高富紅,周德剛,高艷艷,李召斌
(國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心,河南 洛陽(yáng) 471003)
戊二醛苯扎溴銨溶液對(duì)雞新城疫病毒的殺滅效果研究
高富紅,周德剛,高艷艷,李召斌
(國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心,河南 洛陽(yáng) 471003)
考察戊二醛苯扎溴銨溶液消毒劑對(duì)新城疫病毒的殺滅效果。參考中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部《獸用消毒劑技術(shù)規(guī)范》(1992年版),采用懸浮殺滅試驗(yàn),以雞胚感染法,將其通過(guò)不同稀釋倍數(shù)(800、1600、3 200)、在不同時(shí)間段(5、10、15、30、60 min)觀察其對(duì)新城疫病毒的殺滅效果。結(jié)果:戊二醛苯扎溴銨溶液在20℃水浴中,1 600倍稀釋,作用5 min,對(duì)雞新城疫病毒的滅活率在80%以上。結(jié)論:戊二醛苯扎溴銨溶液在20℃水浴中,對(duì)雞新城疫病毒的最低有效濃度為1 600倍稀釋,該濃度對(duì)新城疫病毒的最快有效時(shí)間為5 min。
戊二醛苯扎溴銨溶液;雞新城疫病毒;殺滅效果
新城疫(ND)是由副黏病毒科禽腮腺炎病毒屬新城疫病毒引起的雞高度接觸性、急性傳染病。對(duì)養(yǎng)雞業(yè)有著巨大的威脅。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)本病的控制仍沒(méi)有完全解決,由于對(duì)雞群用藥的限制及其存在的弊端,消毒劑的應(yīng)用已成為養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)新城疫等病毒防控的有效途徑[1]。
戊二醛苯扎溴銨溶液是由洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司研制生產(chǎn)的新型復(fù)方消毒液,主要成分為戊二醛、苯扎溴銨。為了科學(xué)評(píng)價(jià)戊二醛苯扎溴銨溶液對(duì)雞新城疫病毒的定性殺滅效果,參考中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部《獸用消毒劑技術(shù)規(guī)范》(1992年版),國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心考察了其對(duì)雞新城疫病毒的定性殺滅效果試驗(yàn),現(xiàn)將試驗(yàn)報(bào)告總結(jié)如下。
毒株:雞新城疫(ND)病毒LaSota株,購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。
主要儀器:電子分析天平,生物安全柜,移液器,水浴鍋,旭升全自動(dòng)電腦孵化機(jī)。
試劑:戊二醛苯扎溴銨溶液,批號(hào)20110901,洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司生產(chǎn)。
滅菌生理鹽水:中和劑(甘氨酸0.5%+吐溫-80 4%);磷酸鹽緩沖液(0.03 mol/L,pH值為7.28)。
SPF雞胚:由普萊柯股份有限公司孵化室提供。
2.1中和劑、消毒劑及中和產(chǎn)物對(duì)雞胚的安全性試驗(yàn)將中和劑原液、800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液、800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液與中和劑作用后的中和產(chǎn)物分別接種5枚雞胚,0.1 mL/胚,以驗(yàn)證中和劑、消毒劑及中和產(chǎn)物對(duì)雞胚是否安全。
2.2中和劑和中和產(chǎn)物對(duì)新城疫病毒的影響
將中和劑與病毒作用液、中和產(chǎn)物與病毒作用液分別用PBS進(jìn)行10倍系列稀釋,分別取10-2、10-3、10-4稀釋度各接種5枚雞胚,0.1 mL/胚。將接種過(guò)的雞胚置37℃培養(yǎng),24 h以內(nèi)死亡的雞胚去掉,24 h以后死亡的雞胚及時(shí)取出,并記錄死亡情況,至120 h全部取出。取尿囊液進(jìn)行血凝(HA)試驗(yàn)。同時(shí)設(shè)病毒液對(duì)照組。以驗(yàn)證中和劑和中和產(chǎn)物對(duì)雞新城疫病毒有無(wú)影響。
2.3對(duì)新城疫病毒的定性殺滅試驗(yàn)方法[2]分別取800、1 600、3 200倍稀釋戊二醛苯扎溴銨溶液各2.5 mL,分別加入2.5 mL(含2×105EID50)雞新城疫病毒液中,混勻。
在水浴20℃±1℃的條件下,分別于5、10、15、30、60 min時(shí)取上述溶液1 mL,加入9 mL中和劑,混勻,作用10 min。立即分別取各混合液接種9日齡易感雞胚,0.1 mL/胚,各濃度組各作用時(shí)間分別接種5枚雞胚,將接種的雞胚置37℃繼續(xù)孵化120 h。同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組。
每日照蛋,棄去24 h以前死亡的雞胚,取24~120 h的死亡雞胚和活胚,逐個(gè)取尿囊液做紅細(xì)胞凝集(HA)試驗(yàn)[5],凝集價(jià)≥1∶16(微量法)者判為感染(HA陽(yáng)性)。HA陰性表示雞胚未被感染。根據(jù)感染數(shù)計(jì)算EID50并計(jì)算病毒滅活率。
2.4結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)血凝(HA)陰性表示病毒滅活,HA陽(yáng)性表示病毒未滅活,消毒劑對(duì)照組和消毒劑中和產(chǎn)物對(duì)照組應(yīng)無(wú)雞胚死亡。
以10次結(jié)果中以80%雞胚均為陰性的消毒液最低濃度為滅活NDV有效濃度,以該濃度消毒劑滅活病毒的最短時(shí)間為最快有效時(shí)間。
3.1中和劑、消毒劑及中和產(chǎn)物對(duì)雞胚的安全性試驗(yàn)結(jié)果中和劑、消毒劑和中和產(chǎn)物通過(guò)進(jìn)行雞胚尿囊腔接種,觀察120 h均未見(jiàn)雞胚死亡,表明中和劑濃度為0.5%甘氨酸+4%吐溫-80、800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液以及800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液同中和劑的作用產(chǎn)物對(duì)雞胚是安全的。
3.2中和劑及中和產(chǎn)物對(duì)雞新城疫病毒的影響試驗(yàn)結(jié)果中和劑及中和產(chǎn)物與雞新城疫病毒作用后測(cè)得的病毒含量均與病毒對(duì)照組測(cè)得的病毒含量一致,表示中和劑和中和產(chǎn)物對(duì)雞新城疫病毒無(wú)影響。
3.3戊二醛苯扎溴銨溶液對(duì)雞新城疫病毒滅活測(cè)定結(jié)果根據(jù)表1中結(jié)果及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),戊二醛苯扎溴銨溶液在1 600倍稀釋,作用5 min,10次結(jié)果中有6次對(duì)新城疫病毒的滅活率達(dá)80%,其余4次滅活率達(dá)100%。說(shuō)明戊二醛苯扎溴銨溶液對(duì)新城疫病毒的最低有效濃度為1 600倍稀釋,該濃度對(duì)新城疫病毒的最快有效時(shí)間為5 min。
表1 戊二醛苯扎溴銨溶液對(duì)雞新城疫病毒滅活測(cè)定結(jié)果
戊二醛苯扎溴銨溶液在20℃水浴中,對(duì)雞新城疫病毒的最低有效濃度為1 600倍稀釋,該濃度對(duì)新城疫病毒的最快有效時(shí)間為5 min。
5.1本試驗(yàn)中濃度為0.5%甘氨酸+4%吐溫-80的中和劑、800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液,經(jīng)雞胚尿囊腔內(nèi)接種0.1 mL,雞胚不發(fā)生死亡,且發(fā)育正常,這與武衛(wèi)平[4]等的研究結(jié)果一致。同時(shí)800倍稀釋的戊二醛苯扎溴銨溶液與中和劑作用后中和產(chǎn)物對(duì)雞胚也是安全的。
5.2在消毒學(xué)研究中,除消毒劑性質(zhì)不同所致滅活差別外,就同一消毒劑而言,其有效使用濃度與接種時(shí)間乃是決定消毒成敗的關(guān)鍵所在[5]。采用懸浮殺滅試驗(yàn),通過(guò)雞胚感染研究表明,戊二醛苯扎溴銨溶液在同一作用時(shí)間點(diǎn),隨著作用濃度的升高,殺滅率也隨之增強(qiáng)。在同一濃度條件下,隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),殺滅率也隨之提高。這同多數(shù)消毒劑對(duì)細(xì)菌的殺菌效果一樣[6-10],戊二醛苯扎溴銨溶液對(duì)病毒的殺滅效果也是隨著濃度的增加、作用時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)。
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[2]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.獸用消毒劑鑒定技術(shù)規(guī)范[S].北京:(1992)農(nóng)(牧藥)字第101號(hào),1992.
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S852.65+9.5
B
0529-6005(2016)04-0105-02
2015-03-04
高富紅(1980-),女,獸醫(yī)師,碩士,從事新獸藥研發(fā)工作,E-mail:dkxgfh@sohu.com