人參皂甙Rg1對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)損傷后修復(fù)的劑量效應(yīng)

索朧朧， 蔡志平， 楊占君， 霍東升

(1.包頭醫(yī)學(xué)院2015級(jí)研究生，內(nèi)蒙古包頭 014060；2.包頭醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室)

?

人參皂甙Rg1對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)損傷后修復(fù)的劑量效應(yīng)

索朧朧1， 蔡志平2， 楊占君2， 霍東升2

(1.包頭醫(yī)學(xué)院2015級(jí)研究生，內(nèi)蒙古包頭 014060；2.包頭醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室)

目的：觀察人參皂甙Rg1對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)損傷后的修復(fù)作用，尋求最佳劑量。方法：健康成年SD大鼠90只，采用離斷左側(cè)坐骨神經(jīng)的方法建立周圍神經(jīng)損傷模型，建模后隨機(jī)分為6組(實(shí)驗(yàn)組2 mg組、4 mg組、8 mg組、12 mg組，甲鈷胺組和空白對(duì)照組)，每組15只。實(shí)驗(yàn)組大鼠腹腔注射人參皂甙Rg1 2 mg/kg、4 mg/kg、8 mg/kg和12 mg/kg，甲鈷胺組大鼠給予甲鈷胺(100 μg/kg)，空白對(duì)照組給予等量生理鹽水。給藥8周后行坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(sciatic functional index,SFI)和神經(jīng)傳導(dǎo)速度檢測(cè)。結(jié)果：8周后各實(shí)驗(yàn)組和甲鈷胺組大鼠SFI、神經(jīng)傳導(dǎo)速度均優(yōu)于空白對(duì)照組(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)各組之間比較，8 mg組優(yōu)于其他各劑量組(P<0.05)。結(jié)論：人參皂甙Rg1接近8 mg/kg劑量治療大鼠坐骨神經(jīng)損傷的作用較好。

人參皂甙；坐骨神經(jīng)；神經(jīng)損傷；修復(fù)

周圍神經(jīng)損傷在臨床上時(shí)有發(fā)生且預(yù)后較差。有研究顯示人參皂甙Rg1對(duì)神經(jīng)損傷有一定的保護(hù)作用[1]。我們?cè)谇捌谘芯恐幸舶l(fā)現(xiàn)人參皂甙Rg1對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)離斷損傷后的神經(jīng)肌肉恢復(fù)作用效果顯著[2]。本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)給予動(dòng)物模型不同劑量人參皂甙Rg1，觀察其對(duì)神經(jīng)再生和功能修復(fù)的影響，以便尋求治療最佳有效劑量。為人參皂甙單體Rg1開發(fā)用于臨床治療神經(jīng)損傷的藥物提供實(shí)驗(yàn)研究資料。

1 對(duì)象與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑及動(dòng)物 選用兩月齡成年SD大鼠(購(gòu)自內(nèi)蒙古大學(xué)，批號(hào)：XKSC蒙2002-0001)，體重(200±10)g，共90只，建立模型之前先適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)動(dòng)物的處置符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用規(guī)定。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 坐骨神經(jīng)離斷損傷模型建立 使用10 %水合氯醛(3 mL/kg)經(jīng)腹腔注射麻醉，鼠板俯臥固定，脫毛、碘伏消毒，無菌條件下左下肢股后部縱行切口1.5 cm，沿肌間隙分離肌層充分顯露，在放大8倍的手術(shù)顯微鏡下游離坐骨神經(jīng)，在距離梨狀肌下緣0.8 cm處將坐骨神經(jīng)完全離斷，隨即用10-0的無損傷縫合線以神經(jīng)外膜表面的血管走行為標(biāo)記縫合神經(jīng)外膜4～6針(以無神經(jīng)乳頭外露為標(biāo)準(zhǔn))，然后3-0縫合線逐層縫合切口。術(shù)后觀察至動(dòng)物清醒后，分籠飼養(yǎng)，定時(shí)鼠籠消毒，勤換墊料以防止足底潰瘍發(fā)生。

1.2.2 術(shù)后分組與處理 用生理鹽水將人參皂甙Rg1配制成藥液，濃度為0.5 mg/mL，放入4℃的冰箱內(nèi)備用。將術(shù)后大鼠隨機(jī)分成6組，每組15只。分組情況：Rg1劑量分別為2 mg組、4 mg組、8 mg組和12 mg組為實(shí)驗(yàn)組，分別經(jīng)腹腔注射已配制的人參皂甙Rg1 2 mg/kg、4 mg/kg、8 mg/kg、12 mg/kg。甲鈷胺組和空白對(duì)照組，分別以同樣的的方式注射甲鈷胺(100 μg/kg)和生理鹽水。術(shù)后24 h開始，1次/d，連續(xù)8周，各組均以左側(cè)為損傷側(cè)，右側(cè)為正常對(duì)照。

1.2.3 坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(sciatic functional index，SFI)的檢測(cè) 術(shù)后8周進(jìn)行SFI測(cè)定。參考文獻(xiàn)報(bào)道方法[3]，制做大鼠足印走行記錄箱，記錄箱為避光暗箱，由行走箱和收集箱組成。實(shí)驗(yàn)時(shí)，將各足趾蘸過墨水的大鼠放入行走箱入口，大鼠經(jīng)過行走箱進(jìn)入收集箱，在底部鋪設(shè)的白紙上留下足印。收集大鼠足印后，選實(shí)驗(yàn)側(cè)足(E)和正常側(cè)足(N)測(cè)量3個(gè)變量：從足跟到足尖的距離作為足印長(zhǎng)度(podogram length，PL)、從第1～5趾的距離作為大鼠足趾寬度(width between the first and fifth toes,TW)、從第2～4趾的距離作為中間足趾距離(distance between intermediate toes or intermediary toe spread,ITS)，精確測(cè)量到毫米。計(jì)算SFI時(shí)把以上各變量帶入Bain公式。SFI=-38.3(EPL-NPL)/NPL+109.5(ETS-NTS)/NTS+13.3(EITS-NITS)/NITS-8.8。SFI以-100代表神經(jīng)完全離斷，-11～-100表示部分神經(jīng)功能恢復(fù)，0～-11表示神經(jīng)功能完全正常。

1.2.4 神經(jīng)傳導(dǎo)速度的檢測(cè) 記錄足印后經(jīng)10 %水合氯醛3 mL/kg腹腔注射重新麻醉，按原切口切開暴露坐骨神經(jīng)縫合口及近端。采用成都泰盟科技有限公司BL-420F電生理儀檢測(cè)。刺激電極置于縫合處的近端,記錄電極置于縫合處的遠(yuǎn)端，兩電極間距離固定。方波、恒壓3.0 V刺激，波寬0.1 ms，10 Hz，記錄運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(the motor nerve conduction velocities，MNCV)。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理，結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)方法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SFI的變化 術(shù)后8周進(jìn)行蹤足分析和SFI計(jì)算，結(jié)果顯示人參皂甙2 mg組、4 mg組、8 mg組、12 mg組，甲鈷胺組絕對(duì)值小于空白對(duì)照組(P<0.05)，8 mg組絕對(duì)值小于2 mg組、4 mg組、12 mg組和甲鈷胺組(P<0.05)。2 mg組、4 mg組、12 mg組和甲鈷胺組組間比較無差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2 MNCV的變化 術(shù)后8周測(cè)定坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位波幅并計(jì)算MNCV，單位是m/s，結(jié)果顯示2 mg組、4 mg組、8 mg組、12 mg組，甲鈷胺組均高于空白對(duì)照組(P<0.05)，8 mg組高于2 mg組、4 mg組、12 mg組、甲鈷胺組(P<0.05)，而2 mg組、4 mg組、12 mg組、甲鈷胺組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 術(shù)后8周各組大鼠SFI比較

3 討論

周圍神經(jīng)損傷是臨床上一種較為常見的損傷，修復(fù)困難，致殘率高。人參皂甙Rg1是人參皂甙中最為重要的單體之一，具有廣泛的藥理學(xué)活性。筆者前期研究也發(fā)現(xiàn)人參皂甙Rg1對(duì)坐骨神經(jīng)損傷后再生與功能恢復(fù)具有促進(jìn)作用。在此研究基礎(chǔ)上本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不同劑量人參皂甙Rg1對(duì)坐骨神經(jīng)損傷的治療效果，并設(shè)立甲鈷胺組，以期找出人參皂甙Rg1治療坐骨神經(jīng)損傷的最佳劑量。陳大慶等[4]也發(fā)現(xiàn)人參皂甙Rg1對(duì)大鼠腦外傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡有保護(hù)作用，且呈劑量依賴性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示術(shù)后8周人參皂甙Rg1各劑量組的SFI和MNCV均優(yōu)于生理鹽水組，與前期結(jié)果一致，證實(shí)了人參皂甙Rg1確實(shí)能夠促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷后的再生和功能修復(fù)。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)人參皂甙8 mg/kg組與其它人參皂甙各組比較，SFI和MNCV均有顯著性差異，說明8 mg/kg的人參皂甙Rg1對(duì)促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷后再生與修復(fù)的效果最好，可能提示8 mg/kg劑量已接近人參皂甙Rg1治療坐骨神經(jīng)損傷的最佳劑量。

[1] 董峰，楊占君，蔡志平.人參皂甙對(duì)常見神經(jīng)作用機(jī)制的研究現(xiàn)狀[J].包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2013,29(5):116-118.

[2] 方欣，周朋，閆旭升，等.人參皂甙Rg1促進(jìn)大鼠坐骨神經(jīng)損傷后再生的作用[J].解剖學(xué)雜志，2013，36(1):70-73.

[3] 劉鑫，藏金月，辛娟娟，等.坐骨神經(jīng)損傷后雛菊葉龍膽的修復(fù)作用實(shí)驗(yàn)研究[J].局解手術(shù)學(xué)雜志，2014，23(2)：115-117.

[4] 陳大慶,朱烈烈,李永領(lǐng),等.人參皂甙Rg1對(duì)顱腦損傷模型大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[J]. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2010,26(1):30-31.

Study on the dose of ginsenoside Rg1 in the repairing of sciatic nerve injury in rats

SUO Longlong1, CAI Zhiping2, YANG Zhanjun2, HUO Dongsheng2

(1.PostgraduatestudentofBaotouMedicalCollege,Baotou014060,China;2.DepartmentofAnatomy,BaotouMedicalCollege,Baotou014060,China)

Objective:To study the repairing effects of ginsenoside Rg1 on rat sciatic nerve after injury and to seek the optimal dose. Methods:90 healthy adult SD rats, with left sciatic nerve apocoped as model for treatment of peripheral nerve injury, were randomly divided into 6 groups (experiment group 2 mg、4 mg、8 mg、12 mg, mecobalamine group and blank control group), 15 rats in each group. Ginsenoside Rg1 2 mg/kg,4 mg/kg, 8 mg/kg and 12 mg/kg were injected into abdominal cavity in the experiment groups. Mecobalamine (100 μg/kg) was given in the mecobalamine group and the rats in the blank control group were injected Sodium Chloride at the same dosage. The sciatic function index (SFI) and nerve conduction velocity were detected after 8 weeks administration.Results:SFI and nerve conduction velocity in the experiment groups and the mecobalamine group were better than those in the blank control group (P<0.05); SFI and nerve conduction velocity in the 8 mg group were significantly better than those in the other experiment groups (P<0.05). Conclusion:Ginsenoside Rg1 8 mg/kg is close to the optimal dose in the treatment of sciatic nerve injury.

Ginsenosides; Sciatic nerve; Nerve injury; Repair

包頭醫(yī)學(xué)院秦文斌基金(byjj201501)；包頭市醫(yī)藥衛(wèi)生基金(Wsjj2015019)

霍東升

2015-07-15)