵巢癌； 電化學發(fā)光法； 酶聯免疫法

卵巢癌作為女性生殖系統中最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居女性腫瘤發(fā)病率的第三位，而死亡率居女性惡性腫瘤死亡率之首，且近年來的發(fā)病率不斷上漲，嚴重威脅廣大女性的生命健康安全［1］。相關研究統計顯示，在癌癥的早期及時給予患者手術或介入治療，其5年生存率可達90%，而在癌癥晚期因癌細胞已發(fā)生擴散和轉移，患者的5年生存率低于30%［2］。此外，因處卵巢癌早期的患者臨床癥狀隱匿，70%左右的患者確診時已屬癌癥晚期，錯過了最佳手術及治療時機［3-4］。因而尋找一種有效的卵巢癌早期診斷手段已成為目前臨床關注的重點。本研究通過檢測卵巢癌患者、良性卵巢腫瘤患者與健康志愿者的血清CA125、HE4及MMP-9表達水平，探討CA125、HE4及MMP-9單獨及聯合檢測在卵巢癌早期診斷中的價值。

材料和方法

1 一般資料

入選我院于2014年2月至2016年2月間診治的卵巢癌患者60例作為觀察組，其中年齡在20～64歲，平均45.3±9.6歲；TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期共19例，Ⅲ、Ⅳ期共41例；組織學分類：低分化腺癌6例，子宮內膜樣癌10例，黏液性囊腺癌15例，漿液性囊腺癌29例。并將我院同時期收治的良性卵巢腫瘤患者45例當作卵巢良性腫瘤組，其中年齡在19～65歲，平均46.2±10.3歲；組織學分類：卵巢纖維瘤3例，成熟畸胎瘤14例，黏液性囊腺瘤11例，漿液性囊腺瘤17例。上述兩組卵巢癌及良性卵巢腫瘤患者均經術后病理學檢查進行確診，且入選患者均為初發(fā)初治，無既往手術史；同時排除合并其他惡性腫瘤、全身性感染及嚴重心肝腎損傷患者。此外，另入選同期進行體檢檢查合格的健康婦女45例作為健康對照組，年齡在21～66歲，平均47.5±10.1歲。同時其肝腎功能均正常、無心肺腎等重要器官疾病，同時婦科檢查無異常，無既往卵巢疾病史。上述三組入選者的年齡比較差異無統計學意義（P＞0.05），組間可比。同時該研究在患者知情且同意的前提下進行。

2 方法

分別抽取三組入選者的清晨空腹靜脈血5mL，4℃低溫離心分離獲得其血清，-70℃凍存待測。其中血清CA125水平采用ECLIA法進行檢測，相應的檢測試劑盒購自德國羅氏公司；而血清HE4及MMP-9水平采用ELISA法進行檢測，相應的檢測試劑盒分別購自瑞士康乃格公司及美國R&D公司，上述試驗步驟均由專人嚴格按照試劑盒及相關儀器說明書進行。分別 以CA125＞35U/mL、HE4＞150pmol/L、MMP-9＞168ng/mL［5］為陽性計算三組的陽性率。

3 統計學處理

研究數據均采用SPSS19.0軟件進行分析，符合正態(tài)分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，不符合正態(tài)分布的計量資料則采用中位數表示，采用t檢驗或Fisher's精確檢驗；計數資料以率表示，采用卡方檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

結果

1 三組血清標志物水平

觀察組患者的血清各標志物水平均明顯高于良性對照組與健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；同時卵巢良性腫瘤組CA125及MMP-9水平顯著高于健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；而卵巢良性腫瘤組與健康對照組HE4水平組間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1　三組血清CA125、HE4及MMP-9表達水平比較（±s）

表1　三組血清CA125、HE4及MMP-9表達水平比較（±s）

注：與卵巢良性腫瘤組相比，*P＜0.05；與健康對照組相比，#P＜0.05

組別例數CA125（U/mL）HE4（pmol/L）MMP-9（ng/mL）觀察組60292.74*#（156.49～428.99）195.72*#（132.89～258.55）204.63*#（138.62～270.64）卵巢良性腫瘤組4558.60#（40.13～77.07）27.15#（19.81～34.49）85.32#（50.49～120.15）健康對照組4514.39（7.87～20.91）25.56（18.65～32.47）41.05（21.53～60.57）

2 卵巢癌不同臨床分期患者血清標志物水平

Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌患者血清CA125、HE4及MMP-9水平均明顯高于Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表。

表2　卵巢癌不同臨床分期患者血清CA125、HE4及MMP-9水平比較（±s）

表2　卵巢癌不同臨床分期患者血清CA125、HE4及MMP-9水平比較（±s）

注：與Ⅰ、Ⅱ期相比，*P＜0.05

TNM分期例數CA125（U/mL）HE4（pmol/L）MMP-9（ng/mL）Ⅲ、Ⅳ期41405.29*（221.68～588.9）241.04*（167.52～314.56）283.65*（198.51～368.79）Ⅰ、Ⅱ期19157.43（96.86～218.00）167.37（113.11～221.63）116.78（79.25～154.31）

3 三組血清標志物檢測結果陽性率

觀察組患者CA125、HE4及MMP-9檢測的陽性率分別為63.3%、83.3%、76.7%；卵巢良性腫瘤組上述各指標檢測的陽性率分別為37.8%、11.1%、26.7%；健康對照組各指標檢測的陽性率分別為13.3%、6.7%、11.1%。觀察組患者CA125、HE4及MMP-9檢測的陽性率顯著高于卵巢良性腫瘤組與健康對照組檢測的陽性率，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3　三組血清標志物CA125、HE4及MMP-9檢測的陽性率比較［n（%）］

4 三種血清標志物單獨及聯合檢測的價值

在卵巢癌的診斷中，CA125檢測的靈敏度、特異度分別為63.3%、74.4%；HE4檢測的靈敏度、特異度分別為83.3%、91.1%；MMP-9檢測的靈敏度、特異度分別為76.7%、81.1%。此外，分別通過并聯實驗提升上述三種血清標志物聯合檢測的靈敏度，通過串聯實驗提升聯合檢測特異度。即對觀察組患者血清CA125、HE4、MMP-9這三種標志物進行檢測時，患者任意一種標志物檢測陽性則視作聯合檢測陽性，進而觀察組陽性患者數除以觀察組患者總數乘以100%為聯合檢測的靈敏度；而對良性對照組和健康對照組血清CA125、HE4、MMP-9這三種標志物進行檢測時，三種標志物同時檢測出陽性才視作聯合檢測陽性，進而上述兩組檢測陰性人數除以兩組總人數乘以100%為聯合檢測的特異度。三指標聯合檢測的靈敏度及特異度分別為93.3%、96.7%，相比于各指標單獨檢測來說均有所提高，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4　三種血清標志物單獨及聯合檢測的靈敏度與特異度比較（%）

討論

卵巢癌作為婦科最常見的一種惡性腫瘤，具有癥狀隱匿，發(fā)展迅速，復發(fā)及死亡率高等特點，近年來其發(fā)病率逐年上升，而病死率已居女性惡性腫瘤病死率之首［6］。全球每年卵巢癌患者的發(fā)病人數約為20萬例，而預計每年死亡患者人數達12萬人左右［7］。導致卵巢癌患者高死亡率的原因主要在于患者未能在癌癥的早期得到及時有效的診治，絕大多數患者在確診時已屬癌癥晚期，從而錯失了最佳的治療時機。因此找到一種可靠的卵巢癌診斷手段，能夠及早發(fā)現并對患者進行及時的治療，從而提高其生存率，成為目前臨床研究的重點之一。

血清腫瘤標志物檢測由于其操作簡單、創(chuàng)傷小、結果及時可靠，能夠較為準確的反應腫瘤的存在與否，因此在卵巢癌早期診斷方面發(fā)展迅速。CA125是一種最初提取于卵巢癌細胞系的抗原，屬于非特異性腫瘤標志物，其在卵巢癌、肺癌、子宮內膜癌等多種癌癥患者中的表達水平均異常增高，成為目前卵巢癌臨床診斷的常用腫瘤標志物之一，但其存在著靈敏度不足及特異性低的缺陷［8］。HE4最早發(fā)現于附睪遠端的上皮細胞中，屬于乳清酸性4-二硫化中心蛋白家族，最初被認為是與精子成熟相關的蛋白酶抑制劑，而后發(fā)現其在正常的卵巢及人體組織中低表達或不表達，而在卵巢癌組織中大量表達［9］。此外，有研究表明，單一的HE4檢測在卵巢癌診斷中的靈敏度及特異性分別可達70%、95%左右，特別是在卵巢癌I期患者診斷中具有較高的靈敏度及特異度，因此在卵巢癌的早期診斷中具有極大的潛在價值［10］。MMP-9作為基質金屬蛋白酶家族的成員之一，可以水解IV、V、VII、X型膠原蛋白、彈性蛋白等多種蛋白，有研究表明其與卵巢癌、胃癌、肺癌、結腸癌、膀胱癌等多種惡性腫瘤的發(fā)展及侵襲密切相關［11-12］。此外，隨著卵巢癌惡性程度的增加MMP-9表達水平也相應的增加，同時其活性也會相應增強，并有研究顯示其在卵巢癌的診斷中具有良好的應用價值［7，13］。本研究通過檢測卵巢癌患者、良性卵巢腫瘤患者與健康志愿者的血清CA125、HE4及 MMP-9表達水平，探討CA125、HE4及MMP-9單獨及三者聯合檢測在卵巢癌早期診斷中的價值。

研究結果顯示，觀察組血清CA125、HE4及MMP-9水平均顯著低于卵巢良性腫瘤組與健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；觀察組中不同分期患者的血清CA125、HE4及MMP-9水平組間比較差異有統計學意義（P＜0.05）；觀察組上述各標志物檢測的陽性率均顯著高于卵巢良性腫瘤組與健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。該檢測結果與已有的研究結果［14-15］保持一致，均顯示出良好的梯度性。研究結果說明，卵巢癌的發(fā)生會導致患者血清CA125、HE4及MMP-9表達水平相應的提高，并且癌癥分期越高的患者其血清標志物水平也越高，因而說明血清CA125、HE4及MMP-9檢測在卵巢癌的早期診斷中具有一定的價值。并且在卵巢癌的診斷中，血清 CA125、HE4及 MMP-9三者聯合檢測的靈敏度為93.3%明顯優(yōu)于各指標單獨檢測的靈敏度63.3%、83.3%、76.7%，同時三者聯合檢測的特異度為96.7%明顯優(yōu)于各指標單獨檢測的特異度74.4%、91.1%、81.1%，差異均有統計學意義（P＜0.05）。說明CA125、HE4及MMP-9三者聯合檢測能夠明顯提高診斷的靈敏度及特異度，增加卵巢癌的檢測率，即聯合檢測對卵巢癌早期診斷價值更高。

綜上所述，血清CA125、HE4及MMP-9在卵巢癌的早期診斷中均具有一定的價值，而CA125、HE4及MMP-9三者聯合檢測明顯提高了檢測的靈敏度及特異度，在卵巢癌的早期診斷中具有更高的臨床價值，值得推廣使用。

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（潘子昂編輯）

Clinical Value of Combined Detection of Serum CA125，HE4 and MMP-9 in Early Diagnosis of Ovarian Cancer

HUANG Xue-mei，ZHAO Yong-mei，PU Ze-yan，YU Heng-yong
（Department of Clinical Laboratory，Suining Central Hospital；Suining 629000，China）

Objective To investigate the value of combined detection of serum carbohydrate antigen 125（CA125），human epididymis secretory protein 4（HE4）and matrix metalloproteinase-9（MMP-9）in the early diagnosis of ovarian cancer.Methods We enrolled 60 cases of ovarian cancer patients admitted in our department between February 2014 to February 2016 as the observation group，and selected 45 cases of benign ovarian tumor patients as the disease control group，and 45 cases of healthy volunteers as a healthy control group.The serum CA125 levels of all three groups were detected by electrochemical luminescence（ECLIA），and the serum levels of HE4 and MMP-9 were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）.The results of three indexes were compared among the three groups.Results The serum levels of CA125，HE4 and MMP-9 in observation group were significantly higher than those of the control group and the healthy control group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.The serum marker levels in observation group at different stages were statistically different（P＜0.05）.Each marker's positive rate in the observed group was significantly higher than that in two control groups，the differences were statistically significant（P＜0.05）.In the diagnosis of ovarian cancer，the sensitivity of combined detection of serum CA125，HE4 and MMP-9 was 93.3%which was higher than each marker detected individually，63.3%，83.3%，76.7%for CA125，HE4 and MMP-9 respectively.The specificity of combined detection was 96.7%，which was higher than each marker detected individually，74.4%，91.1%，81.1%for CA125，HE4 and MMP-9 respectively，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion The separate detection of serum CA125，HE4 and MMP-9 levels has a certain value in the early diagnosis ofovarian cancer.The combined detection of three indexes can significantly improve the detection sensitivity and specificity，which provides a valuable tool in the early diagnosis of ovarian cancer.

CA125； HE4； MMP-9； Ovarian cancer； Electrochemical luminescence； Enzyme linked immunosorbent assay

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.09.017

2016-06-02；

2016-08-18

余恒勇。E-mail：717166765@qq.com