江蘇省海門市豬A型口蹄疫非免疫抗體調(diào)查與分析

許新松　施海燕　施樹高

（海門市畜牧獸醫(yī)站，江蘇海門 226100）

江蘇省海門市豬A型口蹄疫非免疫抗體調(diào)查與分析

許新松施海燕施樹高

（海門市畜牧獸醫(yī)站，江蘇海門 226100）

近年來，我國部分地區(qū)連續(xù)發(fā)生多起豬A型口蹄疫疫情，給畜牧業(yè)健康發(fā)展帶來了隱患。針對當(dāng)前豬A型口蹄疫防控形勢，在海門市選擇了部分規(guī)模豬場、種畜場、屠宰場，采集種豬、仔豬、育肥豬的血清，開展A型口蹄疫非免疫抗體調(diào)查。結(jié)果顯示：調(diào)查豬群中豬A型口蹄疫非免疫抗體均呈陰性，調(diào)查豬群中未發(fā)現(xiàn)豬A型口蹄疫疫情。

豬A型口蹄疫非免疫抗體調(diào)查陰性

江蘇省海門市位于長江三角洲地帶，東瀕黃海，南倚長江，是長三角北翼聯(lián)通上海的第一橋頭堡，處于承南接北的重要樞紐位置。轄區(qū)內(nèi)生豬養(yǎng)殖以規(guī)模養(yǎng)殖為主，其中，中大型規(guī)模豬場占海門市規(guī)模豬場的16%，據(jù)畜牧報表統(tǒng)計2016年1～4月份海門市存欄種豬2.4萬頭左右，生豬養(yǎng)殖在海門市的畜牧生產(chǎn)中占據(jù)了重要的地位。

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染偶蹄動物引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。該病的特征病變?yōu)榘l(fā)病動物口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚出現(xiàn)水皰，繼而潰爛。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列入A類烈性傳染病，我國也將其劃入嚴(yán)格控制、強(qiáng)制免疫的一類動物傳染病。目前，在我國豬的口蹄疫以O(shè)型為主，但是2013年2月，在廣東茂名發(fā)生A型口蹄疫疫情，2014年6月，在江蘇省宿遷市發(fā)生了一起輸入性的豬A型口蹄疫疫情，2015年1月，安徽馬鞍山再次發(fā)生一起豬的A型口蹄疫疫情，生豬的A型口蹄疫防控形勢已經(jīng)應(yīng)該引起重視。

按照上級部門關(guān)于主要動物疫病免疫計劃的要求，海門市對所有豬進(jìn)行O型口蹄疫強(qiáng)制免疫，但豬A型口蹄疫不免疫。本次通過豬A型口蹄疫非免疫抗體調(diào)查，主要了解豬A型口蹄疫疫病在本地豬群及輸入性豬群中流行情況，為本地區(qū)豬A型口蹄疫流行病學(xué)調(diào)查提供依據(jù)。

1　材料與調(diào)查時間

1.1采樣工具

豬用保定器、9號針尖采血器、光盤記號筆、采樣單、試管架、酒精棉球、保溫桶等。

1.2實驗儀器及器械

低速離心機(jī) TDZ5-WS 湖南賽特湘儀離心機(jī)儀器有限公司。恒溫培養(yǎng)箱DNP-9082BS-Ⅲ上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司。

酶標(biāo)儀 RT-6000 深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司。微量振蕩器WZ-ZA 常州國華電器有限公司。

1.3實驗試劑

口蹄疫A型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，生產(chǎn)廠家：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.4調(diào)查時間

2016年3月～2016年4月。

2　方法

2.1采樣場群及采樣數(shù)量

2.1.1種豬場*2個：海門市種豬場A，采集母豬血清50份（編號：A母1～50），采集25～35日齡仔豬血清30份（編號：A 1-30），采集3月齡～6月齡育肥豬血清30份（編號：A31～60），海門市種豬場B，采集母豬血清30份（編號：B母1～30），采集25～35日齡仔豬血清30份（編號：B1～30），采集3月齡～6月齡育肥豬血清30份（編號：B31～60）。

2.1.2規(guī)模豬場*12個：各場隨機(jī)采集母豬、仔豬、育肥豬血清，采集母豬血清85份（編號：C母1～85），采集25～35日齡仔豬血清120份（編號：C1～120），采集3月齡-6月齡育肥豬血清165份（編號：C121～285）。

2.1.3生豬屠宰場*3個：采集外省市輸入的生豬血清60份（編號：D1～60）。

2.1.4疑似病例隨時采樣：可見唇部、舌面、齒齦、鼻鏡、蹄踵、蹄叉、乳房等部位出現(xiàn)水泡等臨床癥狀或消化道可見水泡、潰瘍，幼畜可見骨骼肌、心肌表面出現(xiàn)灰白色條紋，形色酷似虎斑等病理變化的豬群，隨時采樣。

2.2采樣方法

仔豬仰臥保定，其他豬站立保定，選取胸骨端與耳基部的連線上胸骨端旁開2cm的凹陷處消毒，9號針頭采血器采集血液3～4m l，壓迫止血消毒。樣品編號并填寫采樣單。

2.3樣品處理

采集的血液室溫靜置待凝固后離心機(jī)離心，將血清裝入指形管，血清樣品要求清亮無溶血，血清量不少于0.5m l，樣品編號統(tǒng)一寫在指形管側(cè)壁。

2.4運輸與保存

采集的樣品以最快、最直接的途徑送往實驗室。如果樣品能在采集后24h內(nèi)送達(dá)實驗室，則可放在4℃左右的容器中運送。24h內(nèi)不能送達(dá)的，在不影響檢驗結(jié)果的情況下，可把樣品冷凍，并以此狀態(tài)運送。樣品存放在密封的容器中，避免樣品泄露。

2.5檢測方法和判定標(biāo)準(zhǔn)

A型口蹄疫抗體檢測方法：液相阻斷ELISA；

可疑陽性個體：未免疫豬血清A型口蹄疫抗體效價≥26。

2.6操作步驟

①在ELISA板上每孔加50ul兔抗血清，封板，室溫過夜。②按排版要求稀釋待檢血清及對照血清，然后每孔加50μl稀釋好的病毒抗原，封板，4℃過夜。③ELISA板洗5次，拍干。再將抗原抗體混合物轉(zhuǎn)移至ELISA板上，每孔50μl，封板，37℃溫育1h。④洗板5次，甩干。每孔加50ul豚鼠抗血清，封板，37℃溫育1h。⑤洗板5次，甩干。每孔加50ul兔抗豚鼠酶結(jié)合物，封板，37℃溫育1h。⑥洗板5次，每孔加入50μl底物溶液，37℃溫育15mim。每孔再加50μl終止液終止反應(yīng)，立即在492nm波長下讀取吸光值。

3　結(jié)果

3.1母豬A型口蹄疫抗體結(jié)果

母豬A型口蹄疫抗體檢測結(jié)果詳見表1。

3.2育肥豬A型口蹄疫抗體結(jié)果

育肥豬A型口蹄疫抗體結(jié)果檢測結(jié)果詳見表2。

表2　育肥豬A型口蹄疫抗體檢測結(jié)果

3.3仔豬A型口蹄疫抗體結(jié)果

仔豬A型口蹄疫抗體檢測結(jié)果詳見表3。

表3　仔豬A型口蹄疫抗體結(jié)果

4　分析

（1）本次調(diào)查共采樣630份豬血清，分別來自3個種豬場、12個中小規(guī)模豬場、3個屠宰場，有效樣品為607份，通過液相阻斷ELISA方法測定A型抗體，效價≥26樣品份數(shù)為0，結(jié)果判定均為陰性。

（2）本次調(diào)查607份樣品，母豬165份、育肥豬280份、仔豬162份，A型口蹄疫抗體效價≤24590份，占總調(diào)查份數(shù)的97.2%；A型口蹄疫抗體效價2517份，占總調(diào)查份數(shù)的2.8%；A型口蹄疫抗體效價≥260份，占總調(diào)查份數(shù)的0%。

（3）本次調(diào)查母豬樣品165份，A型口蹄疫抗體效價≤24157份，占母豬樣品份數(shù)的95.2%，A型口蹄疫抗體效價258份，占母豬樣品份數(shù)的4.8%，A型口蹄疫抗體效價≥260份，占母豬樣品份數(shù)的0%，本次調(diào)查育肥豬樣品280份，A型口蹄疫抗體效價≤24271份，占育肥豬樣品份數(shù)的96.8%，A型口蹄疫抗體效價259份，占育肥豬樣品份數(shù)的3.2%，A型口蹄疫抗體效價≥260份，占育肥豬樣品份數(shù)的0%，本次調(diào)查仔豬樣品162份，A型口蹄疫抗體效價≤24162份，占仔豬樣品份數(shù)的100%。

5　討論

本次調(diào)查局限于檢測2016年3月至2016年4月兩個月期間的豬血清樣品A型口蹄疫非免疫抗體，樣本量少，時間跨度小，雖然調(diào)查結(jié)果均為陰性，但針對當(dāng)前全球A型豬口蹄疫流行率上升這一嚴(yán)峻的防控形勢，海門市應(yīng)該繼續(xù)做好以下防控工作：

（1）切實抓好免疫工作。按照省市有關(guān)動物疫病強(qiáng)制免疫計劃要求，切實抓好種公牛、奶牛的A型口蹄疫免疫工作，構(gòu)筑有效免疫屏障。

（2）加強(qiáng)監(jiān)測。通過監(jiān)測公牛、奶牛的A型口蹄疫免疫抗體和監(jiān)測豬A型口蹄疫非免疫抗體，及時發(fā)現(xiàn)隱患。

（3）切實強(qiáng)化流通環(huán)節(jié)檢疫監(jiān)管。嚴(yán)格執(zhí)行農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)行政執(zhí)法“六條禁令”，加強(qiáng)產(chǎn)地檢疫和屠宰檢疫，充分發(fā)揮公路動物衛(wèi)生監(jiān)督檢查站的執(zhí)法作用，切實強(qiáng)化活畜跨省調(diào)運檢疫監(jiān)管，有效防范外疫傳入。

（4）加大執(zhí)法力度，嚴(yán)厲打擊不按規(guī)定處置染疫動物和動物產(chǎn)品、病死或死因不明動物尸體等的違法行為。

[1]蔡寶詳.家畜傳染病學(xué)（第4版）[M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001.

[2]李克斌.2014年秋冬季口蹄疫防控注意事項[J］.獸醫(yī)導(dǎo)刊，2014，（1）：27-30.

[3]唐萬勇，丁文格.警惕A型口蹄疫在豬群發(fā)生[J］.中國豬業(yè)，2015，（2）：73-75.