回生膠囊毒理學(xué)、藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究

殷建峰

慶陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，甘肅慶陽(yáng)745000

回生膠囊毒理學(xué)、藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究

殷建峰

慶陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，甘肅慶陽(yáng)745000

目的：對(duì)回生膠囊進(jìn)行小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)，并觀察回生膠囊與化療或放療合用時(shí)對(duì)S180荷瘤小鼠的抗腫瘤增效、減毒作用，以及對(duì)S180荷瘤小鼠免疫功能的影響。方法：急性毒性實(shí)驗(yàn)因未測(cè)出小鼠致死劑量，無(wú)法測(cè)定LD50，故改測(cè)最大給藥量；藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)采用回生膠囊8.1、2.7 g生藥/kg（體質(zhì)量）給荷瘤小鼠灌胃。結(jié)果：小鼠灌胃給藥回生膠囊未發(fā)現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，1日最大給藥量為42 g/（kg·d），是臨床人日口服劑量0.09 g/（kg·d）的467倍；對(duì)環(huán)磷酰胺（CTX）化療或X射線放療抗小鼠S180肉瘤有增效作用；對(duì)CTX或放療減少S180荷瘤小鼠白細(xì)胞和紅細(xì)胞數(shù)有抑制作用；能提高小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬功能，增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能；促進(jìn)小鼠特異性抗體的產(chǎn)生和分泌，增強(qiáng)小鼠的特異性體液免疫功能；促進(jìn)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，增強(qiáng)小鼠的特異性細(xì)胞免疫功能。結(jié)論：回生膠囊1日內(nèi)過(guò)大劑量口服是安全的，與化療或放療藥物聯(lián)合應(yīng)用有增效和減毒作用，同時(shí)能增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。

回生膠囊；院內(nèi)制劑；毒理學(xué)；藥效學(xué)

回生膠囊系慶陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院血液科?？浦苿☉c陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，批準(zhǔn)文號(hào)：甘藥制字Z04101013）。其主要功效為清熱解毒，活血化瘀，化痰散結(jié)。用于治療急、慢性白血病，骨髓增生異常綜合征、惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤及惡性組織細(xì)胞腫瘤；肝癌、胃癌、食道癌、肺癌等非造血系統(tǒng)惡性腫瘤；因放、化療引起的白細(xì)胞減少、血小板減少、造血功能障礙、免疫功能低下等。本研究對(duì)回生膠囊毒理學(xué)、藥效學(xué)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)報(bào)道如下：

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)藥物回生膠囊（慶陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院提供，批號(hào)：120613），臨用時(shí)以蒸餾水配成所需濃度的溶液；貞芪扶正膠囊（甘肅扶正藥業(yè)科技股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：120421）；注射用環(huán)磷酰胺（CTX，山西普德藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：04120103）；RPMI1640（Gibco產(chǎn)品）；ConA（Sigma產(chǎn)品）；MTT（Sigma產(chǎn)品）；胎牛血清（蘭州生物制品研究所產(chǎn)品）；S180肉瘤瘤株（甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院提供）。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，清潔級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g，由蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（甘）2009-0004，醫(yī)用動(dòng)物合格證號(hào)：0002493。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器BD-6M醫(yī)用直線加速器（北京醫(yī)療器械研究所）；低溫高速離心機(jī)［Biofuge fresco（美國(guó)）］；BS110S型sartorius電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；VP-5035Q高壓蒸汽消毒鍋（長(zhǎng)春百奧生物儀器公司）；CD1200血球計(jì)數(shù)儀（美國(guó)雅培）；BPN型CO2培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器公司）；UV-9100型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器公司）；連續(xù)波長(zhǎng)酶標(biāo)儀［Benchmark P1us（美國(guó)）］。

1.4方法

1.4.1急性毒性實(shí)驗(yàn)

1.4.1.1LD50測(cè)定［1-3］取小鼠15只，雌雄各半，隨機(jī)分為A、B、C 3組，每組5只。各組小鼠禁食不禁水12小時(shí)后分別灌胃給藥，A組灌胃35.00%回生膠囊0.04 mL/g（體質(zhì)量）；B組灌胃17.50%回生膠囊0.04 mL/g（體質(zhì)量）；C組灌胃8.75%回生膠囊0.04 mL/g（體質(zhì)量）；各組均給藥1次，觀察給藥后7天內(nèi)小鼠死亡情況，見(jiàn)表1。

表1　小鼠LD50測(cè)定結(jié)果

由表1可見(jiàn)，各組小鼠給藥后7天內(nèi)均未出現(xiàn)死亡，按有關(guān)文獻(xiàn)要求改測(cè)最大給藥量。

1.4.1.2最大給藥量測(cè)定取小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組20只。各組小鼠禁食不禁水12小時(shí)后，按最大給藥量0.04mL/g（體質(zhì)量）灌胃35%（最大可給藥濃度）回生膠囊，實(shí)驗(yàn)各組分別于1日內(nèi)給藥3次、2次、1次，給藥間隔6小時(shí)。觀察記錄各組小鼠給藥后7天內(nèi)的反應(yīng)情況，以不產(chǎn)生死亡的最大劑量為最大給藥量，并按下式計(jì)算相當(dāng)于臨床1日給藥量倍數(shù)：

小鼠最大給藥量倍數(shù)=［（小鼠1日最大給藥量）/小鼠平均體質(zhì)量（20 g）］×［成人平均體質(zhì)量（600 00 g）/成人每日用量］

1.4.2抗腫瘤增效實(shí)驗(yàn)［4-5］

1.4.2.1對(duì)化療抗S180肉瘤的增效作用在無(wú)菌條件下抽取接種S180肉瘤細(xì)胞8天的小鼠腹水，按1∶3用無(wú)菌生理鹽水稀釋至約含S180肉瘤細(xì)胞1×107個(gè)/mL。取小鼠50只，雌雄各半，無(wú)菌條件下每只小鼠右前肢腋窩皮下注射S180腹水瘤細(xì)胞懸液0.2 mL，24小時(shí)后按性別體質(zhì)量隨機(jī)分為5組，每組10只。荷瘤對(duì)照組和化療藥CTX組灌胃生理鹽水；陽(yáng)性藥+CTX組灌胃貞芪扶正膠囊12.5 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量30倍）；回生膠囊大、小劑量+CTX組分別灌胃回生膠囊8.1 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量30倍）、2.7 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量10倍）。均為0.02 mL/g，各組每天灌胃1次，連續(xù)10天。接種腫瘤后第2天和第6天，除荷瘤對(duì)照組外，其余各組腹腔注射CTX 30 mg/kg。末次給藥24小時(shí)，處死小鼠，剝離瘤塊并稱重，計(jì)算抑瘤率：

抑瘤率（%）=（荷瘤對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重）/荷瘤對(duì)照組平均瘤重×100%

1.4.2.2對(duì)放療抗S180肉瘤的增效作用分組同“1.4.2.1”項(xiàng)下方法。荷瘤對(duì)照組和放療組灌胃生理鹽水；陽(yáng)性藥+放療組灌胃貞芪扶正膠囊12.5 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量30倍）；回生膠囊大、小劑量+放療組分別灌胃回生膠囊8.1g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量30倍）、2.7 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量10倍）。均為0.02 mL/g，各組每天灌胃1次，連續(xù)10天。接種腫瘤后第5天，除荷瘤對(duì)照組外，其余各組小鼠均采用醫(yī)用直線加速器低能X射線一次性全身照射（皮源距100 cm，輻射劑量為200 mGy/min，輻射時(shí)間為5分鐘）。末次給藥24小時(shí)，處死小鼠，剝離瘤塊并稱重，按下式計(jì)算抑瘤率：

抑瘤率（%）=（荷瘤對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重）×100%

1.4.3抗腫瘤減毒實(shí)驗(yàn)［4-5］

1.4.3.1對(duì)CTX抗S180肉瘤毒性的減毒作用分組同“1.4.2.1”項(xiàng)下方法。同時(shí)另取小鼠10只，雌雄各半，為正常對(duì)照組。正常對(duì)照組、荷瘤對(duì)照組和化療藥CTX組灌胃生理鹽水；陽(yáng)性藥+CTX組灌胃貞芪扶正膠囊12.5 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量30倍）；回生膠囊大、小劑量+CTX組分別灌胃回生膠囊8.1 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量30倍）、2.7 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量10倍）。均為0.02 mL/g，1次/d，連續(xù)10天。接種腫瘤后第2天開(kāi)始，除正常對(duì)照組和荷瘤對(duì)照組外，其余各組腹腔注射CTX 20 mg/kg，1次/d，連續(xù)10天。末次給藥后24小時(shí)，采血，測(cè)定紅細(xì)胞（RBC）、白細(xì)胞（WBC）、血小板（PLT）。

1.4.3.2對(duì)放療抗S180肉瘤毒性的減毒作用分組同“1.4.2.1”項(xiàng)下方法。同時(shí)另取小鼠10只，雌雄各半，為正常對(duì)照組。正常對(duì)照組、荷瘤對(duì)照組和放療組灌胃生理鹽水；陽(yáng)性藥+放療組灌胃貞芪扶正膠囊12.5 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量30倍）；回生膠囊大、小劑量+放療組分別灌胃回生膠囊8.1 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量30倍）、2.7 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量10倍）。均為0.02 mL/g，1次/d，連續(xù)10天。接種腫瘤后第5天，除正常對(duì)照組和荷瘤對(duì)照組外，其余各組小鼠均采用醫(yī)用直線加速器X射線一次性全身照射（皮源距100 cm，輻射劑量為4.0 Gy/min，輻射時(shí)間為4分鐘）。末次給藥24小時(shí)，采血，測(cè)定RBC、WBC、PLT。

1.4.4對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響［6-8］

1.4.4.1對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響于無(wú)菌條件下抽取接種S180肉瘤細(xì)胞8天的小鼠腹水，按1∶3用無(wú)菌生理鹽水稀釋至約含S180肉瘤細(xì)胞1×107個(gè)/mL。取小鼠40只，雌雄各半，無(wú)菌條件下每只小鼠右前肢腋窩皮下注射S180腹水瘤細(xì)胞懸液0.2 mL，24小時(shí)后按性別體質(zhì)量隨即分為4組，每組10只。另取小鼠10只，雌雄各半，為正常對(duì)照組。正常對(duì)照組和荷瘤對(duì)照組灌胃生理鹽水；陽(yáng)性藥組灌胃貞芪扶正膠囊12.5 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量30倍）；回生膠囊大、小劑量組分別灌胃回生膠囊8.1 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量30倍）、2.7 g生藥/kg（相當(dāng)于臨床用量10倍）。均為0.02 mL/g，1次/d，連續(xù)10天。各組小鼠分別于給藥后第2天和第7天，腹腔注射5%可溶性淀粉溶液0.5 mL/只。給藥第10天，各組小鼠腹腔注射普通肉湯2 mL/只，輕揉腹部，10分鐘后處死小鼠，剖開(kāi)腹腔，吸取腹腔液0.1 mL于潔凈載物片上，加1%雞紅細(xì)胞懸液0.1 mL，充分混勻，置于濕盒內(nèi)37℃水浴30分鐘，用生理鹽水漂洗3次，室溫自然干燥。將標(biāo)本進(jìn)行瑞氏染色，光鏡下計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞200個(gè)，按下式計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)：

吞噬百分率（%）=發(fā)生吞噬的巨噬細(xì)胞數(shù)/200個(gè)巨噬細(xì)胞×100%

吞噬指數(shù)=發(fā)生吞噬的巨噬細(xì)胞數(shù)/200個(gè)巨噬細(xì)胞

1.4.4.2對(duì)小鼠血清溶血素含量的影響（HC50法）小鼠S180肉瘤接種、分組和給藥同“1.4.4.1”項(xiàng)下方法。各組小鼠給藥第4天腹腔注射50%綿羊紅細(xì)胞懸液0.2 mL/只。給藥10天后，小鼠股動(dòng)脈放血，分離血清，56℃30分鐘滅活補(bǔ)體。將各組小鼠血清用生理鹽水稀釋600倍，取稀釋血清0.5 mL與5%綿羊紅細(xì)胞0.5 mL、1 mL按1∶10稀釋新鮮豚鼠血清（補(bǔ)體）于試管中混合，37℃水浴反應(yīng)30分鐘，冰浴終止反應(yīng)。然后1 500 rpm離心10分鐘。取上清液1 mL于另一試管，加入3 mL都氏試劑，反應(yīng)10分鐘。以不加血清而用生理鹽水代替，但同樣加入綿羊紅細(xì)胞及補(bǔ)體作為樣品空白對(duì)照管。同時(shí)取5%綿羊紅細(xì)胞0.25 mL，加都氏試劑至4 mL，搖勻放置10分鐘，作為50%標(biāo)準(zhǔn)溶血管。540 nm比色，按下式計(jì)算血清溶血素滴度：

溶血素滴度（HC50單位/mL）=［樣本OD值/50%標(biāo)準(zhǔn)溶血管OD值］×血清稀釋倍數(shù)

1.4.4.3對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響（MTT染色法）小鼠S180肉瘤接種、分組和給藥同“1.4.4.1”項(xiàng)下方法。給藥10天后處死各組小鼠，無(wú)菌下摘取脾臟，將小鼠脾臟用含抗生素的無(wú)Ca2+、Mg2+的Hank′s液沖洗3次，剝?nèi)グぃ脽o(wú)菌玻璃平皿中，加入2 mL完全細(xì)胞培養(yǎng)液，用無(wú)菌T.B.注射器芯在100目鋼網(wǎng)上研磨，用2～3 mLRPMI 1640液沖洗過(guò)濾成單個(gè)脾細(xì)胞懸液。計(jì)活脾細(xì)胞數(shù)（臺(tái)盼蘭染色法），活細(xì)胞應(yīng)不少于95%。用完全細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋成106個(gè)/mL脾細(xì)胞懸液。將脾細(xì)胞懸液加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，0.1 mL/孔，每個(gè)樣本平行4孔，前兩孔每孔加入10%μg/mLConA溶液0.1 mL，后兩孔每孔加入細(xì)胞培養(yǎng)液0.1 mL作為平行對(duì)照。置5%CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)60小時(shí)，每孔加1mg/mLMTT溶液0.1mL，37℃反應(yīng)6小時(shí)。棄去上清液，用pH7.4，0.01MPBS洗滌2次，棄去上清液，加酸化異丙醇0.2 mL/孔，室溫反應(yīng)10分鐘，在酶標(biāo)儀640nm處讀取OD值，按下式計(jì)算淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)：

淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)=加入ConA孔OD值/加入培養(yǎng)液孔OD值

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2　結(jié)果

2.1急性毒性實(shí)驗(yàn)給藥后觀察7天，3個(gè)給藥組均未出現(xiàn)死亡，也未發(fā)現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)。小鼠最大給藥量為42 g/（kg·d），相當(dāng)于人臨床日用量0.09 g/（kg·d）的467倍，見(jiàn)表2。

2.2對(duì)CTX抗S180肉瘤的增效作用CTX能減輕S180肉瘤小鼠的瘤重，荷瘤對(duì)照組與CTX組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）?；厣z囊和CTX聯(lián)合應(yīng)用，亦能減輕S180肉瘤小鼠的瘤重，與CTX組比較，大、小劑量組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），說(shuō)明回生膠囊對(duì)CTX抗小鼠S180肉瘤有增效作用，見(jiàn)表3。

2.3對(duì)放療抗S180肉瘤的增效作用放療能減輕S180肉瘤小鼠的瘤重，荷瘤對(duì)照組與CTX組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）?；厣z囊和放療聯(lián)合應(yīng)用，亦能減輕S180肉瘤小鼠的瘤重，與放療組比較，大、小劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明回生膠囊對(duì)放療抗小鼠S180肉瘤有增效作用，見(jiàn)表4。

2.4對(duì)CTX抗S180肉瘤毒性的減毒作用與正常對(duì)照組比較，荷瘤對(duì)照組小鼠RBC、WBC和PLT無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。CTX可降低荷瘤小鼠的WBC和RBC，荷瘤對(duì)照組與CTX組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但對(duì)荷瘤小鼠的PLT無(wú)明顯影響?；厣z囊和CTX聯(lián)合應(yīng)用，可對(duì)抗CTX降低荷瘤小鼠WBC和RBC的作用，與CTX組比較，大劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表5。

表2　小鼠最大給藥量實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3　回生膠囊對(duì)CTX抗S180肉瘤作用的影響（±s）

表3　回生膠囊對(duì)CTX抗S180肉瘤作用的影響（±s）

注：與CTX組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

組別只數(shù)劑量/（g·kg-1）瘤重/g抑瘤率/%荷瘤對(duì)照組10-1.60±0.31**CTX組10-1.12±0.2830.0貞芪扶正膠囊+CTX組108.340.84±0.24*47.5回生膠囊大劑量+CTX組108.100.81±0.22*49.4回生膠囊小劑量+CTX組102.700.82±0.26*48.8

表4　回生膠囊對(duì)放療抗S180肉瘤作用的影響（±s）

表4　回生膠囊對(duì)放療抗S180肉瘤作用的影響（±s）

注：與放療組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

組別只數(shù)劑量/（g·kg-1）瘤重/g抑瘤率/%荷瘤對(duì)照組10-1.85±0.25**放療組10-1.42±0.2723.2貞芪扶正膠囊+放療組108.341.14±0.21*38.4回生膠囊大劑量+放療組108.100.97±0.20**47.6回生膠囊小劑量+放療組102.701.11±0.24*40.0

表5　回生膠囊對(duì)CTX抗S180肉瘤毒性的影響（±s）

表5　回生膠囊對(duì)CTX抗S180肉瘤毒性的影響（±s）

注：與CTX組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

組別只數(shù)劑量/（g·kg-1）RBC（×1012）/LW BC（×109）/LPLT（×109）/L正常對(duì)照組10-8.46±1.25**4.57±1.24*829.3±195.3荷瘤對(duì)照組10-7.80±1.17*5.73±1.31**932.1±218.5 CTX組10-5.69±1.213.27±1.14909.4±245.8貞芪扶正膠囊+CTX組108.347.46±1.69*4.61±1.29*952.0±234.3回生膠囊大劑量+CTX組108.107.31±1.48*4.79±1.34*869.9±263.6回生膠囊小劑量+CTX組102.706.75±1.343.97±1.75942.8±213.2

2.5對(duì)放療抗S180肉瘤毒性的減毒作用荷瘤對(duì)照組小鼠RBC、WBC和PLT無(wú)明顯變化，與正常對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。放療可降低荷瘤小鼠的WBC和RBC，荷瘤對(duì)照組與放療組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但對(duì)荷瘤小鼠的PLT無(wú)明顯影響。回生膠囊和放療聯(lián)合應(yīng)用，可對(duì)抗放療降低荷瘤小鼠WBC和RBC的作用，與放療組比較，大劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表6。

2.6對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響荷瘤對(duì)照組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)降低，正常對(duì)照組與荷瘤對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?；厣z囊能增加小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)，與荷瘤對(duì)照組比較，大、小劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明回生膠囊可提高小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬功能，增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功，見(jiàn)表7。

2.7對(duì)小鼠血清溶血素含量的影響（H C50法）荷瘤對(duì)照組小鼠血清溶血素水平降低，正常對(duì)照組與荷瘤對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）?；厣z囊能提高小鼠血清溶血素水平，與荷瘤對(duì)照組比較，大、小劑量組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說(shuō)明回生膠囊能促進(jìn)小鼠特異性抗體的產(chǎn)生和分泌，增強(qiáng)小鼠的特異性體液免疫功能，見(jiàn)表8。

2.8對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響（MTT染色法）荷瘤對(duì)照組小鼠淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)降低，正常對(duì)照組與荷瘤對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）?；厣z囊能增加小鼠淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)，與荷瘤對(duì)照組比較，大、小劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），說(shuō)明回生膠囊能促進(jìn)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，增強(qiáng)小鼠的特異性細(xì)胞免疫功能，見(jiàn)表9。

表6　回生膠囊對(duì)放療抗S180肉瘤毒性的影響（±s）

表6　回生膠囊對(duì)放療抗S180肉瘤毒性的影響（±s）

注：與放療組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

組別只數(shù)劑量/（g·kg-1）RBC（×1012）/LW BC（×109）/LPLT（×109）/L正常對(duì)照組10-8.46±1.43**4.61±1.37957.8±243.7荷瘤對(duì)照組10-7.91±1.28*5.19±1.54*981.4±225.9放療組10-6.42±1.153.56±1.21815.2±198.6貞芪扶正膠囊+放療組108.347.39±1.464.89±1.35*920.5±283.4回生膠囊大劑量+放療組108.107.85±1.29*4.91±1.20*946.8±290.2回生膠囊小劑量+放療組102.706.83±1.414.20±1.23873.1±248.8

表7　回生膠囊對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響（±s）

表7　回生膠囊對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響（±s）

注：與荷瘤對(duì)照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

組別只數(shù)劑量/（g·kg-1）吞噬百分率/%吞噬指數(shù)正常對(duì)照組10-52.46±6.67**1.69±0.52*荷瘤對(duì)照組10-43.15±4.231.15±0.38貞芪扶正膠囊組108.3448.62±5.31*1.40±0.37回生膠囊大劑量組108.1051.70±5.74**1.76±0.41**回生膠囊小劑量組102.7048.53±5.19*1.43±0.35*

表8　回生膠囊對(duì)小鼠血清溶血素含量的影響（±s）

表8　回生膠囊對(duì)小鼠血清溶血素含量的影響（±s）

注：與荷瘤對(duì)照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

組別只數(shù)劑量/（g·kg-1）溶血素滴度/（H C50單位/m L）正常對(duì)照組10-307.8±65.4**荷瘤對(duì)照組10-173.2±46.8貞芪扶正膠囊組108.34241.6±52.5**回生膠囊大劑量組108.10264.4±60.7**回生膠囊小劑量組102.70239.1±58.1*

表9　回生膠囊對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖的影響（±s）

表9　回生膠囊對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖的影響（±s）

注：與荷瘤對(duì)照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

組別只數(shù)劑量/（g·kg-1）淋巴細(xì)胞增值指數(shù)正常對(duì)照組10-2.31±0.32**荷瘤對(duì)照組10-1.74±0.28貞芪扶正膠囊組108.342.15±0.30**回生膠囊大劑量組108.102.30±0.36**回生膠囊小劑量組102.702.24±0.33**

3　結(jié)論

對(duì)回生膠囊進(jìn)行小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)，因未測(cè)出小鼠死亡劑量，無(wú)法測(cè)定LD50，故改測(cè)最大給藥量。結(jié)果表明小鼠灌胃給藥回生膠囊，未發(fā)現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，1日最大給藥量為42 g/（kg·d），是人臨床日口服劑量0.09 g/（kg·d）的467倍；回生膠囊8.1、2.7 g生藥/kg（體質(zhì)量）給荷瘤小鼠灌胃，對(duì)環(huán)磷酰胺（CTX）化療或X射線放療抗小鼠S180肉瘤有增效作用；8.1 g生藥/kg（體質(zhì)量）給荷瘤小鼠灌胃，對(duì)CTX或放療減少S180荷瘤小鼠白細(xì)胞和紅細(xì)胞數(shù)有抑制作用；8.1、2.7g生藥/kg（體質(zhì)量）給荷瘤小鼠灌胃，能提高小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬功能，增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能；能促進(jìn)小鼠特異性抗體的產(chǎn)生和分泌，增強(qiáng)小鼠的特異性體液免疫功能；促進(jìn)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，增強(qiáng)小鼠的特異性細(xì)胞免疫功能。

實(shí)驗(yàn)表明回生膠囊1日內(nèi)過(guò)大劑量口服是安全的，與化療或放療藥物聯(lián)合應(yīng)用有增效和減毒作用，同時(shí)能增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南［S］.北京：衛(wèi)生部藥政管理局，1991：203-204.

［2］國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.中藥新藥研究的技術(shù)要求［S］.北京：國(guó)家藥品監(jiān)督管理局，2000：24-25.

［3］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1993：113-118.

［4］徐叔云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：1430-1440.

［5］陳子珺，李云森，韋群輝，等.臭參對(duì)S180荷瘤小鼠化療增效減毒及免疫功能的影響［J］.中成藥，2012，34（10）:1848-1851.

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［7］李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.上海：上?？萍汲霭嫔?，1991：159.

［8］黃彬紅，傅穎媛，徐靜，等.金邊瑞香對(duì)荷S180瘤小鼠免疫功能的影響［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19（10）:2376-2377.

Experimental Study on the Pharmacodynamics and Toxicology of HuiSheng Capsules

YIN Jianfeng
Pharmaceutical Preparation Department of Qingyang Municipality TCM Hospital，Qingyang 745000，China

Objective:To perform acute toxicity test of HuiSheng capsules on the mice，and to observe synergized and attenuated actions of HuiSheng capsules combined with chemotherapy or radiotherapy on S180tumor-bearing mice，and its influence on the immunity of S180tumor-bearing mice.Methods:Lethal doses of the mice didn′t been tested out in acute toxicity test，and LD50couldn′t been detected，therefore maximum administration dosage has been tested；tumor-bearing mice accepted intragastric administration of HuiSheng capsules in the dosage of 8.1 and 2.7g/kg（body mass）in pharmacodynamic experiment.Results:No obvious toxic reaction has been found when the mice accepted intragastric administration of HuiSheng capsules，maximum administration dosage within one day was 42 g/（kg·d），467 times of human daily oral dose 0.09 g/（kg·d）in clinic；HuiSheng capsules showed synergized action on S180tumor of the mice undergoing cytoxan（CTX）chemotherapy or X-ray radiotherapy；it inhibited CTX or radiotherapy induced reduction of white blood cell counting and red blood cell counting of S180tumor-bearing mice；it raised phagocytic function of phagocytes，enhanced the body′s nonspecific immunity；promoted the production and secretion of specific antibodies，and enhanced specific humoral immune function of the mice；promoted the proliferation of splenic lymphocytes，and enhanced specific cellular immunity of the mice.Conclusion:It′s safe to take HuiSheng capsules in large dose within one day，it shows synergized and attenuated actions when it is combined with chemotherapy or the drugs of radiotherapy，at the same time it could enhance the body′s immunity.

HuiSheng capsules；hospital preparations；toxicology；pharmacodynamics

R587.1

A

1004-6852（2016）05-0026-06

2015-02-26

殷建峰（1969—），男，副主任中藥師。研究方向：院內(nèi)制劑。