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    茶葉浸提液對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力影響的初步研究

    2016-11-09 17:45李睿思楊永建陳征燕趙秀麗
    農(nóng)業(yè)與技術(shù) 2016年15期
    關(guān)鍵詞:學(xué)習(xí)小鼠影響

    李睿思++楊永建++陳征燕++趙秀麗

    摘 要:茶對人體具有降三高、減肥、提神、防老年癡呆癥等功效。然而學(xué)校大多數(shù)同學(xué)在口渴的情況下選擇喝茶葉水人數(shù)比例只占12.3%。因此,研究喝茶可能提高記憶能力、飲茶是否對青少年智力發(fā)展具有幫助具有意義。本文通過3項(xiàng)實(shí)驗(yàn),分別分析了不同配比的茶葉浸提液中茶多酚的含量測定,不同加工方式的茶葉浸提液對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響,不同濃度的茶葉浸提液對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響,最終喝茶對青少年智力發(fā)展具有一定作用的結(jié)論。

    關(guān)鍵詞:茶葉浸提液;小鼠;學(xué)習(xí);記憶能力;影響

    中圖分類號:R944.26 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A DOI:10.11974/nyyjs.20160832075

    緒論

    資料[1-2]表明,長期飲用碳酸飲料容易引起肥胖、糖尿病、骨質(zhì)疏松等癥。通過調(diào)查問卷方式了解到在口渴情況下大多數(shù)同學(xué)是喝白開水,喝茶葉水(簡稱喝茶)比例只有12.3%。茶,是中華民族的舉國之飲,中國幾千年的飲茶史,足以證明飲茶的重要性。有資料[3]表明,茶葉中有益的成份主要是茶多酚和茶多糖,喝茶對人體有許多益處:如降血糖、降血壓、降血脂,可減肥、提神等,還可以防老年癡呆癥。

    老年癡呆癥的癥狀之一是漸進(jìn)式記憶障礙,而記憶能力是智力的重要組成,對學(xué)習(xí)能力影響非常大。青少年時(shí)期是一個(gè)人智力發(fā)展的高峰期,在國家提倡大健康的背景下,飲茶能否對青少年智力發(fā)展提供有益的幫助,這是值得研究的問題。通過查閱文獻(xiàn),相關(guān)研究資料很少。因此決定建立“茶葉浸提液對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力影響的初步研究”課題,對該問題進(jìn)行研究。

    1 材料和方法

    課題組從2015年9月—2016年2月,利用課余、節(jié)假日,進(jìn)行了以下3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究,分別是不同配比的茶葉浸提液中茶多酚含量的測定、不同加工方式的茶葉浸提液對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響、不同濃度的茶葉浸提液對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。

    1.1 實(shí)驗(yàn)1

    不同配比的茶葉浸提液中茶多酚含量的測定

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    本實(shí)驗(yàn)材料采用按制造工藝分類的茶葉,即紅茶和綠茶,采用市場上常見的品牌和產(chǎn)地茶葉。實(shí)驗(yàn)使用的綠茶為一級的龍井茶,產(chǎn)地是浙江杭州錢塘產(chǎn)區(qū),產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號為GB/T18650 ,廠商是杭州憶江南茶業(yè)有限公司;紅茶則為一級大紅袍,原料產(chǎn)地為云南臨滄,而產(chǎn)地則是福建漳州,產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號為GB/T13738.2,廠商是漳州天福茶業(yè)有限公司。另外,本次實(shí)驗(yàn)還用到了購買于上海金穗生物科技有限公司的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品(含量≥98%)、 KMnO4溶液、3moL/L H2SO4溶液、鄰二氮菲亞鐵指示劑(0.025moL/L)等。

    1.1.2 實(shí)驗(yàn)樣品配置

    茶葉浸提液配比時(shí),統(tǒng)一使用75mL的沸水,通過控制茶葉的重量來提取不同濃度的茶葉浸提取液。具體是分別將0.75g、0.83g、0.94g、1.07g、1.25g、1.50g、1.88克、2.50g、3.75g、7.50g的茶葉放入75mL的沸水中浸泡10min,得到配比為1:100、1:90、1:80、1:70、1:60、1:50、1:40、1:30、1:20、1:10的浸提液。

    1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    在本次實(shí)驗(yàn)中主要采用的是高錳酸鉀滴定法[5],用于測定各樣品中茶多酚的含量。

    1.2 實(shí)驗(yàn)2

    不同加工方式的茶葉浸提液對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

    1.2.1 實(shí)驗(yàn)材料

    本次實(shí)驗(yàn)使用的動物是ICR雄性小鼠,鼠齡3周(浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心購得,許可證號:scxk(浙)2008-0033),飼料是由浙江省實(shí)驗(yàn)動物飼料生產(chǎn)基地、浙江省實(shí)驗(yàn)動物中心共同制造的,執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為GB14924-2001。另外,墊料是經(jīng)121℃、30min高壓蒸汽滅菌木質(zhì)刨花,浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心購得,綠茶和紅茶與實(shí)驗(yàn)一的相同。

    1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組

    實(shí)驗(yàn)分為3組,分別為:對照1組——小鼠11只,飲用水為去氯自來水(存放24h后自來水);綠茶組——小鼠15只,飲用水為配比1:30的綠茶浸提液;紅茶組——小鼠15只,飲用水為配比1:30的紅茶浸提液。3組小鼠其它生活條件相同。根據(jù)文獻(xiàn)[4]和人們的喝茶習(xí)慣,本實(shí)驗(yàn)采用配比為1:30的茶葉浸提液。

    1.2.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.3.1 觀察法

    觀察法主要指的是在學(xué)校實(shí)驗(yàn)室,小鼠自由攝食,飲水,飼養(yǎng)觀察35d,每天觀察小鼠活動情況,記錄小鼠飲水量,攝食量,每周稱量小鼠體重。

    1.2.3.2 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)

    在飼養(yǎng)35d后,小鼠在水迷宮實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)3d,進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為“定位航行”和“空間搜索”2部分,定位航行實(shí)驗(yàn)4d,每天記錄小鼠潛伏期;空間搜索實(shí)驗(yàn)1d,記錄小鼠穿越平臺次數(shù)和Ⅰ象限的時(shí)間,通過這些數(shù)據(jù)來測試小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

    1.2.3.3 生化指標(biāo)檢測

    水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,解剖小鼠,提取腦組織,檢測腦組織丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。主要包括MDA含量測定和SOD活性測定,其中MDA含量測定主要采用的是硫代巴比妥酸(TBA)法[6],操作步驟按MDA測定試劑盒說明操作,而SOD活性測定則是采用WST-1法[7],按SOD測試盒說明操作。

    1.3 實(shí)驗(yàn)3

    不同濃度的茶葉浸提液對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

    1.3.1 實(shí)驗(yàn)材料

    本實(shí)驗(yàn)采用的實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)二的相同

    1.3.2 實(shí)驗(yàn)分組為

    對照2組——10只,飲用水為去氯自來水(存放24h后自來水);綠茶組(1:10)——10只,飲用水為配比1:10的綠茶浸提液;綠茶組(1:30)——10只,飲用水為配比1:30的綠茶浸提液;綠茶組(1:100)——10只,飲用水為配比1:100的綠茶浸提液;紅茶組(1:10)——10只,飲用水為配比1:10的紅茶浸提液;紅茶組(1:30)——10只,飲用水為配比1:30的紅茶浸提液;紅茶組(1:100)——10只,飲用水為配比1:100的紅茶浸提液。

    7組小鼠其它生活條件相同。且根據(jù)實(shí)驗(yàn)一的結(jié)果,配比為1:10的茶葉浸提液中茶多酚的含量約為1:30的一倍,而配比為1:100的茶葉浸提液中茶多酚的含量約為1:30的50%,故本實(shí)驗(yàn)采用這3個(gè)配比。

    1.3.3 實(shí)驗(yàn)方法

    進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),在學(xué)校實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)56d后,進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn);進(jìn)行自主活動實(shí)驗(yàn),這主要反映小鼠心理緊張程度。水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,進(jìn)行自主活動實(shí)驗(yàn),自主活動箱模擬夜晚情景,分別將每只小鼠單獨(dú)放入測試箱中,打開風(fēng)扇、日光燈和攝像機(jī)開關(guān)。實(shí)驗(yàn)總時(shí)間為8min,小鼠熟悉環(huán)境3min,測定自主活動5min。儀器自動記錄每只小鼠總活動路程、總活動時(shí)間、在測試箱中央?yún)^(qū)域活動的路程(中央活動路程)、在測試箱中央?yún)^(qū)域活動和停留總時(shí)間(中央活動和停留總時(shí)間)、在中央?yún)^(qū)域活動的時(shí)間(中央活動時(shí)間)、在4個(gè)邊上活動和停留的總時(shí)間(邊上活動和停留總時(shí)間)、在4個(gè)邊上活動的時(shí)間(邊上的活動時(shí)間)7項(xiàng)數(shù)據(jù),再人工記錄小鼠排便粒數(shù);檢測生化指標(biāo)。自主活動實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,解剖小鼠,提取腦組織,檢測腦組織乙酰膽堿脂酶(ACh)[8]的活性、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。

    2 研究結(jié)果

    2.1 不同配比茶葉浸提液中茶多酚的含量

    采用高錳酸鉀滴定法測定茶葉浸提液中茶多酚的含量,通過觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象可以發(fā)現(xiàn):不論是綠茶還是紅茶,隨著茶葉量的增加,茶葉浸提液中茶多酚的含量增加;2種茶葉相比,綠茶浸提液中茶多酚的含量高于對應(yīng)配比的紅茶浸提液中茶多酚的含量。

    2.2 不同加工方式的茶葉浸提液對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

    2.2.1 日常記錄情況

    要進(jìn)行攝食量的比較。通過觀察各組小鼠平均每只每天的攝食量可以發(fā)現(xiàn):綠茶組與紅茶組在攝食量上差別不大。與對照1組相比,第1周,綠茶組與紅茶組的攝食量比對照1組稍多,之后幾周均比對照1組稍少;進(jìn)行飲水量的比較。實(shí)驗(yàn)表明:綠茶組和紅茶組小鼠在飲茶水量上相差不大,且與對照1組的飲水量也相差不大;再比較體重。結(jié)果表明:與對照1組相比,前4周,綠茶組和紅茶組小鼠的體重均大于對照1組,第5周趨向相同;進(jìn)行茶多酚攝入量的比較。根據(jù)實(shí)驗(yàn)一結(jié)果和小鼠飲茶量、體重,可以發(fā)現(xiàn):綠茶組小鼠的每天每克體重茶多酚攝入量(平均值)比紅茶組多,2者隨著小鼠的體重增加呈減少趨勢,但每天每只小鼠的茶多酚攝入量增加。

    2.2.2 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    潛伏期是小鼠從入水到找到水下隱蔽平臺并站立于其上所需時(shí)間,它反映小鼠學(xué)習(xí)和記憶的能力。潛伏期越短,說明小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力越好。由Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)的潛伏期結(jié)果可以發(fā)現(xiàn):綠茶組小鼠與對照1組的潛伏期變化趨勢大致相同,綠茶組小鼠的潛伏期總體上比對照1組短。紅茶組在訓(xùn)練期間潛伏期一直呈下降趨勢,且在第1天、第2天、第4天的潛伏期均比對照1組少。另外,穿越平臺次數(shù)和Ⅰ象限時(shí)間(%)反映的是小鼠對原先平臺空間位置記憶的保持能力。穿越平臺次數(shù)越多、在Ⅰ象限時(shí)間(%)(原先平臺所處的象限)越多,說明小鼠對原先平臺位置記憶能力越好。而且綠茶組小鼠的穿越平臺次數(shù)和在Ⅰ象限時(shí)間(%)均比對照1組多,紅茶組小鼠停留在Ⅰ象限時(shí)間(%)比對照1組多。

    2.2.3 生化指標(biāo)檢測

    Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)后,提取小鼠腦組織,檢測腦組織丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,從機(jī)理上判定茶葉浸提液對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。檢測結(jié)果如下表1。

    從表1可知,與對照1組相比,綠茶組與紅茶組小鼠的腦內(nèi)MDA含量較低,p值均<0.01,存在顯著性差異;綠茶組與紅茶組小鼠的腦內(nèi)SOD活性有所下降,但p值均>0.05,沒有顯著性差異。說明小鼠連續(xù)飲用紅茶、綠茶浸提液均會降低腦內(nèi)MDA含量,可能減少腦內(nèi)神經(jīng)元病理損傷、提高學(xué)習(xí)記憶能力。與綠茶組相比,紅茶組小鼠的腦內(nèi)MDA含量較低,且p=0.0021<0.01,存在極顯著性差異。SOD活性有所下降,但p值>0.05,沒有顯著性差異。說明紅茶浸提液可能對小鼠效果更好。

    2.3 不同濃度的茶葉浸提液對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

    2.3.1 紅、綠茶1:10配比組小鼠生存情況

    配比為1:10實(shí)驗(yàn)組:小鼠每天每克體重茶多酚攝入量綠茶組為0.3152mg、紅茶組為0.2087mg, 5d內(nèi)死亡達(dá)70%、50%,結(jié)論提示高濃度的茶葉浸提液可能影響小鼠生存。

    2.3.2 綠茶其它配比組實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    通過比較綠茶組(1:30)、(1:100)的茶多酚攝入量可以發(fā)現(xiàn):2種不同配比的綠茶組、小鼠每天每克體重茶多酚攝入量(平均值)1:30實(shí)驗(yàn)組比1:100實(shí)驗(yàn)組多,2者隨著小鼠的體重增加呈減少趨勢。但每天每只小鼠的茶多酚攝入量增加。在水迷宮實(shí)驗(yàn)中,將飼喂8周后的小鼠進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),測試小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

    由“綠茶組”Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)的潛伏期結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)到第5天時(shí),綠茶組(1:100)的潛伏期有明顯縮短,但各組小鼠之間沒有顯著性差異;本實(shí)驗(yàn)通過記錄Morris水迷宮空間搜索實(shí)驗(yàn)的穿越平臺次數(shù)和Ⅰ象限時(shí)間(%)發(fā)現(xiàn):綠茶組(1:100)、(1:30)的穿越平臺的次數(shù)與對照2組相比,p值<0.05,存在顯著性差異;綠茶組(1:100)穿越平臺的次數(shù)最多,結(jié)論提示飲用配比為1:100的綠茶浸提液可能效果更好。另外,通過觀察“綠茶組”自主活動實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出:自主活動實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)指標(biāo)沒有同一性變化趨勢,且各組之間p值均>0.05,沒有顯著性差異;在進(jìn)行生化指標(biāo)檢測時(shí),Ach含量是考察學(xué)習(xí)記憶能力的重要指標(biāo),小鼠腦內(nèi)Ach含量升高,會增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力。小鼠腦內(nèi)MDA含量降低、SOD升高,抗氧化作用增強(qiáng),也可能會增強(qiáng)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力。由“綠茶組”小鼠腦組織生化指標(biāo)檢測結(jié)果如圖2表示。

    從表2可以得出:綠茶組(1:100)小鼠腦中的乙酰膽堿脂酶(ACh)的活性最高,與對照2組相比,p值<0.01,存在極顯著差異;綠茶組(1:100)、綠茶組(1:30)小鼠腦中的丙二醛(MDA)的含量較低,與對照2組相比,p值<0.05,存在顯著性差異。

    2.3.3 紅茶組

    通過觀察紅茶組(1:30)、(1:100)的茶多酚攝入量曲線可以發(fā)現(xiàn)2種不同配比的紅茶組、小鼠每天每克體重茶多酚攝入量(平均值)1:30實(shí)驗(yàn)組比1:100實(shí)驗(yàn)組多,2者隨著小鼠的體重增加呈減少趨勢。但每天每只小鼠的茶多酚攝入量增加。在進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)時(shí),通過觀察“紅茶組”Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)的潛伏期結(jié)果表明:第4天,紅茶(1:30)的潛伏期有明顯縮短,有增強(qiáng)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的趨勢,但各組之間無顯著性差異。此外,通過觀察“紅茶組”Morris水迷宮空間搜索實(shí)驗(yàn)的穿越平臺次數(shù)和Ⅰ象限時(shí)間(%)的結(jié)果可以發(fā)現(xiàn):紅茶組(1:30)的穿越平臺的次數(shù)最多,但各組之間相比,p值均>0.05,沒有顯著性差異。在I象限時(shí)間(%)中,紅茶組(1:100)最多,與對照2組相比,p值<0.05,存在顯著性差異,所以紅茶組Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)綜合結(jié)論:紅茶(1:100)、(1:30)配比的浸提液均有可能提高小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,配比為1:100的紅茶浸提液可能效果更好。另外,本次實(shí)驗(yàn)對“紅茶組”自主活動實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行了詳細(xì)的分析,通過對比實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),自主活動實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)指標(biāo)對心理緊張程度不一致,且各組小鼠之間p值均>0.05,沒有顯著性差異,說明小鼠連續(xù)飲用不同濃度的紅茶浸提液對心理緊張程度沒有相關(guān)性。進(jìn)行“紅茶組”腦的生化指標(biāo)檢測,結(jié)果如表3所示。

    從表3可以得出:紅茶組(1:30)小鼠腦中的乙酰膽堿脂酶(ACh)的活性最高,與對照2組相比,p值<0.01,存在極顯著差異;與紅茶組(1:100)相比, p=0.0048<0.01,存在極顯著性差異。結(jié)論表明,小鼠飲用配比為1:30的紅茶浸提液更有利提高學(xué)習(xí)記憶能力。

    3 結(jié)論

    經(jīng)過3組實(shí)驗(yàn),可以發(fā)現(xiàn):隨著茶葉量的增加,浸提液中茶多酚的含量會隨之增加,綠茶增加的量會高于紅茶,實(shí)驗(yàn)二說明小鼠連續(xù)飲用茶葉浸提液可能有利于身體的發(fā)育,提高小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,綠茶與紅茶沒有明顯差異;實(shí)驗(yàn)三則表明高濃度的紅茶、綠茶浸提液均會影響小鼠生存,濃度為1:100配比的紅茶、1:30配比的綠茶浸提液均有可能提高小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,但對心理緊張程度無相關(guān)性,飲用配比為1:30的紅茶浸提液、配比為1:100的綠茶浸提液可能效果更好。

    參考文獻(xiàn)

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