PKB/Akt通過(guò)Girdin蛋白調(diào)控小鼠受精卵微絲聚集

武迪迪，張盼盼，劉瑩，于秉治

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PKB/Akt通過(guò)Girdin蛋白調(diào)控小鼠受精卵微絲聚集

武迪迪1，張盼盼2，劉瑩1，于秉治1

1 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室, 遼寧沈陽(yáng)110001 2 沈陽(yáng)市第五人民醫(yī)院, 遼寧沈陽(yáng) 110001

通過(guò)研究PKB/Akt與Girdin蛋白之間的關(guān)系，目的在于揭示Girdin蛋白在PKB/Akt調(diào)控小鼠受精卵微絲聚集中的作用。研究中首先結(jié)合軟件 (http：//scansite.mit.edu//) 預(yù)測(cè)了PKB/Akt對(duì)Girdin蛋白的磷酸化位點(diǎn)，并制定特定位點(diǎn)磷酸化抗體，通過(guò)蛋白免疫印跡檢測(cè)經(jīng)PKB/Akt mRNA或PKB/Akt siRNA處理后的小鼠受精卵中Girdin蛋白磷酸化改變情況。同時(shí)檢測(cè)了磷酸化的Girdin蛋白亞細(xì)胞定位及同微絲骨架的定位關(guān)系。進(jìn)一步通過(guò)顯微注射PKB/Akt mRNA再注射Girdin siRNA檢測(cè)小鼠受精卵微絲骨架的聚集。結(jié)果顯示經(jīng)持續(xù)激活型PKB/Akt mRNA、野生型PKB/Akt mRNA處理后的小鼠受精卵中p-Girdin-1 417分布位置更加集中在2-細(xì)胞分裂溝處。經(jīng)野生型和持續(xù)激活型PKB/AktmRNA注射組p-Girdin-1 417表達(dá)增強(qiáng)，但是并不影響Girdin蛋白的總的表達(dá)。說(shuō)明siRNA介導(dǎo)的PKB/Akt表達(dá)敲低非常明顯地降低了Girdin蛋白的磷酸化。激光共聚焦研究顯示在Akt mRNA和Girdin siRNA共注射組微絲骨架分布明顯散亂。本研究結(jié)果充分說(shuō)明Girdin蛋白在小鼠受精卵中受到PKB/Akt的調(diào)節(jié)，PKB/Akt通過(guò)磷酸化Girdin蛋白改變微絲骨架的聚集。

PKB/Akt，Girdin蛋白，F(xiàn)-actin，小鼠受精卵

微絲骨架(Microf ilament cytoskeleton) 在受精卵早期分裂及發(fā)育中對(duì)精卵融合、紡錘體旋轉(zhuǎn)、分裂溝形成及胞質(zhì)分裂等事件的完成發(fā)揮重要作用[1]。但在哺乳動(dòng)物尤其在小鼠受精卵細(xì)胞的分裂及早期發(fā)育過(guò)程中，微絲骨架形成和變化的調(diào)控因子及信號(hào)調(diào)控機(jī)制尚不清楚。

蛋白激酶B (Protein kinase B，PKB) 是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，與v-基因編碼的Akt蛋白同源，又被稱為Akt。PKB/Akt主要通過(guò)PI3K途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞多種生理功能，并被確定為參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的重要信號(hào)途徑[2-4]。研究報(bào)道顯示敲低PKB/Akt表達(dá)能夠抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)PKB/Akt參與乳腺癌細(xì)胞遷移同微絲骨架的重新構(gòu)建密切相關(guān)[5-7]。而我們的前期研究發(fā)現(xiàn)PKB/Akt在小鼠卵母細(xì)胞及早期受精卵中存在且能夠促進(jìn)受精卵的分裂[8-9]。并進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)PKB/Akt在小鼠卵母細(xì)胞及受精卵一、二細(xì)胞期中同微絲骨架存在著共定位。同時(shí)我們也已證明PKB/Akt可影響小鼠受精卵細(xì)胞微絲骨架的正確聚集及分布[10-11]。

上述研究雖然初步證明了PKB/Akt可以影響小鼠受精卵微絲骨架的聚集，但是其作用途徑還很不明確。多項(xiàng)研究顯示微絲骨架可受到多種微絲交聯(lián)/成束蛋白調(diào)控，包括fimbrin、villin、scruin、fascin、families和Girdin蛋白等的影響。其中Girdin (Girders of actin filaments) 是一個(gè)新近發(fā)現(xiàn)參與微絲交聯(lián)的PKB/Akt底物蛋白，也被稱為APE (Akt phosphorylation enhancer)、GIV (Gα-interacting vesicle associated protein)。其在多種類型癌細(xì)胞及未成熟的血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)，參與多種細(xì)胞進(jìn)程，包括重新構(gòu)建微絲骨架、內(nèi)吞作用，最終導(dǎo)致癌癥的侵襲和血管的再生[12-13]。Girdin蛋白最早是通過(guò)酵母雙雜交方法作為PKB/Akt連接蛋白而被發(fā)現(xiàn)的。研究顯示在多種類型的生長(zhǎng)因子刺激下，PKB/Akt能夠磷酸化Girdin蛋白C-末端區(qū)域的ser-1416位點(diǎn)，使其在細(xì)胞遷移過(guò)程中細(xì)胞骨架的重構(gòu)扮演重要角色。Girdin蛋白僅同Akt的C末端連接但是不能同其他AGC家族成員包括蛋白激酶C和SGKs相結(jié)合。表明Girdin僅參與了PKB/Akt信號(hào)途徑[14]。最新研究發(fā)現(xiàn)，PKB/Akt依賴的Girdin磷酸化過(guò)程調(diào)節(jié)了急性心肌梗死的修復(fù)[15]。在小鼠中PKB/Akt介導(dǎo)的磷酸化Girdin蛋白對(duì)腫瘤相關(guān)的成纖維細(xì)胞 (CAF) 的侵襲和腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)也起很重要的作用[16]。然而，關(guān)于Girdin蛋白在小鼠受精卵早期分裂中同PKB/Akt的相互關(guān)系，國(guó)內(nèi)、外文獻(xiàn)卻未見報(bào)道。我們根據(jù)Scansite軟件(http://scansite.mit.edu) 預(yù)測(cè)了PKB/Akt和鼠Girdin蛋白的相關(guān)位點(diǎn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)鼠在1 417位有一個(gè)絲氨酸殘基，而這一位點(diǎn)恰恰和人Girdin 蛋白絲氨酸1 416位點(diǎn)相一致。結(jié)合Girdin蛋白在小鼠受精卵中的研究空白及其在腫瘤細(xì)胞中的作用，進(jìn)而提出假設(shè)：即PKB/Akt通過(guò)磷酸化Girdin蛋白參與調(diào)節(jié)小鼠受精卵早期發(fā)育微絲骨架的形成和分布，從而調(diào)節(jié)小鼠受精卵早期的發(fā)育。我們大膽推測(cè)PKB/Akt蛋白能夠使Girdin蛋白磷酸化，磷酸化的Girdin蛋白從質(zhì)膜上分離，牽引著微絲聚集在受精卵分裂處，參與形成溢縮環(huán)，并且磷酸化的Girdin蛋白同PKB/Akt結(jié)合促進(jìn)PKB/Akt錨定于細(xì)胞質(zhì)膜上，進(jìn)而維持PKB/Akt蛋白高催化活性，促進(jìn)受精卵的分裂。但是具體機(jī)制需要相應(yīng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。因此，我們認(rèn)為十分有必要對(duì)Girdin蛋白同PKB/Akt的關(guān)系進(jìn)行更深一步的研究。

本研究中，在預(yù)測(cè)了小鼠受精卵中PKB/Akt和鼠Girdin蛋白的相關(guān)位點(diǎn)的基礎(chǔ)上，通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明了過(guò)表達(dá)PKB/Akt蛋白能夠促進(jìn)Girdin蛋白的磷酸化，而敲低PKB/Akt蛋白表達(dá)則抑制Girdin蛋白磷酸化。更進(jìn)一步，通過(guò)共注射激活型PKB/Akt 及Girdin siRNA檢測(cè)小鼠受精卵發(fā)育及微絲聚集變化情況，進(jìn)一步明確Girdin在PKB/Akt調(diào)控小鼠受精卵微絲聚集中的作用。為深入探討小鼠受精卵早期發(fā)育中PKB/Akt與Girdin及微絲之間的關(guān)系、闡明小鼠受精卵早期發(fā)育的分子機(jī)理有十分重要的意義。

1 材料與試劑

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供昆明系SPF級(jí)雌 (4–5周，16–18 g)、雄 (8周，30–35 g) 小白鼠 (許可證號(hào)：SCXK (遼寧) 2008–0005) Girdin抗體 (Santa cruz)；Girdin siRNA (Santa cruz)；Akt siRNA (m) sc-19169 (Santa cruz)；pcDNA-Akt-WT、pcDNA-Akt-KD、pcDNA-myr-Akt由本研究室構(gòu)建并保存；TRITC-phalloidin (Invitrogen公司)；mMESSAGE mMACHINE T7 Ultra kit體外轉(zhuǎn)錄試劑盒 (Ambion公司)；小鼠Girdin-S1 417磷酸化抗體和非磷酸化抗體由中國(guó)南京川博生物技術(shù)有限公司合成；辣根過(guò)氧化酶二抗、FITC/TRITC熒光二抗 (北京中山金橋)；蛋白裂解液、ECL發(fā)光試劑盒 (碧云天公司)；快速微量mRNA提取純化試劑盒 (GE healthcare公司)；反轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑 (Promega公司)；Hoechst33258、透明質(zhì)酸酶、M2培養(yǎng)液、M16培養(yǎng)液、BSA (Sigma公司)；LB培養(yǎng)基 (invitrogen公司)；大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)菌、限制性內(nèi)切酶 (Takara公司)；去內(nèi)毒素質(zhì)粒中量提取試劑盒 (OMEGA公司)；孕馬血清促性腺激素、人絨毛膜促性腺激素 (寧波第二激素廠)；其他試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。

2 方法

2.1 小鼠超排卵及受精卵的采集

昆明系SPF級(jí)4–5周齡性成熟雌鼠(18–22 g)，腹腔注射PMSG 10 IU/只，46–48 h后腹腔注射hCG 10 IU/只，當(dāng)晚與8周齡以上性成熟雄性昆明系SPF級(jí)小鼠(30–35 g) 合籠過(guò)夜。次日檢測(cè)陰栓，有陰栓者視為交配成功。脫頸椎法處死雌鼠，取雙側(cè)輸卵管，剪下置于M2培養(yǎng)液中，在實(shí)體鏡下撕開壺腹部，讓細(xì)胞團(tuán)自然流出，透明質(zhì)酸酶 (300 μg/mL，溶于M2培養(yǎng)液中) 5–10 min去除顆粒細(xì)胞，在M2培養(yǎng)液中洗3次，加入200 μL預(yù)先在培養(yǎng)箱中平衡的M16培養(yǎng)液，上覆礦物油，在37 ℃、5% CO2、飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)至指定時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行收集或進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。受精卵培養(yǎng)及收集時(shí)間按照冷泉港-小鼠胚胎實(shí)驗(yàn)操作手冊(cè)進(jìn)行。

2.2 小鼠蛋白的PKB/Akt作用靶位點(diǎn)的確定

將小鼠Girdin蛋白序列(Q5SNZ0) (GenBank Accession No. AB087827) 輸入Scansite分析軟件中，分析并預(yù)測(cè)Girdin蛋白中的ser1 417位點(diǎn)為可能的磷酸化位點(diǎn)，并且這個(gè)位點(diǎn)符合PKB/Akt作用的一致序列RXRXX (S/T)。根據(jù)預(yù)測(cè)的位點(diǎn)進(jìn)行特異位點(diǎn)磷酸化抗體的制備。

2.3 體外轉(zhuǎn)錄

將已有的野生型、激酶激活型和失活型PKB/Akt的pcDNA3.1/myc-his表達(dá)載體進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄，制備野生型、磷酸化位點(diǎn)突變型激酶激活型和失活型PKB/Akt的mRNA，純化mRNA并進(jìn)行濃度測(cè)定(Myr-Akt代表激酶激活型、KD-Akt是激酶失活型、WT-Akt為野生型)。體外轉(zhuǎn)錄應(yīng)用的是Ambion公司的mMESSAGE mMACH INE體外轉(zhuǎn)錄試劑盒，方法參照試劑盒說(shuō)明書。

2.4 顯微注射

顯微注射應(yīng)用Eppendorf Transferman顯微操作系統(tǒng)，OlympusIX-70 倒置顯微鏡，DIC調(diào)制相差觀察。顯微注射在M2液滴中進(jìn)行。為盡量減少顯微注射對(duì)受精卵的影響，一般注入到受精卵內(nèi)的樣品體積為10 pl (相當(dāng)于其總體積的5%)。mRNA溶解于無(wú)核酸酶污染的5 mmol/L Tris和0.5 mmol/L EDTA (pH 7.4) 中，稀釋成不同濃度，對(duì)照組為非注射組及注射TE緩沖液組。用DEPC處理水溶解Girdin siRNA，稀釋成不同濃度。

2.5 Western印跡法檢測(cè)蛋白表達(dá)

分別收集經(jīng)各種處理后的小鼠受精卵250個(gè)；在蛋白裂解液 (20 μL) 中經(jīng)反復(fù)凍融3次后，加入蛋白上樣緩沖液，100 ℃煮沸5 min，瞬時(shí)離心后上樣，以12%或10% SDS-PAGE電泳分離，轉(zhuǎn)印至PVDF膜，5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，分別與Girdin-Ser1417磷酸化或非磷酸化抗體、PKB/Akt抗體及β-actin抗體 (1∶1 000) 4 ℃結(jié)合過(guò)夜。TBST洗滌3次后，分別與相應(yīng)的HRP偶聯(lián)二抗室溫孵育1 h，TBST洗膜3次，用ECL化學(xué)發(fā)光法顯影。UVP凝膠成像系統(tǒng)掃描成像圖像分析軟件分析灰度值。以目標(biāo)蛋白與α-tublin的灰度值比值計(jì)算各組相對(duì)表達(dá)量。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.6 微絲的免疫熒光化學(xué)

收集經(jīng)各種處理后的小鼠受精卵移入4%多聚甲醛中37 ℃固定40 min或4 ℃固定過(guò)夜。將固定后的樣品移入清洗液 (含0.1% BSA的DPBS) 中清洗3次，每次5 min。將清洗后的樣品移入透膜液 (清洗液中加入0.2% TritonX-100)，在37 ℃溫箱中溫育40 min，增加細(xì)胞膜的通透性，以利于抗體進(jìn)入。透膜處理后的樣品移入清洗液中洗3次，每次5 min；每毫升清洗液中添加0.125 g甘氨酸和10 mg BSA作為封閉液，37 ℃溫育l h。樣品放入l∶100封閉液稀釋的小鼠抗girdin或Akt抗體中，37 ℃溫育l h。清洗液清洗3次，每次5 min。樣品與1∶100清洗液稀釋的FITC標(biāo)記的抗兔二抗37 ℃溫育40 min，未經(jīng)一抗處理、只做二抗結(jié)合的樣品作為陰性對(duì)照。在含有300 U/mL羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽(TRITC- phalloidin) 的DPBS溶液中，37 ℃共同溫育 40 min，進(jìn)行微絲F-actin染色，用清洗液清洗3次，每次5 min。將經(jīng)過(guò)微絲染色的樣品清洗后，在含有(Hoechst33258) 的清洗液中室溫下溫育5–10 min。在潔凈的載玻片上加一滴防熒光淬滅劑DABCO，將處理好的卵轉(zhuǎn)移其中，封片后置于暗盒，低溫保存，盡快用激光共聚焦顯微鏡觀察、照相。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，每次至少觀察30個(gè)樣品。

2.7 激光共聚焦顯微鏡成像分析

TRITC 545 nm，Hoechst33258所用激發(fā)波長(zhǎng)為352 nm，在圖象分析系統(tǒng)中選擇目標(biāo)區(qū)域取圖，并做Z軸方向的光切片合成。

3 結(jié)果與分析

3.1 小鼠Girdin蛋白的PKB/Akt作用靶位點(diǎn)的確定

將小鼠Girdin蛋白序列(Q5SNZ0) 輸入Scansite分析軟件中，根據(jù)評(píng)分 (0.481 2) 及序列 (INRERQKSLTLTPTR) 分析并預(yù)測(cè)PKB/Akt的作用位點(diǎn)。結(jié)合已有的文獻(xiàn)，最后確定小鼠Girdin蛋白中的ser1 417位點(diǎn)為可能的磷酸化位點(diǎn)，并且這個(gè)位點(diǎn)符合PKB/Akt作用的一致序列RXRXX (S/T)。

3.2 PKB/Akt影響Girdin蛋白的磷酸化

取小鼠G1期受精卵顯微注射野生型和持續(xù)激活型PKB/Akt的mRNA或利用siRNA沉默PKB/Akt蛋白編碼基因，通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察經(jīng)持續(xù)激活型PKB/Akt mRNA、野生型PKB/Akt mRNA、激酶失活型PKB/Akt mRNA及PKB/Akt siRNA處理后小鼠受精卵中p-Girdin-1 417及F-actin的定位狀態(tài)。結(jié)果顯示，對(duì)照組中p-Girdin-1 417彌散分布在胞漿中，而經(jīng)持續(xù)激活型PKB/Akt mRNA、野生型PKB/Akt mRNA處理后的小鼠受精卵中FITC標(biāo)記的p-Girdin-1 417熒光信號(hào)較對(duì)照組及PKB/Akt siRNA處理組明顯增強(qiáng)，并且分布位置更加集中在2-細(xì)胞分裂溝處，進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)微絲的熒光信號(hào)也在分裂溝處增強(qiáng)，這也說(shuō)明磷酸化的Girdin蛋白可能參與了微絲的聚集 (圖1)。進(jìn)一步通過(guò)免疫印跡檢測(cè)Girdin的1 417位磷酸化及Girdin蛋白的總表達(dá)情況。結(jié)果顯示野生型和持續(xù)激活型PKB/Akt的mRNA注射組Girdin的ser1 417位磷酸化增強(qiáng)但是并不影響Girdin蛋白的總的表達(dá)。siRNA介導(dǎo)的PKB/Akt表達(dá)敲除非常明顯地降低了Girdin的磷酸化水平(圖2)。結(jié)果說(shuō)明PKB/Akt可磷酸化小鼠受精卵中Girdin蛋白的1 417位絲氨酸。

圖1 PKB/Akt影響磷酸化Girdin蛋白定位

圖2 PKB/Akt影響Girdin蛋白磷酸化

3.3 小鼠受精卵中微絲重構(gòu)及分布與PKB/Akt、Girdin之間的關(guān)系

在進(jìn)一步的研究中我們首先用myr-Akt mRNA處理小鼠G1期受精卵，隨后再注射Girdin siRNA。M16培養(yǎng)液中37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，20 h后取出進(jìn)行微絲染色。通過(guò)激光共聚集熒光顯微鏡觀察每一組卵細(xì)胞的微絲聚集狀態(tài)。正如我們所預(yù)期，在Akt mRNA和Girdin siRNA共注射組微絲熒光信號(hào)出現(xiàn)了明顯的降低，并且干擾了微絲的正確聚集 (圖3)。說(shuō)明PKB/Akt可通過(guò)作用Girdin蛋白影響微絲聚集。

圖3 PKB/Akt通過(guò)Girdin蛋白調(diào)控小鼠受精卵微絲聚集

4 討論

Girdin蛋白最早是通過(guò)酵母雙雜交方法作為PKB/Akt連接蛋白而被發(fā)現(xiàn)的。有文獻(xiàn)研究表明PKB/Akt可磷酸化Girdin的serine1 416位，磷酸化的Girdin使微絲從質(zhì)膜上分離，隨后聚集在遷移細(xì)胞邊緣，導(dǎo)致微絲骨架的重新排列影響細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)[14]。多項(xiàng)研究表明Girdin在腫瘤細(xì)胞的遷移、侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中都扮演重要角色[17-20]。新近研究發(fā)現(xiàn)，Girdin蛋白通過(guò)PI3K-Akt途徑調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移及侵襲[21]。也有研究小組提出Girdin蛋白可增強(qiáng)PKB/Akt活性調(diào)控DNA合成[22]。而Cenni等則提出PKB/Akt可直接作用于微絲[23]。然而，關(guān)于PKB/Akt調(diào)控小鼠受精卵微絲的聚集過(guò)程是否通過(guò)Girdin蛋白的作用還未見報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示PKB/Akt能夠磷酸化Girdin蛋白的Ser-1 417位點(diǎn)，用phospho-Ser-1 417抗體檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在野生型Akt mRNA及激活型Akt mRNA處理后的小鼠受精卵中Girdin蛋白呈磷酸化狀態(tài)，而Akt siRNA處理后阻止了Girdin的磷酸化。激光共聚焦觀測(cè)顯示，同非磷酸化的Girdin蛋白相比較，磷酸化的Girdin蛋白突出顯現(xiàn)在受精卵卵裂溝處。上述結(jié)果說(shuō)明PKB/Akt能通過(guò)調(diào)控Girdin蛋白的磷酸化，通過(guò)亞細(xì)胞定位發(fā)現(xiàn)能夠促進(jìn)小鼠受精卵細(xì)胞的分裂。我們分析磷酸化的Girdin蛋白從質(zhì)膜上分離，牽引著微絲聚集在受精卵分裂處，參與形成溢縮環(huán)，進(jìn)而促進(jìn)受精卵的分裂。為了進(jìn)一步明確PKB/Akt同Girdin蛋白的調(diào)控關(guān)系，我們采取激活型Akt mRNA和Girdin siRNA共注射的方法檢測(cè)受精卵中微絲聚集改變情況。結(jié)果顯示在Akt mRNA和Girdin siRNA共注射組微絲熒光信號(hào)在二細(xì)胞分裂溝處出現(xiàn)了明顯的降低，顯示微絲的正確聚集受到影響。綜上結(jié)果，我們認(rèn)為在小鼠受精卵中PKB/Akt通過(guò)磷酸化Girdin蛋白改變微絲的聚集進(jìn)而影響受精卵早期的正常卵裂。

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(本文責(zé)編 郝麗芳)

PKB/Akt regulates the aggregation of actin by girdin in mouse fertilized eggs

Didi Wu1, Panpan Zhang2, Ying Liu1, and Bingzhi Yu1

1 Department of Biochemical and Molecular Biology, China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning, China 2 The Fifth People's Hospital of Shenyang, Shenyang 110001, Liaoning, China

The purpose of this study is to reveal the role of Girdin in regulating the aggregation of actin filaments by studying the relationship between PKB/Akt and Girdin. Firstwe used Scansite software (http://scansite.mit.edu) to predict relevant target sites of PKB/Akt on mouse Girdin. To gain insight into the role of phosphorylation of Girdin by PKB/Akt, we assessed the location of phosphorylated Girdin in fertilized eggs by staining with anti-P-Girdin 1 417 Ab. We detected a distinct increase in the fluorescence signal of F-actin and P-Girdin 1 417 after microinjection of Akt WT and myr-Akt. The addition of myr-Akt induced phosphorylation of Girdin in mouse fertilized eggs. In addition, siRNA-mediated Akt-knockdown blocked phosphorylation of Girdin. The distribution of actin filaments was obviously scattered. These results strongly suggest that PKB/Akt could directly phosphorylate Girdin on Ser1 417 and promote its function in mouse fertilized eggs.

PKB/Akt, Girdin, F-actin, mouse fertilized eggs

January 12, 2016; Accepted: April 27, 2016

Supported by:National Nature Science Foundation of China (Nos. 31501162, 81270654, 31570819).

Bingzhi Yu. E-mail: ybzbiochem@yeah.net Ying Liu. E-mail: yliu@mail.cmu.edu.cn

國(guó)家自然科學(xué)基金(Nos. 31501162，81270654，31570819) 資助。

武迪迪, 張盼盼, 劉瑩, 等. PKB/Akt通過(guò)Girdin蛋白調(diào)控小鼠受精卵微絲聚集. 生物工程學(xué)報(bào), 2016, 32(9): 1204–1211.

Wu DD, Zhang PP, Liu Y, et al. PKB/Akt regulates the aggregation of actin by girdin in mouse fertilized eggs. Chin J Biotech, 2016, 32(9): 1204–1211.